桔梗SRAP反应体系的优化

目的：建立适合桔梗的比较稳定的SRAP反应体系,用于桔梗遗传多样性分析。方法：用改进的CTAB法提取桔梗叶片的总DNA,通过对不同镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的SRAP扩增反应的效果。结果：桔梗SRAP扩增反应的最佳体系：模板DNA 20ng,引物0.8μmol/L,dNTP150μmol/L,MgCl22.0mmol/L,TaqDNA聚合酶1unit,10×Buffer2.0μL;反应程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,35℃退火1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,50℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环;最后72℃延伸5min,4℃保存。结论：按此优化的SRAP条件进行实验,重现性良好,可用于桔梗遗传多样性分析。     

镁缺乏和过量胁迫对纽荷尔脐橙叶绿素荧光特性的影响

以2龄枳砧纽荷尔脐橙为材料,研究了镁缺乏和过量胁迫对叶片叶绿素含量和叶绿素荧光特性的影响。结果表明,镁缺乏胁迫导致老叶叶绿素含量显著降低,而新叶叶绿素含量无显著下降;镁过量胁迫显著抑制老叶叶绿素含量的下降,而促进了新叶叶绿素含量的降低。镁缺乏和过量均导致不同叶龄叶片的光化学效率(Fv/Fm)和相对电子传递速率(rETR)降低,但镁缺乏胁迫的影响显著大于镁过量胁迫。缺镁第4个月时,2龄秋梢、1龄春梢、1龄夏梢和晚夏梢叶的Fv/Fm分别比对照低了13.9%、12.6%、2.9%和2.0%,rETRmax值分别比对照低35.7%、56.2%、32.6%和15.2%;而镁过量胁迫叶片的Fv/Fm分别比对照低了0.5%、2.2%、3.4%和1.5%,rETRmax分别为对照的110.1%、68.8%、87.2%和84.5%。缺镁2龄秋梢、1龄春梢和1龄夏梢叶片的非光化学淬灭系数(NPQ)先升后降,热耗散能力显著下降,且显著低于镁过量胁迫。因此,在夏季高光照条件下缺镁胁迫对纽荷尔脐橙光合作用的影响显著,且大于镁过量胁迫,缺镁纽荷尔脐橙叶片易发生光抑制,产生光伤害。     

资阳香橙砧木CjSPL基因家族鉴定及表达模式分析

鳞片启动子结合类蛋白(squamosa promoter binding protein-like,SPL)家族是一类参与调控植物生长发育以及响应环境胁迫的重要转录因子,但在柑橘等多年生果树中的研究较少。本研究以柑橘一种重要的砧木——资阳香橙(Citrus junos Sieb.ex Tanaka)为材料,基于plantTFDB转录因子数据库和甜橙基因组数据库鉴定并克隆出资阳香橙15个SPL家族基因,命名为CjSPL1–CjSPL15。序列分析表明,CjSPLs的开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为393–2865 bp,编码130–954个氨基酸;系统进化树将15个CjSPLs分为9个亚家族;基因结构和保守结构域分析预测出20个不同的保守motif和SBP基本结构域;启动子顺式作用元件分析预测出20种启动子元件,其中包含植物生长发育、非生物胁迫及次生代谢物相关元件。通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)分析了CjSPLs在干旱、盐和低温胁迫下的表达模式,较多CjSPLs在胁迫处理后显著上调表达。本研究为后续深入研究柑橘及其他果树SPL家族转录因子功能提供参考。     

随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立

指数富集配基的系统进化(SELEX)技术是一种新的组合化学技术.体外构建了一个长度为81 nt、含有35个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件.通过对比不对称PCR和生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA.由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高,因此选择以微孔板为介质,分离与靶蛋白结合的适配子.经过9轮循环筛选,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(C蛋白)的结合率从0.5%上升到32.5%.     

