尘螨变应原Der f1全序列的原核表达及生物信息学分析

目的 构建尘螨变应原Der f1原核表达体系,并了解其分子特征.方法 提取粉尘螨总RNA,用RT-PCR合成Der f1编码基因,将其克隆至pMD19-T载体,亚克隆至表达载体pET-28a( ),转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达.用生物信息学软件对测序结果进行分析并预测其空间结构.结果 从粉尘螨总RNA中扩增获得Der f1 cDNA片段,成功构建了表达质粒pET-28a( )-Der f1,Western blotting显示原核表达获得成功.测序结果提交GenBank,登陆号为EU095368,该基因长966 bp,与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸321个,属疏水蛋白,位于细胞外,信号肽位于1～18氨基酸处.同源性分析提示Der f1和Eur m1相似率为88%,而Der f1和Der p1的相似率为77%,分子进化树中粉尘螨和梅氏嗜霉螨聚成一簇.Der f1的二级结构由α-螺旋(109 aa,33.96%)、延伸链(55 aa,17.13%)、β-转角(18 aa,5.61%) 和随机卷曲(139 aa,43.30%)组成.结论 尘螨变应原Der f1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础.生物信息学分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合.     

中国特有植物银杉直播造林技术研究

目的：总结出银杉直播造林切实可行的技术方法，为珍稀树种银杉野外回归提供新的途径，并为合理保护银杉及银杉自然保护区的可持续管理提供科学依据。方法：通过设计不同地点、不同整地方式、不同遮阴度的直播造林试验，对银杉出苗率、死亡率、苗木生长等数据进行统计分析。结果：与海拔约700 m的玉溪镇插旗比较而言，银杉直播造林在海拔约1 400 m的阳溪镇青菜坪，出苗效果好，死亡率低，保存率高；整地方式以小块状整地为宜，大块状和带状整地破土面积较大，导致直播苗在裸露的地上生长，故保存率较低；当林分郁闭度超过0.7时，发芽率显著降低，苗木死亡率显著提高，说明银杉小苗不特别耐阴。结论：银杉直播造林宜选择在海拔约1 400 m、土层深厚、排水方便、黄壤或黄棕壤等与天然银杉分布立地条件相近的地方，采用小块状整地，郁闭度不宜超过0.7；银杉种子萌发有隔年出苗现象，银杉直播萌发出苗集中在5～6月，幼苗死亡高发期为6～8月，必须加强苗期前三年的管理，重点是5～8月。