萤光素酶表达质粒pEE14.1-luc的构建及表达

目的:为研究10 kb以上DNA疫苗质粒的体内电穿孔递送,构建萤光素酶报告基因表达质粒p EE14.1-luc,并验证其表达。方法:从质粒p GL3-CMV中通过酶切、补平和纯化的方法获得萤光素酶基因luc,克隆入p EE14.1载体,构建重组表达质粒p EE14.1-luc,瞬时转染293T细胞,采用Western印迹、流式细胞术和免疫荧光等方法对萤光素酶基因在体外的表达情况进行验证,并运用活体成像仪检测萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结果:经菌液PCR鉴定和测序验证,p EE14.1-luc与预期设计完全一致;流式细胞术检测luc阳性表达率为22.41%,免疫荧光检测可见绿色荧光表达,Western印迹检测在相对分子质量为62×103处显现目的蛋白条带;同时,利用活体成像技术也检测到萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结论:p EE14.1-luc表达质粒构建成功,为研究DNA疫苗体内表达机制和体内电穿孔递送条件优化奠定了基础。     

云南大学专辑简介

<正>云南大学生命科学学院发轫于1937年,其前身为云南大学植物学系.1938年,云南大学校长、著名数学家、教育家熊庆来教授基于云南独特的生物资源、生态环境、开展生物学研究之便利条件以及学术影响,改植物学系为生物系,凡历60余年.1997年,云南大学生物学和化学学科结合,组建为生命科学与化学学院.     

中国单顶孢属三新记录种

陀螺单顶孢图1Monacrosporium bembicodes(Drechsler)Subram.,J.Indian Bot.Soc.42:293,1963.Dactylella bembicodes Drechsler,Mycologia29:491,1937.在CMA培养基上菌丝无色,扩展,分隔,宽2-5μm;分生孢子梗高250-450μm,单生,不分枝,顶端着生单个分生孢子;分生孢子阔纺锤形,顶端钝圆,基部渐尖细、平截,36-43.2(40)×16.8-21.6(20.5)μm,3-4个分隔,4个隔为主。可通过微循环产孢方式或直接在一些分生孢子梗上形成小分生孢子,小分生孢子倒卵圆形,10-19×4-5μm,0-1个分隔。捕食器为收缩环。图1陀螺单顶孢Monacrosporium bembicodes(Drec…     

VEGF特异的2’-脱氧修饰siRNA能够有效的抑制VEGF的表达和小鼠鼻咽癌异体移植瘤的生长

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在肿瘤血管生成中起重要作用,并在多数肿瘤中表达上调,为使用针对VEGF的小干扰RNA（VEGF siRNA）治疗肿瘤提供了重要的作用靶点,然而,不清楚VEGF表达的大幅上调是否会影响VEGF siRNA的干扰效率．本文研究VEGF siRNA能否在VEGF的表达大幅上调的鼻咽癌细胞（CNE）中有效抑制VEGF的表达,并进一步研究VEGF siRNA作为潜在的抗癌制剂的应用方法．为增加siRNA的稳定性,对VEGFsiRNA进行了2’-脱氧（2＇-deoxy）化学修饰,再将修饰后的VEGF siRNA导入经低氧诱导而高表达VEGF的CNE细胞,30h后用ELISA,Western blot结果分析和RT-PCR等方法鉴定其抑制CNE细胞表达VEGF的效果,结果证明VEGF的表达被明显抑制,用化学修饰的VEGF siRNA治疗裸鼠的鼻咽癌移植瘤,将VEGF siRNA与脂质体混合后,注射到肿瘤局部,然后进行超声照射,每周治疗2次,3周以后处死裸鼠、分离肿瘤并测量瘤重．结果显示上述治疗能明显抑制鼻咽癌移植瘤的生长．     

