核转录因子-κB与疾病治疗

核转录因子－κB是一种广泛存在的核转录因子,实验证实NF－κB的过度活化与多种疾病相关。本文综述了近年研究获得的在疾病状态下抑制NF－κB过度活化从而缓解病症的几种方法。     

大鼠20α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达

利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合基因表达系统,在鼠２０α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中得以成功地表达,亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示,重组２０α ＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其中ＮＡＤＰ的Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ．ｍｇ）,对底物２０α羟孕酮的     

用单链和PCR相结合的方法合成绿豆胰蛋白酶抑制剂基因

本文报道用单链与PCR技术相结台的合成方法合成了胰蛋白酶抑制剂基因,包括氨基酸编码顺序、起始和终止密码子,上、下游两端的EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ限性酶识别顺序等全长共248个碱基对。合成基因的编码是参考其它植物的蛋白酶抑制剂基因的同源编码和植物基因的偏爱密码子来进行设计的。合成的基因双链经限制酶EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ在两端切出粘性末端后克隆到pUCl9中,克隆基因结构的正确性经过限制酶图谱和DNA序列分析得到完全的证明。     

NF-κB的结构功能及其与疾病的关系

NF-κB蛋白家族在哺乳动物的生长发育和免疫反应中具有重要作用。NF—κB信号传导途径的改变会引起多种炎性疾病和肿瘤的发生。该主要介绍近些年来在NF—κB及其相关蛋白的主要结构和生物学功能方面的研究进展,同时揭示NF—κB蛋白家族与炎症、肿瘤疾病之间存在的关系,探讨NF—κB相关蛋白抑制剂的应用。     

Mac-1在细胞内走向的直视研究

分别构建荧光蛋白(FP, fluorescence protein)与Mac-1的两个亚基(CD11b, CD18)融合蛋白表达载体, 并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1 fused with fluorescence protein)具有与正常白细胞表达的野生型Mac-1基本一致的结构与功能的基础上, 结合应用PE标记的CD11b单抗, 通过激光共聚焦显微镜观测CD11b, CD18在PMA刺激和ICAM-1结合后于胞内的走向与归宿. 结果显示: (ⅰ) 在静态的细胞膜上看不到Mac-1, PMA活化后1 h, 胞膜上可见CD11b-PE和YFP-CD18群集, 2 h后内吞, 内吞后YFP-CD18的荧光减弱, 提示Mac-1有部分降解; 24 h后PMA再次活化, 部分CD11b-PE与YFP-CD18可再次出现在膜上, 说明Mac-1还可以被循环利用. (ⅱ) ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞作用后, 4 h内粘附增加, 同时伴有Mac-1-FP的群集, 8 h后粘附减少, 同时伴有Mac-1-FP的荧光逐渐减弱, 这一过程与PMA活化后Mac-1-FP的变化过程类似, 提示ICAM-1作用后也可能出现内吞并降解. 由以上结果可以得出结论, Mac-1活化后的走向是由胞浆内转位到质膜上, 然后内吞, 内吞后被降解或可被再利用, 与此同时粘附活性亦发生相应的变化, 提示受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一.     

重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性

为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 .     

抗肿瘤小分子多肽的来源及抗肿瘤机制

小分子多肽广泛存在于自然界,并可通过人工方法合成。目前对具抗肿瘤活性小分子多肽的研究日渐深入,它们可针对肿瘤发生发展的机制,特异性杀伤肿瘤细胞,由于具有分子小、活性高、毒性低的特点．在肿瘤的临床治疗上有重要的价值。     

大鼠20α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达

利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ）融合基因表达系统,大鼠２０α羟类固醇脱氢酶（２０αＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,２０αＨＳＤ）在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示,重组２０αＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其对ＮＡＤＰ的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏ１／（ｍｉｎ·ｍｇ）,对底物２０α羟孕酮（２０αＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ,２０αＯＨＰ）的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为５．９μｍｏｌ／Ｌ和３４７ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍｇ）,利用该表达系统大量制备大鼠重组２０αＨＳＤ,为深入研究２０αＨＳＤ的生理活性和功能创造条件。     

基因工程制备重组人降钙素类似物

构建融合表达人降钙素类似物的工程菌 ,然后纯化 GST- h CTa- Leu融合蛋白 ,凝血酶酶切后 ,再经离子交换层析、脱盐 ,获得纯度大于 90 %的 h CTa前体 .对 h CTa前体的 C末端进行修饰 ,得线形 h CTa- NH2 ,再通过复性 ,获得了具有与天然人降钙素活性相当的 h CTa.     

Mac-1-FP融合表达载体的构建、Mac-1-FP的表达与活性鉴定

分别构建表达BFP与CD1 1b的C末端、YFP与CD1 8的N末端相连接的融合蛋白的表达载体 ,并将二者转染至既无内源性Mac 1的表达同时又具有某些炎症反应信号转导系统的CHO细胞株进行表达Mac 1 FP .通过荧光显微镜观察到共转染后的CHO细胞可发出蓝色荧光和黄色荧光 ,应用Western印迹方法确定CD1 1b BFP与YFP CD1 8能够形成二聚体 ,采用流式细胞术检测确定PMA刺激Mac 1 FP可由胞浆内转位至膜上 ,测定PMA刺激前后的转染CHO细胞与其配基ICAM 1粘附活性的变化 ,证明转染CHO中的Mac 1 FP表达成功并具有野生型Mac 1的形成二聚体、膜转位、和配基ICAM 1相结合等功能 ,为进一步研究白细胞表面粘附分子Mac 1的α亚基CD1 1b、β亚基CD1 8在细胞内的走向及归宿创造了条件