专利微生物菌种的保藏与发放统计分析

对WIPO公开的"国际保藏机构2001～2010年专利微生物保藏与发放"数据进行了统计分析。结果表明:全世界的专利菌种保藏量与发放量处于快速增长中;美国是专利菌种保藏与发放量最多的国家;近年中国的专利菌种年保藏量实现三连冠,但专利菌种的发放率处于极低水平。     

低温对紫外照射诱导人乳腺癌细胞凋亡的影响

采用Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８荧光染色技术,透射电镜,流式细胞术研究低温对紫外照射诱导体外培养的人乳腺癌细胞凋亡的影响。结果显示：４℃低温处理可增强紫外照射诱导人乳腺癌细胞凋亡,且低温增强细胞凋亡具有时间效应和剂量效应关系。细胞经４℃处理０,１２,２４ｈ并照射６ｍｉｎ,在培养６ｈ后各实验组细胞的调亡率开始升高,与培养０ｈ时相比差异显著（Ｐ〈０．０１）,培养１２￣１８ｈ时达到高峰（１５．４６－６４．     

应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平

将改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术应用于口蹄疫病毒感染体内和体外的定量检测以及其3D基因转录水平分析。结果表明:对样品中口蹄疫病毒基因组RNA的检测灵敏度可达l0个基因拷贝,可同时检测病毒正负链复制水平且重复性较好,所测口蹄疫病毒3D基因转录水平可高达6.9×104拷贝/μL;与实时SYBRGreenⅠ染料RT-PCR技术比较,改良的实时TagMan荧光定量RT-PCR技术检测灵敏度高6.7倍。以上结果证实,改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术在病毒检测和基因表达水平分析方面有更高的灵敏度和特异性。     

丙肝病毒全基因组克隆转染细胞体系的初步研究

采用一种含有HCV全基因组和噬菌体T7启动子和终止子序列的载体(pHCV)转染Vero-E6细胞,随后感染高效表达T7 RNA聚合酶的重组痘病毒(vTF7-3),通过vTF7-3的辅助作用,使Vero-E6细胞高效增殖HCV病毒体,建立了一种新的HCV体外细胞培养体系。RT-PCR、荧光定量PCR检测转染细胞裂解液中HCV滴度的结果显示：pHCV转染细胞内HCV基因拷贝达10^7-10^8／mL,同时有HCV正链RNA合成;免疫印迹显示该培养体系中有HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达;pHCV转染细胞经透射电镜观察,可见清晰的HCV病毒体,直径在40-50nm。这一新体系的初步建立,为研究HCV的复制机制、制备HCV疫苗和研发抗病毒药物奠定了基础。     

SARS—CoV感染Vero E6细胞诱导细胞凋亡

为了确定SARS冠状病毒(SARS—CoV)感染Vero E6是否引起细胞凋亡,我们利用细胞DNA琼脂糖电泳,感染细胞的间接荧光染色和Hoechst 33258细胞核染色,以及流式细胞仪分析等方法证明了SARS-CoV感染的Veto E6具有典型的凋亡细胞学和生物化学特征。实验证明具有细胞凋亡特征的所有细胞均为处于感染晚期的细胞。表现明显细胞病变(CPE)的细胞大多已经出现核质凝缩或形成凋亡小体进入细胞凋亡的过程。可以断定SARS-CoV感染Vero E6细胞诱发了细胞凋亡。     

牛磺熊去氧胆酸抑制两种病毒的研究

熊胆汁是自古就被用于消炎祛火的重要中药。牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)为熊胆汁的主要成分,人胆汁中也有低水平的存在。为了探究TUDCA对儿童手足口病重要病原体柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)是否有抑制作用,在病毒感染不同阶段加入TUDCA处理,通过MTT法、流式细胞术等技术检测CVA16感染的细胞存活率以及TUDCA对人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell,RD)内吞效率的影响。结果发现,TUDCA在病毒吸附进入阶段抑制CVA16感染细胞,但不影响宿主细胞的内吞活性。研究还发现TUDCA能在病毒入侵阶段抑制水泡口炎疱疹病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的感染,这提示TUDCA的抗病毒作用不具有特异性。本研究发现了TUDCA抑制CVA16和VSV病毒感染这一新用途,为抗手足口病和口炎疱疹药物的研发提供了新的思路和方案。