重组人肿瘤坏死因子纯化方法的探索

ＴＮＦ是一种具有多种生物学作用的细胞因子,高纯度ＴＮＦ的获得是进一步研究其作用机理和探讨防治方法的基础,对克隆后工程菌表达的纯化进行研究,经盐析,透析,离子交换等步骤,成功地制备了高纯度的ｒｈＴＮＦ,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,分子量１７ｋＤ,纯度〉９５％,比活性为３．４４×１０＾７Ｕ／ｍｇ,与国外同产品相似。     

仙鹤藓属（Atrichum）藓类植物组织培养再生体系的建立

报道了仙鹤藓（Atrichum undulatum(Hedw.)P.Beauv.)和仙鹤藓小形变种（Atrichum undulatum var.minus(Hedw.)Par.)的组织培养再生体系的建立。为研究仙鹤藓属（Atrichum)藓类愈伤组织的诱导和再分化,将仙鹤藓和仙鹤藓小形变种原丝体接种在含有4%葡萄糖和0.2-2.0mg/L 6-BA的MS培养基上,培养一个月后,成功地诱导出疏松、易碎的绿色愈伤组织。愈伤组织诱导和常规继代培养较适合的培养基为含4%葡萄糖和1-2mg/L 6-BA的MS培养基。当将继代培养5次的脱分化藓类愈伤组织转移到含4%葡萄糖但无任何激素的MS培养基上时,能再分化形成原丝体,而在无任何碳源的Benecke培养基土培养时,能再分化形成经原丝体阶段发育来的直立配子体。     

手机信令数据在粤港澳大湾区大气环境风险管理中的应用研究——以江门市为例

粤港澳大湾区是国际化程度、资源整合能力、经济价值和效益都极高的区域,必须高度重视其环境风险问题,避免区域生态系统和人民群众健康受到威胁。人类活动密集区的突发环境事件风险源和受体的涉及面广、来源复杂,利用传统统计数据和技术手段开展的环境风险评价越来越体现出其时效性弱、精准性差的缺点。尝试引入手机信令数据及其模拟分析的人口数据,并将其嵌入到网格化环境风险分析法中,对粤港澳大湾区的江门市大气环境风险进行评估,刻画区域环境风险空间分布特征,精准识别区域环境风险类型。研究方法是在遵循《行政区域突发环境事件风险评估推荐方法》的前提下,通过对比分析统计数据与手机信令数据得到的江门市人口空间分布、大气环境风险易损性及环境风险值,结果表明虽然两者的总体趋势是一致的,但利用手机信令数据得到的环境风险等级结果更精细化、分辨率更高、时效性更强、数据处理更高效。研究表明,基于手机信令数据开展分析显著提高了环境风险评估的风险受体人口分析精度,可为预测及管理区域环境风险提供准确参考,实现突发环境事件应急处置区域具体化、最小化,从而减小应急处理成本。     

冬小麦免耕覆盖与生物有机肥施用对土壤细菌群落的影响

为揭示保护性耕作措施对土壤细菌群落结构及多样性的影响规律,选取免耕覆盖＋施生物有机肥（NF）、免耕覆盖＋不施生物有机肥（NC）、传统耕作不覆盖＋施生物有机肥（TF）和传统耕作不覆盖＋不施生物有机肥（TC）4个处理,以农田土壤生态系统为研究对象,利用16S rDNA基因Illumina MiSeq高通量测序技术,研究了冬小麦免耕覆盖与生物有机肥施用对土壤细菌群落结构及多样性的影响。结果表明：1）与TC处理相比,NF处理显著降低了土壤pH （P=0.03^*）,增加了土壤全氮（P=0.002^**）、总碳含量（P=0.0001^**,P=0.007^**）,影响了土壤碳/氮比分配（P=0.003^**）。2）从16个土壤样本中共获得细菌27门、86纲、125目、213科和315属,其中放线菌门（Actinobacteria）、酸杆菌门（Acidobacteria）、绿弯菌门（Chloroflexi）和变形菌门（Proteobacteria）为优势菌门,其相对丰度约占总丰度的82.40%。3）与传统耕作施生物有机肥处理相比,免耕覆盖施生物有机肥增加了土壤细菌的多样性指数（Simpson指数和Shannon指数）,降低了ACE丰富度指数。4）NMDS及多元分析结果表明：土壤细菌群落丰富度指数、多样性指数均与土壤pH、速效磷和土壤碳/氮比成正相关,与土壤微生物生物量碳（SMBC）和土壤总碳成负相关;其中,土壤pH和SMBC分别是影响酸杆菌门和放线菌门的主要驱动因子。施生物有机肥和耕作措施两种因素均对土壤细菌群落结构组成产生了影响,但以施用生物有机肥对土壤细菌群落多样性的影响较明显;此外,施用生物有机肥在传统耕作和免耕覆盖两种情况下均增加了冬小麦产量,但以传统耕作施生物有机肥处理最明显。因此,传统耕作配施生物有机肥是宁夏南部山区改善土壤理化性质、增加土壤细菌群落丰富度和多样性的重要途径。     