VEGF121-KLAK融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达及纯化

目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化VEGF121与两性分子KLAK的融合蛋白,为进一步研究其抗肿瘤血管形成作用奠定基础。方法:用RT-PCR法扩增目的基因,插入表达载体pET28a后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对产物进行SDS-PAGE及Western印迹分析。结果:克隆出目的基因,构建了融合蛋白表达载体,诱导表达后经SDS-PAGE检测表明获得了目的条带。结论:在大肠杆菌中高效表达并纯化了融合蛋白VEGF121-KLAK。     

丙型肝炎病毒 NS3 螺旋酶寡核苷酸 适配子的筛选与鉴定

为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒 (HCV) NS3 螺旋酶 (NS3h) 的寡核苷酸适配子 (aptamers). 利用 SELEX 技术,以 HCV NS3h 为靶分子,从体外合成的 81 bp 随机单链 DNA 文库中筛选与 HCV NS3h 特异结合的寡核苷酸适配子 . 克隆测序后,进行了解离常数 (K_d) 测定和 Clustal W 软件包分析适配子一级结构 . 经过 8 轮循环筛选,随机 ssDNA 库与 HCV NS3h 的结合率从 0.45% 上升到 29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分 5 个家族,其中 4 个家族具有共同的保守序列 . 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子 H2 与 HCV NS3h 特异结合的亲和力最高,K_d值为 140 nmol/L. 适配子 H2 (10 μmol/L) 在体外对 HCV NS3h 的活性具有一定的抑制作用,抑制率达 44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗 HCV NS3h 的寡核苷酸适配子 .     

转基因水稻中外源基因的荧光原位杂交(FISH)分析

利用荧光原位杂交(FISH),在供试8个转基因水稻株系的染色体上检出了转入的外源基因barnase-ps1片段.其中两株系各检出了两个不同的信号位点,而其他株系均只检出一个信号位点.所有染色体着丝粒区都没有杂交信号.结合Southern杂交及表达分析发现,大多数株系中,整合在染色体端部区的barnase基因表现为高水平表达,而靠近着丝粒区的则表现为低水平表达,表明表达水平与转基因整合位置可能存在一定程度的相关性.表达水平与拷贝数无明显相关.本文还利用多色荧光原位杂交(Multi-color FISH)技术,进行了barnaseps1片段与报道基因pHctinG的共杂交,多数情况下,barnase-ps1片段与报道基因整合在染色体的同一位置.     

正在来临的糖组学

基因组学和蛋白质组学已相继来临 ,受到了人们的关注。糖组学也悄然跟随 !1 .基因组、蛋白质组、糖组Ｃｒｉｃｋ于 1 95 8年提出“ＤＮＡ→ＲＮＡ→蛋白质”作为基因信息传递的中心法则。事实上 ,生物体内的信息流并不终止于蛋白质。不仅是蛋白质还可引发一系列的生物效应 ,而且作为蛋白质的酶还可以催化合成许多各种类型的、具有生物活性的分子 ,糖类就是其中最重要的一类。结构多变、功能多样的聚糖是由一组蛋白质协同作用而合成的 ,这些蛋白质主要是众多的糖基转移酶 ,以及一些糖苷水解酶。因此可以认为 ,“蛋白质→糖类”是基因信息传递…     

缺镁胁迫对纽荷尔脐橙叶绿素荧光特性的影响

以1年生枳砧纽荷尔脐橙为材料,测定不同叶龄叶片相对叶绿素含量和荧光参数,研究缺镁胁迫对叶片叶绿素合成与荧光特性的影响.结果显示,随着叶位的升高,低镁组和无镁组秋梢叶片(老叶)的相对叶绿素含量、Fυ/Fm呈明显增加趋势,而春梢叶片(新叶)的相对叶绿素含量、F,/Fm差异不显著;随着缺镁胁迫程度的增大,叶片相对叶绿素含量、Fυ／Fm、光响应能力(△Fυ/ Fm、qP和rETR)均呈降低趋势,而非光化学淬灭(qN)呈升高趋势,低镁组老叶、新叶及无镁组新叶与对照差异不显著(P＞0.05),而无镁组老叶与对照差异显著(P＜0.05).表明,缺镁胁迫严重时不仅会导致纽荷尔脐橙老叶光合能力降低,也会导致其新叶光合能力降低;短期缺镁胁迫对老叶光合能力的影响显著大于新叶,而且这种差异随着缺镁程度的增大而呈增大趋势.因此,在夏季高光照条件下缺镁纽荷尔脐橙老叶易发生光抑制,缺镁严重时甚至会产生光伤害,导致叶片早衰.     

美国用4000美元解读个人基因组

第三代人类基因组测序公司——美国Complete Genomics公司，制造出自我装配DNA纳米球列阵（self-assembled DNA nano—bolearray），并将cPAL（C0mbinatorial probe anchor ligation）技术应用到该列阵上，用读取每个独立的碱基（unchained base）的方法，解读了个人的基因组。据说采用这种方法解读人的基因组时，消费品平均成本为4000美元，详细情况在2009年11月5日的Science杂志上有所报道。