头状轮生链霉菌中丝裂霉素C抗性基因的克隆及功能研究

头状轮生链霉菌(\%Streptoverticillium caespitosus\%)ATCC27422是抗肿瘤药物丝裂霉素的主要产生菌,实验通过诱变筛选获得不产生丝裂霉素同时对丝裂霉素C敏感的阻断变种S6,并以它为受体宿主,以质粒pIJ699为载体,建立野生型头状轮生链霉菌菌株ATCC27422的基因库。采用鸟枪法克隆技术,从库中筛选获得含有丝裂霉素C抗性基因的62kb外源片段的克隆子。将含此外源片段的质粒pLX5导入变铅青链霉菌(\%Streptomyces lividans\%)获得表达。并且首次成功地运用电穿孔法将pLX5导入野生型菌株中,使其对丝裂霉素C的抗性大幅度提高：最低抑制浓度(MIC)由原来的200μg/mL上升至1000μg/mL以上。摇瓶发酵实验表明：单位菌量的ATCC27422(pLX5)的丝裂霉素产量高于野生菌株ATCC27422,因此丝裂霉素C抗性与产量之间存在一定的相关性。     

食线虫真菌资源研究概况

食线虫真菌是指寄生、捕捉、定殖和毒害线虫的一类真菌,这类真菌是自然界中线虫种群控制的重要因子,也是动植物病害生物防治的重要研究材料,具有特殊的研究意义和经济价值。目前全世界共报道700余种食线虫真菌,包括捕食线虫真菌380余种,线虫内寄生真菌120余种,产毒真菌270余种和大量机会真菌。针对丰富的食线虫真菌资源,近年来世界各国尤其是中国科学家对其进行了广泛研究,在捕食线虫真菌资源的分类、系统进化、生态分布、有性无性联系等方面的研究取得了重要进展,在线虫内寄生真菌侵染宿主的方式及产毒真菌的次生代谢产物挖掘等方面也进行了广泛研究,文章综述了以上研究进展并简述了食线虫真菌资源的生物防治应用概况。     

植物与病原真菌互作的形态变化及其生理、生化机制和基因调控

本文从生理、生化、酶学及基因调控等方面对植物与病原真菌互作过程中的形态变化进行了综述,以期为植物抗病方面的研究提供参考     

基因芯片接触式点样条件的优化

样品的点制是基因芯片制备中的关键一步,影响因素众多,如点样液和液面高度、基片的选择、控制湿度、点样针运行速度、与基片接触时间等。对玻片点制各条件进行了摸索和优化,并对膜芯片的点制参数进行筛选,以期得到规整和重现性好的样品点。     

2006年冬季长江口海域表层沉积物中甲藻孢囊的分类学研究

于2006年12月23日至2007年2月3日,采集长江口海域(121° ～127°E, 30°～32.5°N)19个站位0～10cm的底泥样品,根据孢囊的形态特征共鉴定出分属5大类的27种甲藻孢囊类型.其中自养型孢囊10种,异养型孢囊17种,9种为国内首次报道,它们是Scrippsiella sp.、Scrippsiella crystallina、Pentapharsodinium tyrrhenicum、Scrippsiella sp.1、Scrippsiella sp.2、Cochlodinium sp.cf.Geminatum、 P.sp.1、P.sp.2 和Gotoius abei,并发现了Alexandrium tamarense/A.catenella complex、 A.minutum/A.affine complex两种有毒种,Polykrikos kofoidii、Gonyaulax spinifera complex (Spiniferites mirabilis*)和Gonyaulax spinifera complex (Spiniferites cf.ramosus*)3种有害种.各站位孢囊物种数在1～15种之间,M4-13和N11-4最低,O7-6最高,且种类组成上基本以异养型甲藻孢囊为主.在长江口、苏北、杭州湾、舟山海域、外海海域分别鉴定出15、15、12、15、13种甲藻孢囊类型.对每种孢囊的分类学特征和分布情况进行了详细的描述,丰富了长江口海域甲藻孢囊种类记录,对研究该海区的甲藻群落结构及其目标赤潮生物的种群动力学具有重要意义.