肺炎球菌表面蛋白A(PspA)的克隆表达及交叉免疫作用

本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01, FY05, FY6B, FY19F, FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段。分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上, 成功构建重组质粒pET-pspA, 转化大肠杆菌BL21(DE3)。经乳糖诱导表达和亲和层析分离, 获得高纯度重组蛋白。通过家族专属引物PCR的方法鉴定这5种荚膜血清型肺炎球菌的PspA蛋白所属家族, 并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系。FY01 rPspA、FY6B rPspA、FY19F rPspA同属于家族Ⅰ支系1, FY05 rPspA属于家族Ⅰ支系2, FY23F rPspA属于家族Ⅱ支系3。以FY01 rPspA免疫小鼠, 在20 μg/mL免疫剂量时抗体滴度达到1: 210000, 显示了重组蛋白较好的免疫原性。Western blotting交叉免疫反应性研究表明, 抗FY01 rPspA抗血清与FY01 rPspA、FY6B rPspA和FY19F rPspA反应性较好, 而与另外两种重组蛋白几乎无反应, 提示PspA交叉免疫作用仅限于本支系内。动物保护实验表明, FY01 rPspA免疫的小鼠对FY6B、FY01 两种菌的攻击具有较好的保护作用, 对FY05、FY23F的攻击未见明显的保护作用。本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义。     

细胞电穿孔导入DNA的动态特征

本文以Ｅ．ＣｏｌｉＨＢ１０１为模型细胞,研究了不同幅度和时间常数的ＲＣ放电脉冲条件下,触发细胞穿孔,导入长度分别为４２２和１６８０ｎｍ的超螺旋长丝形质粒ｐＵＣ－１８和ｐＣＰ１０,及精胺缩合后直径为８８ｎｍ的复曲面体的质粒ｐＣＰ１０,测定了相应的细胞转化率。实验结果显示了细胞电穿孔导入ＤＮＡ的动态特征。     

岷江干旱河谷灌丛α多样性分析

通过对岷江干旱河谷植被及其环境因子的系统取样调查 ,研究了该地区植物群落的α多样性及其与环境因子的关系。土壤、植被、地形三者之间的典范相关分析结果表明 ,三者两两之间均存在着较高的相关性。土壤因子与地形因子之间 ,海拔和坡向起较大的作用 ,主要影响土壤中的全氮、有机质和土壤含水量 ;地形因子和植被之间 ,海拔和坡向影响灌木层的多样性和盖度 ;植被和土壤因子之间 ,土壤中的全氮量、有机质和土壤含水量影响灌木层的盖度和多样性。随着海拔的增加 ,草本和灌木群落的多样性都呈现出先增加后减小而后又增加的趋势 ,草本层的α多样性明显高于灌木层的α多样性 ,草本层和灌木层均在14 0 0～ 16 0 0 m和 2 0 0 0～ 2 2 0 0 m两个海拔段有较高的α多样性 ;华帚菊 -小黄素馨灌丛、金花小檗 -忍冬灌丛、绣线菊灌丛有着较高的多样性 ,西南野丁香灌丛、莸灌丛、小马鞍羊蹄甲 -白刺花灌丛的群落多样性较低 ;样带的多样性 ,灌木层 :样带 3>样带 1>样带 2 ,草本层 :样带 1>样带 3>样带 2 ;不同坡向的多样性 ,灌木层 :阴坡 >半阴半阳坡 >阳坡 ,草本层 :半阴半阳坡 >阴坡 >阳坡 ;不同坡形上的多样性 ,无论是灌木层还是草本层 ,多样性大小为凹坡 >平坡 >凸坡 ;灌木层和草本层在不同坡位上的多样性大小均为上     

S_(180)-V系细胞周期中cAMP,cGMP含量与细胞形态变化扫描电镜的观察

本实验用氚标记环磷酸腺苷(~3H-cAMP)及碘标记环一磷酸鸟苷(I~(125)-cAGP)的放射免疫法,测定了体外培养S_(180)-V系细胞周期中悬浮的M期细胞和其贴瓶细胞与均相细胞内cAMP及cGMP的含量,并对相应的细胞形态的变化做了扫描电镜观察。此外,对这三种群体细胞体积进行了测量,据此对这些细胞内cAMP及cGMP浓度进行了换算。实验结果表明:M期细胞体积的平均值接近其它时相细胞平均细胞体积的2倍,M期细胞的cAMP含量明显低于贴瓶细胞和均相细胞内cAMP含量,而cGMP含量略有提高,但差异不显著,但cAMP/cGMP比值与贴瓶细胞(非M期的其它时相细胞)及均相细胞(包括M期时相的混合细胞)相比,显著降低,相差2—3倍。用扫描电镜对上述测定的各类细胞组份进行了对应的观察,从其外形的变化表明,S_(180)-V系细胞的骨架系统很不发达,在cANP含量低的漂浮组(M期细胞)比贴瓶细胞的骨骼系统更不发达.     

齿孔酸对高尿酸血症黄嘌呤氧化酶活性的影响

采用紫外分光光度法检测齿孔酸在体外对黄嘌呤氧化酶的作用,并进行动力学研究探讨其作用机制;采用酵母联合氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠模型,观察齿孔酸对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平、血清黄嘌呤氧化酶活性、肝脏黄嘌呤氧化酶活性及血糖血脂的影响。研究发现,齿孔酸体在外能抑制黄嘌呤氧化酶活性,降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平、血清黄嘌呤氧化酶活性、肝脏黄嘌呤氧化酶活性,同时明显降低空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平,提高口服糖耐受量。结果表明,齿孔酸是黄嘌呤氧化酶竞争性抑制剂,还能缓解高尿酸血症小鼠糖脂代谢紊乱,对高尿酸血症及痛风的防治具有潜在意义。