红豆杉抗苯丙氨酸细胞系的筛选及悬浮培养特性

通过胁迫筛选法筛选红豆杉抗－苯丙氨酸细胞变异系,并比较了该细胞系与同步培养的原型细胞系悬浮培养的几项生理指标,结果表明,抗苯丙氨酸细胞系的紫杉醇含量显著高于原型细胞系的3－5倍,并且抗性细胞系的生长速率,细胞活性,pH值,胞内可溶性糖含量及褐变强度均与原型细胞系存在显著差别。     

寄生植物锁阳茎的发育解剖学研究

锁阳茎的初生分生组织由原表皮、基本分生组织以及在基本分生组织中呈波浪式环状排列的原形成层束组成。茎的增粗是由于呈波浪式环状排列的维管束,其“波浪”上下幅度逐渐增大,即从“浪”的基部到“浪”顶端维管束数目由4个逐渐增加到10－12个。维管束数目不断增加是由于：（1）由髓射线薄壁细胞反分化产生分生组织束,分生组织束活动产生新的维管束;（2）维管束中分化出一列或几列薄壁细胞,导致该维管束被分化出的薄壁细胞分成2－3个独立的维管束。     

银杏种子和叶的蛋白质分析

采用分级提最方法提取银杏（Ginkgo biloba L.）种子和银杏叶蛋白质,并进行各组分蛋白质含量测定和银杏种子后熟过程中蛋白质含量动态变化的分析。结果表明,银杏种子以水溶性和盐溶性蛋白质为主,银杏叶以醇溶性蛋白质为主。银杏叶中主要蛋白质在HPLC柱中的保留时间为3.457min,相对含量达70%以上。银杏叶蛋白质含有丰富的亮氨酸、缬氨酸、赖氨酸和色氨酸,其含量分别为20.23%、13.35%、4.81%和3.73%。萌发种子胚体中的蛋白质主要是醇溶性蛋白质和谷蛋白类蛋白质。在种子萌发过程中,胚乳蛋白质含量明显增加,播种后第3周和萌发时总蛋白质含量达到高峰。     

An Arabidopsis embryonic lethal mutant with reduced expression of alanyl—t RNA synthetase gene

In present paper,one of the T-DNA insertional embryonic lethal mutant of Arabidopsis is identified and designated as acd mutant.The embryo developmant of this mutant is arrested in globular stage,The cell division pattern is abnormal during early embryogenesis and results in distubed cellular differentiation.Most of mutant embryos are finally degenerated and aborted in globular stage,However,a few of them still can germinate in agar palte and produce seedlings with shoter hypoctyl and distorted shoot meristem.To understand the molecular basis of the phenotype of this mutant,the joint fragment of T-DNA/plant DNA is isolated by plasmid rescue and Dig-labeled as probe for cDNA library screening.According to the sequence analysis and similarity searching,a 936 bp cDNA sequence(EMBL accession #:Y12555)from selectoed positive clone shows a 99.8%(923/925bp) sequence homolgy with Alanyl-tRNA Synthetase(AlaRS) gene of Arabidopsis thaliana.Furthermore,the data of in situ hybridization experiment indicate that the expression of Ala RS gene is weak in early embryogenesis and declines along with globular embryodevelopment in this mutant Accordingly,the reduced expression of Ala RS gene may be closely related to the morphological changes in early embryogenesis of this lethal mutant.     

竹叶精油和头香的OGC—MS—DS研究

本文以阔叶箬竹,毛金竹和四季竹为代表,用SDE法和大孔树脂顶空吸附法联合收集芳香成分,用毛细管气相色谱／质谱／计算机用（CGC／MS／DS）技术,对竹叶的精油和头香进行剖析,共检出144种挥发性化合物,其中22种为三种竹叶所共有,芳香成分以醛,醇,呋喃,酮类为主,C5－C8中等链长的含氧化合物占主导地位,是竹叶清香的物质基础,其中C6化合物起了关键作用,重要的C6尬发有（E）－2－乙烯醛,（Z）－3－乙烯醇,2－乙基－呋喃,己醛和己烯等。     

抗赖氨酸加苏氨酸莲体细胞变异体的筛选

对籽莲红花建莲（Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａｃｖ．Ｈｏｎｇｈｕａｊｉａｎｌｉａｎ）和白心湘莲（Ｎ．ｎｕｃｉｆｅｒａｃｖ．Ｂａｉｘｉｎｘｉａｎｇｌｉａｎ）杂交而成的幼胚的子叶、胚轴及幼胚叶（芽）形成的愈伤组织,施以赖氨酸加苏氨酸胁迫培养３０天,从中筛选出抗性愈伤组织并形成再生植株。低浓度的赖氨酸加苏氨酸促进愈伤组织的生长,而高浓度的赖氨酸加苏氨酸则抑制愈伤组织生长,直至具有致死作用,这种致死作用是因为高浓度的赖氨酸加苏氨酸抑制了天冬氨酸合成途径中的天冬氨酸激酶和高丝氨酸脱氢酶造成的,细胞发生变异后对赖氨酸和苏氨酸产生了抗性,即与天冬氨酸合成途径有关的氨基酸增加。抗性愈伤组织与未胁迫的愈伤组织的氨基酸测定表明,在总计１７种氨基酸中,抗性愈伤组织有１４种氨基酸含量超过原始愈伤组织,１种持平,２种不及原始愈伤组织。再生抗性植株的莲籽氨基酸测定显示,在１７种氨基酸中,有１２种超过母本红花建莲,１５种超过父本白心湘莲。     

