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目的:建立Aurora-A高表达的稳定细胞系,并探讨Aurora-A高表达对食管癌细胞侵袭和MMP-9蛋白表达与活性的影响。方法:利用脂质体法稳定转染Aurora-A表达质粒,通过Westernblot和RT-PCR鉴定Aurora-A高表达的稳定细胞系。利用细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力,并通过Western blot、ELISA和明胶酶谱的方法观察MMP-9的蛋白表达水平和活性。结果:建立了Aurora-A高表达的稳定细胞系,且Aurora-A高表达能增加食管癌细胞的体外侵袭能力,并提高了MMP-9的蛋白表达水平和活性。结论:初步阐明了Aurora-A促进食管癌细胞侵袭的作用以及分子机制,为Aurora-A可能成为治疗食管癌的有效靶点提供了依据。 相似文献
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为了研究去整合素echistatin RGD(Arg-Gly-Asp) 模体周边氨基酸突变后对其生物学功能的影响,根据echistatin序列设计合成6个片段,利用重叠延伸PCR法合成cDNA,使echistatin RGD模体周边序列变为ARGDNM (D27→N),与载体pTXB1连接后转化E.coli BL21(DE3),建立echistatin (ARGDNM)的表达体系．工程菌经IPTG诱导后融合蛋白表达量占菌体总蛋白约30%,几丁质亲和纯化后,DTT裂解释放目的蛋白分子量约5.4 kD．体外血小板聚集和体内鸡胚绒毛尿囊膜 (chick chorioallantoic membrane, CAM)血管新生实验结果表明,echistatin (ARGDNM)抑制血小板聚集的作用减弱,而其抑制血管新生的作用增强．RGD模体周围氨基酸的改变影响了去整合素的生物学功能,echistatin (ARGDNM)增强了与αⅤβ3结合的特异性,本工作为研究特异性更强的去整合素药物奠定了基础． 相似文献