重组A型产气荚膜梭菌α毒素C端基因在大肠杆菌中的高效表达

在成功克隆A型产气荚膜梭菌α毒素C端基因(cpa408基因)后,发现基因N端ATG后密码子在大肠杆菌中的使用频率普遍偏低,在不改变氨基酸的前提下,对N端基因进行修饰,构建重组表达质粒pBV220cpa408,导入大肠杆菌DH5α中,经温度诱导,cpa408基因获得了高效表达,表达量达菌体总蛋白的4375%,表达产物以可溶形式存在。经Westernblot分析,表达产物能被标准抗α毒素血清识别。     

人成骨蛋白成熟肽基因在毕赤酵母中的克隆及其序列分析

采用PCR方法,根据献报道的人成骨蛋白-1（OP-1）成熟肽基因序列,设计并合一对引物,从含人成骨蛋白基因的质粒中扩增获得大小的420bp的DNA片段,连接到pGEM-T载体进行测序,证明获得人成骨蛋白成熟肽基因片段,继之以pPIC3.5k为表达载体构建重组表达质粒,并经PCR及酶切鉴定。     

鼠疫耶尔森氏菌VcrV基因在大肠杆菌中的高效表达

将测序后的鼠疫耶尔森氏菌（Yersinia pestis)LcrV基因重组质粒pGEM－T／ypV酶切,克隆于原核表达载体pBV220,构建成pBV/ypV表达质粒,转化大肠杆菌DH5α,进行PCR及酶切鉴定,筛选阳性克隆,进行温控诱导表达,SDS－PAGE检测表达产物,在相对分子质量38000处有－表达条带,经薄层扫描分析目的蛋白带占全菌蛋白的38．4％以上,主要以可溶形式存在。     

可溶性CD14基因克隆及序列分析

针对人可溶性CD14(sCD14）的cDNA序列设计引物,通过反转录PCR技术,从U937细胞中,扩增出编码人可溶性CD14的基因序列,并将其克隆至质粒pGEM－T中,通过PCR、酶切及序列测定鉴定重组载体。结果表明获得了人可溶性CD14基因片段,为下一步进行CD14表达及生物学活性研究奠定了基础。     

醋酸杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆表达

根据已知α－乙酰酸脱酸酶（α－ALDC）的基因序称,用PCR法从醋酸杆菌（Acetobacter racens)中克隆到的1kb的DNA片段,经DNA测序证明是ALDC基因,将该基因重组到质粒pBV220中,转化大肠杆菌,实现了高表达,获得了目的蛋白表达量约40％的转化子,为下步研究其酶活性奠定了基础。     

重组葡激酶的分离纯化

在构建出高表达,高活性的葡激酶工程菌株的基础上,对表达产物进行了分离纯化研究。经离子交换纯化后,纯度达８５％－９０％,回收率为５０％－６０％,经凝胶过滤后,纯度达９９％以上,回收率为６０％,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,相对分子质量为１５．５＊１０＾３,比活为１．０＊１０＾５,Ｎ端氨基酸序列与献报道的相符。     

砷引发糖尿病的研究进展

糖尿病是早已被人们认识的一种内分泌疾病,分为Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病.它除糖代谢紊乱外,还与遗传因素,环境因素,应激因素有关.近年来研究发现糖尿病的发病原因与环境中的砷密切相关,尤其2型糖尿病,2型糖尿病是一种缓慢进展性疾病,其发病中心环节是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷,尤其是胰岛素分泌第一时相的损害.砷是毒性很强的类金属元素,现已明确,砷会严重影响胰岛素的分泌以及胰岛素在周围靶器官的利用,从而诱发胰岛素抵抗.因此砷是2型糖尿病重要的危险因子之一,本文就砷元素与糖尿病的关系以及可能的机理作一综述.     

抗肉毒毒素A人源单链抗体在酵母细胞中的分泌表达

将特异肉毒抗毒素基因克隆入载体pPIC9k,G418抗性加压筛选阳性整合克隆,在毕赤酵母细胞GS115中进行分泌表达。获得了稳定分泌表达ScFv的工程菌,SDS—PAGE分析可见,目的蛋白分子量约为26kD,通过放大体积来探索重组抗毒素的诱导表达条件及纯化工艺,结果发现,1％甲醇诱导后72～84h,目的蛋白的表达达到高峰,占酵母培养上清中总蛋白的15％以上,经两步层析纯化,目的蛋白纯度可达95％。竞争活性测定结果表明,重组抗毒素在体外具有良好的活性,可竞争肉毒抗毒素马血清与毒素的特异结合。     

营养和次生物质与植物的抗虫性

植物在千万年的繁衍过程中,由于长期受以植物为食的昆虫的选择,那些对害虫没有抵抗能力的植物陆续被淘汰了。现存的植物一般都有很好的防御系统,即使是那些害虫喜食的所谓“感虫植物”也不例外。如用营养价值相似的感虫玉米品种先锋3368A幼苗和人工饲料饲养小地老虎,至第6天,饲以幼苗的幼虫体重只及饲以人工饲料的8．l％。这表明感虫玉米的幼苗也能抑制小地老虎的生长。植物能否被害虫作为寄主取决于植物体内化学成分的重量和数量。化学成分包括营养成分和次生物质。前者指植物体内的氨基酸、蛋白质、糖类、脂类和维生素等基本有机物…     

烘烤罗汉果的适宜温度探讨

为了保证罗汉果的质量,我们对烘烤罗汉果的适宜温度进行了探讨,实验结果表明,用50—75℃温度进行加工,罗汉果的质量比较好。