地塞米松缓解大鼠麻醉应激作用

目的研究地塞米松与麻醉剂速眠新配伍的应用效果。方法大鼠72只随机分为3组,每组24只,A组和B组分别肌肉注射地塞米松0.1 mL/kg和1.0 mL/kg之后30 min,,对照组仅肌肉注射速眠新0.20 mL/kg。结果3组大鼠麻醉诱导时间相同,均不超过3 min;B组麻醉维持时间最长、苏醒时间最短;A组次之。A组和B组麻醉期心率和动脉平均血压均低于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。呼吸监测显示,麻醉后A组和B组的大鼠呼吸数显著高于A组（P〈0.05）。     

大亚湾潮间带软体运动的物种多样性初步研究

1999年7月在大亚湾潮间带4种不同生境（岩石岸、砾石滩、泥沙滩、沙滩）10个样方采集软体动物38种,隶属于23个科。采用丰富度指数和多样性指数对不同生境软体动物的多样性进行研究。研究结果表明,大亚湾软体动物物种丰富度指数砾石滩、岩石岸(D=4.328～9.378)>泥沙滩(D=4.328～6.493)>沙滩(D=2.886)。多样性指数也显示砾石滩、岩石岸(H′=0.429～0.842)>泥沙滩(H′=0.315～0.450)>沙滩(H′=0.182)。对上述样方聚类结果表明,软体动物种类分布及数量受底质、浪击和污染的影响。     

木质纤维素预处理抑制物产生及脱除方法的研究进展

利用纤维素酶将木质纤维素降解成可发酵性糖,然后发酵生产氢气、乙醇、丁醇等生物燃料及高附加值产品,是当今全球研究的热点。预处理是生物质转化过程中至关重要的步骤,而预处理过程中产生的抑制物对木质纤维素后续的酶解和发酵微生物有负面影响。因此了解预处理方法及其过程中产生的抑制物及脱除方法是能否高效转化生物质的基础。文中首先介绍了木质纤维素常用的两类预处理方法即化学法和物理化学法。随后阐述了不同抑制物的产生及其抑制机制,并重点介绍了多种脱毒方法。最后展望了脱除木质纤维素预处理抑制物的研究趋势:应用交联聚乙烯亚胺和金属有机骨架化合物等新型材料脱除抑制物或通过基因工程、代谢工程技术等构建抑制物耐受性菌株等。     

重金属对土壤中小麦种子发芽与根伸长抑制的生态毒性

测定了4种土壤（红壤、草甸棕壤、暗棕壤和栗钙土）条件下,Cu,Zn,Pb和Cd单一污染对小麦种子发芽与根伸长抑制主及其复合污染效应（暗棕壤条件下）。结果表明,同一浓度下,重金属对小麦根伸长抑制率均明显大于对种子发芽抑制率,植物根对金属污染的生态毒性比种子发芽敏感,土壤有机质和土壤N含量与Cu,Zn,Pb和Cd污染对小麦根伸长抑制率显著负相关（R^2OR=0.91,R^2K-N=0.92),土壤PH和阳离子交换量与Cu,Zn,Pb和Cd污染对小麦根伸长抑制率的相关性不显著（R^2PH=0.62,R^2CEC=0.60),在单一污染对小麦根伸长为刺激作用浓度（较低浓度）或为抑制作用浓度下（较高浓度）,复合污染均表现为协同作用。^     

应用HPLC测定生物制品中甲醛含量的研究

研究了直接用于液相色谱测定甲醛与2,4-二硝基苯肼的反应条件,使反应在菌疫苗类生物制品自身的pH范围内即弱酸性条件下,无需酸碱度调节,反应产物甲醛衍生物不需要有机溶剂萃取,避免损失,可直接用于液相色谱分析。在检出限及精确度方面更是优越于分光光度法。将样品用2,4-二硝基苯肼溶液衍生后,经C18化学键合硅胶为固定相,以乙睛∶水(60∶40,体积比)为流动相。紫外检测波长360 nm进行测定。方法的平均回收率为95.4%(n=5),两种生物制品6次独立测定的相对标准偏差分别为重组乙型肝炎疫苗(CHO)RSD=0.92%,吸附白喉破伤风联合疫苗RSD=3.92%。甲醛(0.6~3.0μg/mL)范围内,浓度与吸收面积值呈良好的线性关系。结果显示,该研究方法的色谱条件能准确定量、灵敏、准确、重复性好,优于药典的分光光度法,可用于实际检测分析。     

