改构的野生革耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

在野生革耳漆酶的cDNA序列3’端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA／lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA／lccT—X一33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多。其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4．5时测得比活为3．68U／mg。根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600。     

蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测

目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase。方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性。结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性。结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物。     

串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应)。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础。     

67例阴道念珠菌病临床分析及药敏试验

为了解女性性病高危人群中阴道念珠菌病的发病情况和菌群特征,笔者对性病门诊中67例阴道念珠菌病进行性病检查和化验,并对分离到的念珠菌进行菌种鉴定和体外药敏试验,现报告如下。     

烟青虫的分类地位和起源地辨析

烟青虫Helicoverpa assulta(Guenée,1852)现今分布于东亚、东南亚、大洋洲和非洲等地,但其起源地尚不清楚。本文在梳理烟青虫分类地位和系统发生资料的基础上,根据其食性、习性、地理分布及其与重要寄主植物烟草分布格局关系等资料,推断其起源地很可能是热带雨林地域。同时从烟青虫种群特性以及人类活动、大陆漂移理论等因素的作用对该推断进行解析。     

云南布朗族地区种植的地方稻种及其分布特点

对云南省4个县选择20个布朗族聚居村的622户布朗族农户,采用参与式问卷调查和实地考察相结合的方法,调查其种植的地方稻种,分析村级和户级水平的地方稻种分布特点.共调查收集到地方稻种资源53个,其中有色稻种和糯稻种各14个(各占26.4%).318户种植地方稻种,占被调查农户总数的51.1%;种植地方稻种的面积占总稻作面积的30.0%;种植地方稻种的村级丰富度平均为5.64,最高达9;而户级丰富度平均为1.29,最高达4.种植地方稻种的村级均匀度平均为0.548,户级均匀度平均为0.172.地方稻种数量在调查县间差异显著,西双版纳州勐海县27个(50.9%)>临沦市双江县17个(32.1%)>普洱市墨江县9个(17.0%)>保山市施甸县0个.在乡镇级水平上,拥有地方稻种资源最丰富的是西双版纳州勐海县西定乡22个,然后依次为临沧市双江县邦丙乡9个、临沧市双江县大文乡和普洱市墨江县景星乡均为8个、勐海县布朗山乡5个、墨江县新抚乡1个.各地区种植地方稻种数量存在较大差异的主要因素是复杂的农业生态环境、丰富的民族文化习俗和多样的饮食习惯.     

ICU 气管插管患者非计划拔管的原因、影响因素分析及护理对策

目的:了解导致ICU患者非计划拔管发生的原因及影响因素,探讨出科学有效的护理对策,为降低ICU患者非计划拔管的发生率提供依据。方法:本研究采用回顾性分析的方法,对我院2008年1月至2010年12月29例发生非计划拔管的患者进行分析,找出原因及影响因素,制定有针对性的护理对策。结果:2008年1月至2010年12月我院ICU患者非计划拔管率为4.2%,原因主要是患者自身的因素和医源性原因。影响因素依次为插管不耐受、患者气道梗阻、医护操作不当、插管方式错误、缺少有效的固定与约束及缺少有效镇静。结论:针对影响ICU患者发生非计划拔管的危险因素,制定有效的护理对策,可以切实的降低ICU患者非计划拔管发生率。     

基于SERS技术结合多变量统计分析胃癌患者血浆拉曼光谱

利用人体血浆的表面增强拉曼光谱（SERS）并结合多变量统计方法对胃癌的无损诊断分析进行了研究．检测了32例胃癌患者与33例正常健康人血浆SERS光谱,利用主成分分析（Pea）并结合线性判别分析（LDA）建立SERS光谱诊断多元统计算法模型．为验证所构建的PCA—LDA算法的有效性,将利用受试样品的工作特征（ROC）曲线方法对所构建的算法有效性进行评价．胃癌患者与正常健康入血浆SERS光谱之间的差别明显,且实验存在较好的重现性,利用PCA．LDA统计分析方法得到诊断特异性与灵敏度分别为91％与79．5％．通过SERS谱峰归属分析表明,癌症患者血浆与正常人血浆在生化成分上存在一定的差异．与正常健康人相比,胃癌患者血浆中的核酸、胶原、磷脂以及苯丙氨酸成分偏高,而氨基酸与糖类成分相对偏低．研究表明,血浆SERS光谱技术结合PCA．LDA统计分析能够很好地区分正常健康人与胃癌患者血浆．血浆表面增强拉曼光谱技术有望发展为一种无损探测与筛查胃癌的临床诊断工具．     

不同光强下交替氧化酶基因修饰的两种拟南芥叶片叶绿素荧光特性的变化

采用叶绿素荧光测定系统,研究在不同光强下交替氧化酶(alternative oxidase; AOX)基因超表达突变体(XX-2)和野生型(WT)拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片的叶绿素荧光参数的变化。结果表明:两种拟南芥叶片的最大光化学效率(Fv/Fm)没有显著差别; 而不同光强下两种拟南芥叶片的实际光量子效率(Y(II))、光化学猝灭系数(qp)均随光照强度的增加呈下降趋势; 同光强下XX-2叶片的上述参数均高于WT。非光化学猝灭系数(NPQ)与调节型能量耗散的量子产额(Y(NPQ))均随着光照强度的增加呈上升趋势; 同光强下XX-2叶片的NPQ与Y(NPQ)均低于WT。非调节型能量耗散的量子产额(Y(NO))均随光照强度的增加呈下降趋势; 当光强超过165 μmol·m^-2·s^-1后,同光强下XX-2叶片的Y(NO)高于WT; 表观电子传递速率(ETR)随着光照强度的增加均表现出先上升后下降的趋势; 同光强下,XX-2叶片的ETR高于WT。以上结果表明,交替氧化酶超表达体在不同光照条件下具有更加优化的叶绿素荧光性能。     

间接竞争ELISA测定花生植株内源水杨酸含量

以SA-N=CH-（CH2）3-CH=N-0VA为包被抗原,利用SA-NH-CH2-NH-BsA为免疫原产生的抗体,来建立能定量测定花生组织中游离水杨酸（sA）的间接竞争ELISAS-作程序,并明确该方法的工作条件以及基本参数。结果表明：该方法对sA标准品的最低检测量为10ng-mL-1,线性检测范围为10ng·mL～10·mL-1。在该范围内,标准曲线的批内和批间变异系数分别为1．90％和6．81％;花生叶片和根组织中添sr,SA的平均回收率分别为93．9％和91．0％。