原位杂交技术及其在果树研究中的应用

原位杂交技术是近年来快速发展起来的一门新技术,本文介绍了原位杂交技术的基本原理、方法及其发展前景,以及该技术与其它生物学技术相结合而形成的一些新技术。综述了这些技术在果树研究中的应用情况。     

集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯

目的：通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ（IFN-Con-m2）,以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇（PEG）修饰的新型药物分子。 方法：采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ（IFN-Con-m1）基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）。IPTG诱导后,表达的IFN-Con-m2经包含体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。 结果：IFN-Con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFN-Con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108IU/mg。 结论：构建了IFN-Con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFN-Con-m2,建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。     

百合杂种系间杂交障碍的克服及3种幼胚离体培养方法的比较研究

分别以麝香百合(Longiflorum,L)'White Fox'、亚洲百合(Asiatic,A)'Conneticut King'、东方百合(Oriental,O)'Sorbonne'及喇叭百合(Trumpet,T)'Royal Goden'为亲本,用切割柱头法进行杂交,采用离体培养技术对杂种幼胚进行抢救,并运用基因组原位杂交技术对所得杂种进行鉴定.结果显示,在所选的6个杂交组合中,切割柱头授粉能不同程度地克服除LL×TT之外的5个杂交组合的受精前障碍;胚、胚乳及胚珠3种外植体的离体培养萌发率分别为100%、21.5%和1%,所得植株占所得杂种的比例分别为9.6%、89.9%和0.5%;基因组原位杂交分析显示,所获植株均为真杂种.结果证明,胚、胚乳及胚珠培养是从幼胚获得百合杂种植株的高效途径,且能有效防止伪杂种混杂,胚乳培养是获得百合杂种一代的主要方式.     

昆虫不育技术防治柑橘大实蝇研究概况

柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)是柑橘果树上的重要害虫,我国在20世纪80、90年代曾经成功利用昆虫不育技术防治柑橘大实蝇的危害。本文从人工饲养、不育昆虫的获取以及野外释放等方面对利用昆虫不育技术防治柑橘大实蝇进行了综述,以期为我国柑橘大实蝇的可持续治理提供参考。     

增温对青藏高原高寒草甸生态系统固碳通量影响的模拟研究

低温被广泛认为是高寒草甸生态系统首要限制性因子,因此增温可能会在某种程度上促进初级生产力,但是也可能由于土壤水分、N素营养状况的改变形成新胁迫而抑制生产力提高。此外,生态系统呼吸由于增温而提高的幅度也可能高于初级生产力提高的幅度,造成总碳库平衡的改变。利用青藏高原海北高寒草甸实测数据对生态系统过程模型Biome-BGC(V.4.2)进行了参数化,并利用研究区实测土壤水分(0-40 cm)和其它观测数据对模型进行了检验,证明模型模拟结果较为可靠。模型使用2005-2008年的海北气象站实测气象数据包括气温、降水等作为驱动数据,模拟了增温1.2-1.7℃下青藏高原海北定位站高寒草甸生态系统碳通量的变化,并整合分析增温试验平台上已发表的试验,与模拟结果进行对比,探讨增温对海北高寒草甸生态系统碳收支的可能影响。结果表明:2005-2008年青藏高原高寒草甸生态系统为弱的碳汇,短期增温导致系统净碳固定增加。增温直接影响系统碳通量,也通过土壤水分和土壤矿化氮变化间接影响碳通量,相比土壤水分和氮素,增温对影响碳通量变化过程中的效应更大;研究也揭示,在增温条件下,植物对土壤矿化氮的吸收量小于有机质分解产生的土壤矿化氮量,土壤矿化氮含量增加。     

甘菊CMO同源基因的分离与表达分析

利用半嵌套巢式PCR结合RACE技术从菊科植物甘菊[Chrysanthemum lavandulifolium(Fisch.ex Trautv.)Makino]中分离得到了一个长度为1 450 bp的片段.序列分析结果表明,其开放阅读框全长1 140bp,编码379个氨基酸残基;在GenBank 比对并进行系统进化分析可知,该片段为CMO同源基因,命名为ClCMO.利用不同胁迫处理进行分析发现,在非胁迫条件下ClCMO基因在甘萄茎、叶、花叶中均有表达信号,在根中没有表达;其可以响应干旱、高盐胁迫和脱落酸(ABA)的诱导,不响应冷热胁迫,并且其表达在水杨酸(SA)诱导下受抑制.这些结果表明,ClCMO基因是提高植物耐干旱、高盐能力的有效基因资源.     

寄生取食Cry1Ab杀虫蛋白的粘虫幼虫对伞裙追寄蝇寄生率及生长发育的影响

【Aim】 To demonstrate the effect of transgenic Bt-crop on the bionomics of the tachinid fly Exorista civilis Rondani, the parasitism rate and life history parameters of E. civilis developed from larvae of the oriental armyworm, Mythimna separata (Walker), fed on artificial diets with Cry1Ab toxin were investigated in laboratory. 【Methods】 M. separata larvae were fed on diets containing 0, 3.125, 6.25, 12.5 and 25 μg/g of Cry1Ab toxin, respectively, and used as the host for E. civilis. The parameters related to the parasitism and the growth and development of E. civilis on the host were observed and recorded. 【Results】 The results showed that the parasitism rate and fecundity of the fly on M. separata larvae feeding on diets containing various doses of Cry1Ab protein were insignificantly different (P≥0.05), suggesting that host selective behavior of the E. civilis is not affected by the dose of Bt-toxin in the caterpillar. The developmental period (egg-larva, pupa, adult oviposition and generation), emergence rate, sex ratio, and fecundity of E. civilis developed from M. separata larvae treated by various concentrations of Cry1Ab toxin were insignificantly different (P≥0.05). However, the survival rate of the maggots in the host feeding on diet containing 3.125 μg/g of Cry1Ab toxin was significantly greater than that of the control and the rest treatments (P<0.05), while insignificantly different among the remained 4 treatments (P≥0.05). The pupal weight significantly declined as the concentration of Cry1Ab toxin fed by their hosts increased (P<0.05). The pupal weight in the control group was 49.8 mg, while that in treatment groups of 6.25 and 25 μg/g Cry1Ab toxin was only 41.0 and 36.7 mg, respectively. 【Conclusion】 These results indicate that parasitizing host M. separata larvae fed with Cry1Ab toxin has no dramatically negative effect on parasitoid E. civilis. This study provides a basis for the evaluation of the risk of transgenic Bt-crops on the tachinid parasitoids in fields.     

新疆核桃早实特性及RAPD分析

用RAPD技术进行新疆核桃早实特性的分子标记研究,用180个10-mer随机引物分别扩增早实和晚实近等基因池DNA,筛选出5个多态性引物,结果只有引物OPG15（5’-ACT GGG ACT C-3’）在早实近等基因池及其个体中能重复扩增出一条约710bp的特异片段OPG15 710,而晚实近等基因池及其个体中无此特异片段,将OPG15 710克隆于pUCm-T载体,筛选阳性克隆用限制性内切酶Pst1消化,表明克隆片段大小正确。实步分析认为,OPG15 710可能是与核桃早实特性相关的分子标记,该标记仍在研究之中,该研究将为进一步克隆早实基因,实现早实优质,探索早实机制奠定基础。