hHO-1结构预测及突变体的构建、表达、纯化和活性检测

人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)是血红素代谢的限速酶,直接调节体内胆红素水平。利用软件Spdbv程序对hHO-1进行结构模拟预测,以Ala取代第25位His残基,hHO-1活性部位的结构有较明显的改变,但据模拟推测突变后hHO-1与血红素仍然具有结合性。依据模拟结果,构建野生型和突变体表达载体pBHO-1和pBHO-1(M),并分别转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经30％-60％(NH4)2SO4盐析后纯度提高3.6倍,再经两次Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离则表达产物的纯度提高30倍。酶活性测定显示,突变体hHO-1(△hHO-1)较野生型hHO-1(whHO-1)活性下降了91．21％。本研究显示hHO-1的第25位His在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,为有效调控酶活性发挥其生物学作用提供依据。     

HAP转录因子与DNA结合的活力受细胞内氧化还原系统的调节

ＨＡＰ 转录因子（ ＨＡＰ２／ＨＡＰ３／ＨＡＰ４／ＨＡＰ５） 是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白,它能与酵母中许多启动子上游的ＣＣＡＡＴ盒（ 顺式作用元件） 专一性结合, 以增强基因的转录。在酵母ｈａｐ５ 突变株的细胞中,用酵母单杂交系统从水稻ｃＤＮＡＧＡＬ４ 表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的ｃＤＮＡ,提示细胞内的氧化还原系统可能作用于ＨＡＰ蛋白,从而对ＣＣＡＡＴ盒的结合活力起调节作用。对ＨＡＰ３ 亚基分子中半胱氨酸残基的突变实验结果支持上述推测     

PC-1解除S6K对AKT信号通路的负反馈抑制

目的:通过建立过表达PC-1的前列腺癌LNCaP细胞系及敲低PC-1表达的C4-2细胞系,探究PC-1激活AKT信号通路的分子机制。方法:将PC-1基因及针对PC-1的siRNA序列,分别克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-Myc-MCS-T2A-Puro及干扰载体pSIH1-H1-Puro,包装成慢病毒后分别感染前列腺癌LNCaP及C4-2细胞,通过Western印迹鉴定PC-1过表达及敲低效果,并检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白S6K、AKT的磷酸化水平。结果:PC-1过表达时,S6K磷酸化水平下降,而AKT的磷酸化水平上升。结论:PC-1可以通过抑制S6K激酶活性,解除其对AKT的负反馈抑制作用,从而激活AKT激酶的活性。     

一种新的克隆基因方法——重组工程应用研究初报

重组工程(recombineering)是近几年来兴起的一种基于体内同源重组的、新型的遗传工程技术。作为重组工程应用方式之一的空隙修复(gap-repair),是一种捕捉和克隆目的DNA的方法,具有操作简单、步骤少,没有突变、保真度高,不受酶切位点限制等等优点。以pACYC184为模板,PCR扩增含p15A复制子、氯霉素抗性基因和对S.cerevisiaeALD4基因同源臂的线性片段,与酵母染色体DNA共同电击转化诱导型表达了λ噬菌体重组酶活性的大肠杆菌BW25113(pKD46)感受态细胞,通过空隙修复方式,成功地从酵母染色体DNA直接捕捉到大小为1 016bp的ALD4基因部分区段,得到3188bp的重组质粒pACYC184-ALD4。为进一步掌握和充分利用该技术直接捕捉更大片段基因打下了基础。     

基于蛋白质互作评价差异表达基因的重复性

利用高通量基因表达谱数据可以识别在肿瘤与正常组织中差异表达的基因,为研究癌机理提供重要的线索。目前,在研究同种癌型的不同实验中发现的差异表达基因的交叠比例很低。这种高通量基因表达谱数据低重复性的现象严重制约了基因芯片在癌症研究中的应用。然而,已有研究表明从研究同种癌型的不同实验数据中得到的不交叠的差异表达基因倾向于扰动相同的功能。因此,在评价差异表达基因重复性时,应考虑其在生物学功能上的一致性。本文结合基因共表达和蛋白质互作关系,设计了功能重复性指标来评价差异表达基因列表的可重复性。通过分析两套卵巢癌数据,发现对同种癌型得到的差异表达基因具有很高的功能一致性(p<0.0001)。结果表明,在功能水平上评估差异表达基因的一致性具有合理性。