利用Gibson DNA组装技术构建人5型腺病毒感染性克隆

为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5'端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡那霉素抗性基因的pShuttle-CMV质粒为模板,PCR扩增得到KAN-ORI片段,该片段的两端均含有约30bp的HAdV-5基因组序列。将KAN-ORI片段与利用野毒扩增纯化的HAdV-5基因组混合,进行Gibson DNA组装反应;反应产物直接转化E.coli感受态细胞,涂布含卡那霉素的LB琼脂平板。挑取菌落,提取质粒,命名为pKAd5。限制性酶切鉴定的结果显示,所鉴定的质粒均含有完整的HAdV-5基因组。使用PacⅠ酶切线性化pKAd5,利用脂质体转染293细胞,转染4d后单层细胞出现病毒噬斑。拯救的病毒能够在HEp-2细胞扩增;电子显微镜观察呈现典型的腺病毒形态;提取病毒DNA,酶切鉴定的结果与预期的HAdV-5基因组相同,证实HAdV-5得到成功拯救。上述研究结果说明使用Gibson DNA组装技术构建HAdV-5感染性克隆简便易行,为其他DNA病毒基因组的克隆提供了新思路。     

甜菊组织培养物中叶绿体的超微结构与脱分代

含有叶绿体的甜菊（Ｓｔｅｖｉａｒｅｂａｕｄｉａｎａ）愈伤组织细胞转移至新鲜培养基后,导致光合片层的逐渐减少或消失,最后叶绿体脱分化形成原质体样的结构。超微结构观察表明,光合片层的减少或消失与降解及叶绿体分裂特别是不均等缢缩分裂而致基质组分和类囊体膜稀释有关。这一过程并不完全同步,一些质体含有少量正常的片展而另一些质体含有退化的片层甚至片展结构完全消失。细胞的一个明显特点是细胞器大多聚集在细胞核附近,细胞质增加并向细胞中央伸出细胞质丝。同时可观察到原质体。培养７ｄ后,许多细胞呈分生状态,细胞质富含细胞器,充满了细胞的大部分空间。此时细胞中的质体大多呈原质体状态。在细胞生长的稳定期,质体内膜组织成基质基粒片层,同时质体核糖体增加。文中讨论了高度液泡化细胞脱分化与细胞中叶绿体脱分化的关系。     

甜菊愈伤组织分生区细胞中膜内含物的超微结构研究

生长在分化培养基上的甜菊（Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）愈伤组织分生区细胞中存在双膜和多膜内含物。电镜观察表明,这些膜内含物是由一圈或多圈呈同民贺或卷绕状排列的内质网包围部分细胞质而形成的。双膜内含物内外层膜的靠细胞质表面有核糖体附着,而多膜内含物仅在其最外层潴泡的外膜上偶有和量核糖体附着。附着细胞液泡化程度的提高,多膜内含物通过液泡膜内陷而转移到液泡中或通过消化其中被包围的细胞质及内膜而转     

小半夏加茯苓汤对小鼠移植心存活时间的延长效果研究

目的:探讨小半夏加茯苓汤对小鼠心脏移植模型中移植心存活时间的延长效果及作用机制。方法:将接受过腹腔心脏移植手术的小鼠分为实验组和对照组,自移植手术当日起至术后7天,每日经口给药,通过腹部触诊判断移植心脏跳动情况,移植术后30日,取部分小鼠移植心脏进行病理检查,取脾细胞进行淋巴细胞培养,并检测培养液中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10和干扰素(IFN)-γ的浓度。取移植心脏存活时间超过30天的小鼠脾脏,通过流式细胞术检测调节性T细胞(Regulatory Tcells,Tregs)的含量。结果:与对照组相比,实验组的移植心存活时间明显延长(P0.01),心脏病理切片结果提示实验组的心脏血管病变受到了抑制,脾细胞培养液中IL-2和IFN-γ浓度明显降低,而IL-4和IL-10的浓度升高,脾细胞CD4阳性细胞中CD25和Foxp3均阳性的细胞含量明显高于对照组中同类细胞含量。结论:小半夏加茯苓汤可以显著延长小鼠移植心脏的存活时间,可能与其诱导调节T细胞的产生、改变受体小鼠体内Th-1和Th-2细胞因子的平衡及抑制IL-2、IFN-γ减轻心脏损伤有关。     

拟除虫菊酯微胶囊剂的应用研究

研究结果表明,应用二氯苯醚菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯的3种微胶囊剂对赤拟谷盗、豆蚜、小菜粉蝶和粘虫室内测定及大田试验药效均为显著。处理后6天,死亡率90％左右,各天药效相当或略高于乳油。其残效期对赤拟谷盗24天,对其他3种试虫15天左右,相当于该类药剂乳油残效期的2倍。3种微胶囊剂的药效高低顺序依次为氯氰菊酯>二氯苯醚菊酯>氰戊菊酯,和其乳油效果高低的顺序基本相同。     

成人腹泻轮状病毒ELISA方法的建立和应用

本文通过特异性试验、阻断试验、交叉试验、敏感度试验和重复性试验,建立了成人腹泻轮状病毒一酶联免疫吸附试验法(ADRV—ELISA)。应用此法检测了全国20多个省区202份病人腹泻标本,检出率为91％。采用本ELISA、核酸电泳、电镜三种方法对48份病人腹泻标本进行了双盲法检测比较,结果三种方法的阳性检出率分别为100％、85.4％、56.25％(P<0.05)。实验结果表明,本ELISA应用于检测成人腹泻轮状病毒(ADRV),具有敏感度高。特异性强等优点。     

山顶洞中赤铁矿粉的新解释

周口店山顶洞人遗址的人骨化石上曾发现撒布赤铁矿粉。过去一般的解释是,当时的人在伙伴的尸体上撒布此种红色粉末,因为它的颜色象征血液、生命,表示生者的思想里有着对另一个死者的世界的想象。     

国家二级保护植物翅果油树传粉生物学的初步研究

对翅果油树进行了传粉生物学的野外观察和实验表明：（1）翅果油树的花具有自花传粉的结构特征,同时具有蜜腺,又具备异花传粉的特征。传粉者主要是一种家养的蜜蜂。（2）翅果油树花形态结构与传粉者的形态和传粉行为非常协调和适应,昆虫的传粉部位主要是头前部和胸部。（3）蜜腺的产蜜量大,开花后1～2天蜜腺分泌量最大。对传粉昆虫竞争中具明显优势。昆虫的访花频率明显高于同花期的其他植物。（4）翅果油树没有融合生殖现象。     

脂类代谢异常在恶性肿瘤中的研究进展

过度增殖是恶性肿瘤细胞的生物学特性,为满足不断增殖及生存的需要,肿瘤细胞需重新编码代谢通路。近年来的研究认为,脂类代谢异常是肿瘤细胞的重要特征之一,肿瘤细胞中异常的脂类代谢不仅与代谢酶有关,还与代谢通路以及其他相关信号传导有关。本文通过回顾既往研究报道的肿瘤细胞脂类代谢的变化,探讨脂类代谢的异常调节与肿瘤发生的可能机制,为肿瘤的预防及治疗提供新思路。