蝮蛇类凝血酶基因的分析及表达研究

从蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ）毒腺中抽提总ＲＮＡ,经ＲＴＰＣＲ扩增该基因,克隆后经全序列测定,蝮蛇类凝血酶ｐａｌａｓｅ的ｃＤＮＡ长７０８个核苷酸,即编码２３６个氨基酸;根据同源性,推测该类凝血酶ｐａｌａｓｅ的活性中心为Ｈｉｓ４１、Ａｓｐ８６和Ｓｅｒ１８２;二硫键为Ｃｙｓ７Ｃｙｓ１３９、Ｃｙｓ２６Ｃｙｓ４２、Ｃｙｓ７４Ｃｙｓ２３４、Ｃｙｓ１１８Ｃｙｓ１８８、Ｃｙｓ１５０Ｃｙｓ１６７和Ｃｙｓ１７８Ｃｙｓ２０３;该蝮蛇毒类凝血酶ｃＤＮＡ序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。构建Ｔ７启动子控制下的ｐａｌａｓｅ的大肠杆菌表达质粒,ＩＰＴＧ诱导ｐａｌａｓｅ获得表达。     

控制理论在生物医学中的应用

本文以生理学方面的应用为主,分三方面简要地介绍控制理论的基本概念及其在生物医学上的应用。第一部分主要介绍了经典控制理论中的频率法及系统分析方法在血压控制系统等方面的应用。第二部分指出了数学模型及模拟在生物医学中应用的意义,并通过对体温等系统的模拟研究为例,说明这种方法的应用。第三部分说明系统辨识与参数估计方法在生物医学中应用的实际可能性,并以血糖系统的计算机控制为例,作了进一步的介绍。文后附有相应的参考文献。     

人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究

研究了重组人肿瘤坏死因子(rhTNFα)及其突变体[Lys²]-人肿瘤坏死因子[Lys²]-rhTNFα)的基因工程下游工艺。rhTNFα和[Lys²]-rbTNFα的温控表达工程菌株在B-BTaunE 10型15L自控罐中经发酵每升可得50g湿菌体。rhTNFα和[Lys²]-rhTNFα的表达水平仍能保持在50％以上,且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀,然后依次用DEAE—Sepharose FF、CM-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析进行分离纯化,由每升发酵液菌体最终可得1g左右的纯品,纯度达到98％左右,rhTNFα的比活为～1.5×10⁸IU／mg,[Lys²]－rhTNα的比活为～6×10⁸IU／mg。     

嘴壶夜蛾的形态、生活史及昼夜节律

嘴壶夜蛾Oraesia emarginata (Fabricius)是危害水果果实的重要害虫之一, 其成虫和幼虫取食不同的寄主植物, 可以作为理想的嗅觉研究模式昆虫。为了全面地了解嘴壶夜蛾的形态特性和生物学特性, 本实验通过室内饲喂和红外摄像机观察, 对嘴壶夜蛾各虫态的外部形态、 发育以及昼夜活动节律进行了系统研究。结果表明： 嘴壶夜蛾的各龄幼虫可以通过体色, 体表色斑的类型、 位置和数量, 以及腹足的数量进行区别。通过蛹的生殖孔和成虫触角能够很好地区别雌雄。在室内饲养条件下, 嘴壶夜蛾的寿命为53.18±1.70 d, 存活率为63.62%±2.15%, 其中幼虫的发育历期最长, 存活率最低, 卵的发育历期最短, 存活率最高, 雄成虫的存活时间显著长于雌成虫（P=0.008）。6龄幼虫的发育历期（5.29±0.15 d）显著长于其余各龄幼虫（P<0.001）。同一龄发育中期幼虫的体长和体重显著大于将蜕皮幼虫和刚蜕皮幼虫（P≤0.037）; 第2-6龄刚蜕皮幼虫的体重和体长与前一龄发育中期幼虫之间没有显著差异（P≥0.106）。幼虫在光期的孵化、 蜕皮和化蛹比例高于暗期, 而成虫在暗期的飞行、 产卵比例高于光期, 成虫的飞行随着暗期时间的增加而逐渐变少, 光期成虫的飞行主要在开灯之后1 h。成虫交配集中在暗期的第3-5 小时。本研究结果有助于制定有效的嘴壶夜蛾防治措施, 而且为嘴壶夜蛾作为嗅觉研究模式奠定基础。     

中国棉铃虫P450家族的CYP6B2基因与抗药性关系

运用ＲＴ－ＰＣＲ技术从棉铃虫五龄幼虫扩增到一个６２７ｂｐ的ＤＮＡ片段,测序表明这一片段为ＣＹＰ６Ｂ２基因的功能保守区,以这一片段为探针对棉铃虫除除虫菊酯抗性（Ｒ）及敏感（Ｓ）品系的总ＲＮＡ进行点杂交。ＲＮＡ点杂交表明未经氰戊菊酯诱导的情况下Ｒ品系的ＣＹＰ６Ｂ２基因的ｍＲＮＡ水平明显高于Ｓ品系,即为转录水平的调控,而经氰戊菊酯诱导后杂交表明Ｓ品系明显０被氰戊菊酯诱导,但Ｒ品系不被诱导。由此推测,棉铃     

常用实验动物不同组织部位肥大细胞异质性的组织学特点比较

目的探讨并比较六种常用实验动物不同部位肥大细胞异质性的形态学特点。方法应用麻醉后处死的方法,取小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬和猴的皮肤、肺脏、乙状结肠和脾脏组织,经4%中性缓冲甲醛溶液或Bouin’s液固定后,制作常规组织切片,分别作HE、甲苯胺蓝、阿尔新蓝-藏红和P物质免疫组织化学染色,镜下观察并应用彩色病理图像分析软件进行形态学分析;另取皮肤组织固定于磷酸缓冲戊二醛溶液,制作常规超薄切片,透射电镜下观察肥大细胞超微结构。结果六种动物不同组织中肥大细胞各有其分布特点,且在形态大小、异染性及染色特性等方面表现各异,肥大细胞密度和形态学参数差异有显著性（P〈0.05）;豚鼠、犬和猴皮肤肥大细胞颗粒具有特殊亚微结构;小鼠皮肤组织内可见P物质免疫阳性肥大细胞和神经纤维,犬脾脏内可见P物质免疫阳性肥大细胞。结论在六种实验动物的同一组织中以及同一种动物不同组织中,肥大细胞具有明显的异质性,此异质性对采用实验动物开展与肥大细胞功能相关的动物实验研究具有重要参考价值。