链霉菌基因克隆载体及基因文库的构建

利用麦迪霉素产生菌中分离的质粒pSMY1(10．8kb),将pIJ30的硫链丝菌素抗性基因(tsr)克隆到psMY1上,获得了具有硫链丝菌素抗性选择标记质粒pSJ10。通过DNA体外缺失,片段播入、λ-COS片段的插入及与大肠杆菌质粒的重组等基因技术,获得了一系列psMY1衍生质粒,包括双标记质粒pSM3,大肠杆菌／链霉菌穿梭质粒pBMJ2和穿梭粘粒pNMJ1。通过对这些质粒的分析,确定了质粒psMY1的复制必需区为3．06kd的EcoRI—sphI片段。质粒pSJ10、pSM3、pNMJ1具有可选择标记,多个单一确切的可克降位点,有一定范围的宿主并能在链霉菌中稳定存在等特点,故可作为链霉菌基因克隆的载体。其中pNMJl(11．15kb)是大肠杆菌／链霉菌穿梭粘粒,能有效地运载28—38kb的外源DNA片段,并能在体外包装λ噬菌体外壳,转导大肠杆菌。利用载体pNMJl,通过λ-噬菌体蛋白体外包装,在大肠杆菌中建立了螺旋霉素产生菌的基因文库,其基因覆盖率可达90％。重组DNA分子可通过转化转移到链霉菌中。     

麦迪霉素4"-O-丙酰基转移酶(mpt)基因结构的研究

对含有麦迪霉素4"-O-丙酰基转移酶(mpt)基因的BamHI-BamHI 8.0kb的DNA片段进行限制性酶切分析,绘制出了含有21个酶切位点的限制性酶切图谱。以含有碳霉素异戊酰基转移酶基因(CarE)的2.4kb DNA片段为探针,经Southern blot分子杂交,将mpt定位于一个EcoRI-EcoRI-Pstl 3.0kb的DNA片段上,将该片段克隆至大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒载体pWHM3上,获得重组质粒pWFPE。含有pWFPE的螺旋霉素产生菌产二素链霉菌(S.ambofaciens)及变铅青链霉菌(J.lividans)TK24均可将内源产生的或外源加入的螺旋霉素酰化为4"-O-丙酰螺旋霉素。对EcoRI-EcoRI-PstI 3.0kbDNA片段上mpt基因进行序列分析,在该片段上有一个开放阅读框架,它以ATG为起始密码子,以TGA为终止密码子,与其序列对应的编码产物含有388个氨基酸。Mpt基因的G+C mol％为68.0,密码子第三位上G+C mol％为91.5。Mpt基因编码的氨基酸序列与CarE基因编码的氨基酸序列的相同性为67.6％,相似性为86.4％。在起始密码子上游6bp处存在…     

抑癌基因WWOX和FHIT在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因包含WW域的氧化还原酶(WWOX)和脆性组氨酸三联体(FHIT)在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2006-2009年有完整临床和病理资料的膀胱尿路上皮癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱尿路上皮癌和5例癌旁组织中WWOX和FHIT的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对WWOX和FHIT的表达进行定量分析,并用SPSS13.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果 WWOX和FHIT的表达在膀胱尿路上皮癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱尿路上皮癌与癌旁组织相比,差异有显著性(P<0.05)。结论 WWOX和FHIT在膀胱尿路上皮癌中的低表达是膀胱尿路上皮癌发生过程中的早期表现,通过联合检测可预测膀胱尿路上皮癌的预后。     

双乙酰生物传感器的研究

试验研究了粪肠杆菌(Enterococcus faecalis)中双乙酰还原酶的提取纯化,以及双乙酰生物传感器制备和测定性能。以双乙酰还原酶和还原型辅酶I(NADH)共固定作为工作酶 膜,用Fe²⁺／Fe和双乙酰还原过程中产生的NAD⁺／NADH组成生物传感器,可准确测定0．1～0.5μg／Ml浓度范围内的双乙酰含量,响应时间小于2min。9d内传感器工作性能稳定。研究表明,啤酒内典型的金属离子和有机物在相应浓度内不影响传感器工作性能。同时．试验初步解决了辅酶的再生和溶氧干扰问题。     