微载体上依赖于整全蛋白α2亚基的细胞与细胞外基质的粘附

Vero细胞是肾上皮细胞,合成并分泌层粘连蛋白和IV型胶原,从而在细胞外形成对细胞生长、迁移等有重要影响的细胞外其质膜。已知影响细胞与细胞外基质相互作用的蛋白质分子是整合蛋白。微载体所提供的三维立体培养条件与细胞在体内的生长、迁移条件相似,为在体外研究体内类似过程提供了很好的模型。通过蛋白质印迹法可以检测到：正常培养条件下,在微载体上培养48小时,Vero细胞表达整合蛋白α2亚基（Fig.la);如果同时加入层粘蛋白,α亚基的表达量显著提高（Fig.1b)。正常培养条件下,培养10天,Vero细胞在微载体上形成密集的多层生长,α2亚基表达量明显高于培养初期（Fig.1c)。间接免疫荧光标记（Fig.2)和免疫电镜观察（Fig.3）证实：在层粘连蛋白作用下,α2亚基大量表达,并定位于细胞“附着班”位置的细胞膜上。此时,如果再用抗层粘蛋白抗体处理,可观察到原“附着斑”消失,α2亚基在细胞内呈散布状（Fig.4)。整合蛋白α2亚基的表达和与层粘连蛋白的“附着斑”提供了Vero细胞在微载体上附着和迁移的基础。可能,不同的细胞外基质可以通过不同的整合蛋白来调节细胞活动。     

鼠体突变型p53外源基因的垂直传递和转位观察

外源基因用于制作转基因鼠并能成功地传递到子代已是不争的事实。但是,有关研究转基因的大小以及对其功能的影响却鲜见报导。本实验对体突变型p53基因－作为外源基因在172^Arg-Leu－体突变型p53基因的双转基因鼠家系中的遗传行为进行了研究。以体突变型p53基因的XhoI-ApaLI片段为探针,对雌性双转基因鼠＃4491及其子代进行Southern blot分析（Fig.2)。通过Betagen Meter测定,比较杂交膜上探针的吸附量得知：子鼠＃5074等体内的外源p53基因的拷贝数是其亲本34491的3倍。Fig.1为＃4491与雄性FVB鼠杂交后代的家系谱。杂交F1的子代中,那些外源p53基因拷贝数是其亲代（F1）3倍的鼠（如＃5071和＃668）、其后代中继续出现这种基因拷贝数的变化。取待测鼠＃5074的脾细胞制备染色体,经G染色,以WAP－双转基因－SV40连结p（A）的结构为探针,进行原位荧光测定。Fig.3表明：b所指的外源p53基因从所在的染色体上发生跳跃（jump in),出现在c和d所指的位置上。可能,整合在＃4491染色体上的外源p53基因有两组,一组是稳定整合的,传代时,可以被传递到所有子代上;另一组是非稳定整合的,由于一些未知因素,在传递过程中被扩增、并发生了跳跃现象。也许,特定位点上转基因的拷贝数有一个限量,适量则稳定;反之、则不稳定。     

一种新的微量蛋白电沪汲超敏感染色技术

本文报道了一种新的微量蛋白电泳及超敏感染技术。该技术对Bio-Rad公司的制胶模具进行了改进,使普通样品槽变成了样品孔（Fig.1);借助体视显微镜进行取样和上样;改进普通的胺银染色方法为铬银染色方法,简化了操作程序,提高了灵敏度。利用微等电聚集对单个南瓜（Cucurbita moschata)花粉（φ≥10μm）中的可溶性蛋白进行了电泳分析,显示的蛋白带达13条（Fig.2）;结合冰冻操作和显微操作方法,可以将单个未受精的蝗虫卵和蟾蜍卵从前部（卵孔处）到后部切割成许多等份,经超薄聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的结果表明,在长翅黑背蝗(Euprepocnemis shirakii)的卵细胞中（2．7mm长,切成10等份）,有6种蛋白沿轴向显示出了梯度变化和区域分布情况（Fig.4),在东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis)的卵细胞中（4．0mm长,切成30等份）也显示出蛋白质的区域化分布信息(Fig.5),对花背蟾蜍（Bufo raddei)卵（3．0mm长,切成24等份）进行的电泳分析表明,至少有一种乳酸脱氢酶（LDH）的活性在卵细胞的两极之间表现出梯度分布情况（Fig.3）,本文最后对该技术的应用前景进行了探讨。