水曲柳节律基因LHY启动子的克隆和功能分析

以水曲柳基因组DNA为模板,用Site Finding-PCR法扩增得到节律基因LHY（late elongated hypocotyl）启动子序列,长度为1 360 bp。PLACE启动子预测工具分析表明,序列中含有转录必备的TATA box、CAAT box以及一些非生物胁迫和激素响应元件等。构建植物GFP瞬时表达载体p PXGFP-P-LHY,农杆菌介导转化烟草叶片和白桦悬浮细胞,GFP检测结果表明,LHY启动子能够启动GFP基因在烟草和白桦细胞中表达,且对非生物胁迫（低温、高温、盐）产生响应;构建植物GUS报告基因整合表达载体p PCXGUS-P-LHY,农杆菌介导法瞬时转化烟草,GUS染色结果表明,LHY启动子的活性具有不同程度的时空特性。     

施用化肥对黑土地区线虫群落组成及多样性产生的影响

本文针对玉米生长期内施用化肥对东北黑土地区线虫群落组成及多样性产生的影响进行了研究,共获得14科,16属,其中头叶科（Cephalobidae),小杆科（Rhobditidae) ,真滑刃属（Aphelenchus),垫刃属（Tylenchus)为优势科／优势度指数分析比较了施肥和不施肥试验小区土壤线虫群落多样性分布规律,其中Shannon多样性指数和丰富度指数是评价线虫群薄对化肥投入最敏感的指数。     

绞股蓝多糖体外抗氧化活性研究

研究绞股蓝多糖的单糖组成及抗氧化活性.采用气相色谱(GC)分析绞股蓝多糖的单糖组成,通过体外抗氧化评价体系研究绞股蓝粗多糖(GPMPP)和精制多糖(GPMP)的总还原力、清除DPPH自由基、羟自由基的活性以及抗脂质过氧化作用.结果显示,绞股蓝多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,物质的量比为1.39∶3.76∶1.00∶1.64∶4.98∶5.88.绞股蓝多糖具有较好的还原能力,对DPPH自由基和·OH具有较强的清除能力,并且对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化和Fe2+-H2O2诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化具有较好的抑制作用.以上结果表明,绞股蓝多糖具有明显的抗氧化活性.     

谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶研究进展

谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶(PHGPx)是生物体内一种重要的抗氧化酶。它是一种硒依赖性蛋白,在谷胱甘肽(GSH)的参与下能特异性地还原磷脂氢过氧化物(PLOOH)和胆固醇氢过氧化物(ChOOH),从而保护生物膜免受过氧化损伤。它还是核酸等生物大分子的重要保护剂,并且在细胞凋亡调控中发挥作用。     

改良Pereira髓过氧化物酶快速染色法及应用

目的　为了使髓过氧化物酶 (MPO)染色快速准确、安全可靠 ,对Pereira碘化钾MPO染色方法做了进一步改进。方法　采用将碘化钾溶于Wright Giemsa染色液中的新配方 ,使试剂更稳定、保存时间长 ,并简化了操作、缩短了染色时间。结果　此法与Washburn联苯胺法比较 ,两者阳性率十分相近 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　改良Pereira髓过氧化物酶法阳性反应标本存放多年不褪色 ,是目前众多碘化钾法中较理想的MPO染色方法之一。     

葫芦藓精子发生过程中胞间连丝与胞质桥的超微结构

从超微结构水平上对葫芦藓(Funaria hygrometrica Hedw.)精子发生过程中胞间连接系统的结构及其变化动态进行了研究。结果表明,同一区中的相邻生精细胞由大量胞质桥相连,而不同区的细胞之间则不存在胞质桥。胞间连丝存在于套细胞之间以及套细胞与生精细胞之间, 但它在生精细胞间不存在。在精子器发生的后期,当精子细胞壁开始降解时,同一个精子器中所有的精子细胞似乎都由扩大的胞质桥相互连接。胞质桥一直保持到精子分化的后期,最终精子细胞同步分化成精子。胞间连丝与胞质桥具有不同的内部结、分布以及生物发生机制,这表明它们在精子器的发育过程中可能扮演着不同的角色。