SSH 法结合定量 PCR 技术研究双肌臀猪 肌肉组织的差异表达基因

利用抑制性消减杂交技术 (suppression subtractive hybridization , SSH) 成功地构建了双肌臀与非双肌臀大白猪肌肉组织差异表达的消减 cDNA 文库,获得有效克隆 686 个. 对整个文库测序分析,共获得 587 条有效序列. 利用 BLAST 在线软件与 GenBank、 GenBank EST 和 Tigr Porcine EST 等数据库进行同源序列比较,发现其中有 11 个未知新序列,可能代表“双肌臀”大白猪肌肉组织特异表达的新基因. 对文库中所包含的兰尼啶受体基因 (RYR1)、钙依赖性蛋白激酶 基因 (CAMK2)、人类胰岛素生长因子结合蛋白 -7 基因 (IGFBP7),以及 695号、 882号和480号3个新基因进行了实时荧光定量 PCR 检测,结果显示： RYR1、 CAMK2 及 IGFBP7 基因在双肌臀猪肌肉组织 RNA 池中的表达量,分别为对照的非双肌臀猪肌肉组织 RNA 池中表达量的 1.87、 1.90 和 1.85 倍; 695 号、 882 号和 480 号 3 个新的 ESTs 在双肌臀猪肌肉组织 RNA 池中的表达量为非双肌臀猪肌肉组织 RNA 池中表达量的 1.48、 1.44 和 1.78 倍. 这提示我们,上述基因的上调表达很可能与猪双肌臀性状的发生有密切的关系,可以作为研究该性状的候选基因.     

藏鸡胚胎的低氧适应特征及其血红蛋白突变效应

藏鸡能在4200 m以上海拔正常繁衍生息, 但低地鸡在模拟4200 m海拔(12.0%O₂)条件下孵化却只有3.0%的孵化率. 在两品种全期低氧和阶段低氧模拟孵化实验中, 4200 m全期低氧揭示4~11天是隐性白与藏鸡阶段存活率相差最悬殊的阶段, 12~21天相差极显著, 1~3天相差不显著. 但4200 m阶段低氧只能造成两品种孵化率显著差异, 而并不足以造成低氧阶段间阶段死亡率显著差异, 结果显示藏鸡具有优越的克服低氧损害后期不良影响的能力. 对藏鸡和隐性白鸡血红蛋白7条链全部编码序列进行多态分析, 筛选到α^D链编码基因的一个低氧功能突变位点(Met- 2D(B13)-Leu). 该突变基因为藏鸡独有, 其频率随着海拔升高而升高, 而且该突变基因频率越高的群体, 孵化率越高. 以鸡的HbD晶体为模板, 对突变血红蛋白结构和功能进行了同源预测, 结果表明Leu替代Met提供了一个更疏水环境, 有利于血红素的稳定, 从而提高了血红蛋白的血氧亲和力. 突变(Met-32D(B13)-Leu)发生的时间和地点与藏鸡家养化时间和地点密切相关.     

体细胞克隆牛和转基因体细胞克隆牛的遗传学分析(英)

分析了来自同一细胞系的体细胞克隆牛甜甜、庆庆、浒娃及来源同一培养转基因体细胞系转基因体细胞克隆牛九妹、乐娃和1个妊娠8个月转基因流产胎牛8C2以及随机抽取的1头鲁西黄牛(LX)、1头褐斯坦牛(HS)在24个微卫星位点标记牛的基因型.结果表明24个多态位点均表现出多态,等位基因数为1～5个,平均为3.17个.根据网上公布的数据,按其最高频率计算,甜甜、庆庆、浒娃、九妹、乐娃、8C2与培养细胞系、转基因细胞系间匹配概率为1.17×10^－36,根据本研究观察到的数据计算,匹配概率为1.90×10^－23;而与随机抽取的1头鲁西黄牛及褐斯坦牛的基因型分别在23和20个位点上完全不同.     

犬MC1R基因T105A基因座多态性及 与毛色性状相关性的研究The

为了检测犬MC1R基因T105A基因座的多态性,并分析该多态性与犬毛色表型的相关性,抽取111只外科手术学实验用杂种犬血液并提取DNA,记录毛色表型。采用PCR-RFLP技术,对MC1R基因T105A基因座进行基因多态性分析,并对该基因座DNA进行克隆测序;用二元变量相关分析的统计学方法分析基因座多态性与毛色性状之间的相关性。经PCR-RFLP分析结果表明,T105A基因座序列具有多态性,表现为A、B二个等位基因和AA、AB及BB 3种基因型。A、B等位基因频率分别为72.97%和27.03%,基因杂合度（H）为0.39。基因型AA频率为55.86%,BB为9.91%,AB为34.23%。对T105A多态性片段DNA克隆测序后发现,MC1R基因在编码第105位氨基酸的密码子第一个碱基存在由G到A的单碱基突变,该突变导致第105位氨基酸发生由丙氨酸向苏氨酸的改变。统计分析结果表明MC1R基因T105A基因座的多态性与毛色性状不存在显著的相关性,这可能是由于外科手术学实验用犬是杂种犬,其遗传背景不同所致,尚须在纯种犬群体中进一步研究MC1R基因对毛色的影响。 Abstract: In order to detect the polymorphism of T105A in MC1R gene in dogs and to analyze the relationship between the genetic polymorphisms and phenotypes of dog coat color, the blood samples of 111 cross-breed dogs were taken and their genomic DNAs were extracted. The phenotypes of dog coat color were recorded. The T105A locus of MC1R gene in the canine was detected through the technology of PCR-RFLP. Furthermore, the polymorphic fragments at T105A were sequenced. The relationships between the polymorphism of T105A and coat color trait were analyzed by the statistical methods of bivarate correlation analysis. By the method of PCR-RFLP, the T105A polymorphism was found with two alleles A and B and three genotypes AA, AB and BB. The frequencies of two alleles were 72.97% and 27.03%, respectively. The heterozygosity of T105A locus was 0.39. The frequencies of three genotypes were 55.86%, 34.23% and 9.91%, respectively. According to the results of sequencing, one base change from G to A at the position 105 was found at T105A locus and it altered amino acid at the position 105 from alanine to threonine. According to the statistical analysis, no significant association between the polymorphism of MC1R gene and the coat color was found and the result may be due to the differences of genetic background. Further research on MC1R gene should be done in pure breed dogs.     

用4个微卫星标记分析7个绵羊群体之间的遗传关系

分析了4个微卫星基因座BM143、OarHH35、OarAE101、BMS2508在7个绵羊群体（小尾寒羊、湖羊、乌珠穆沁羊、萨福克羊、多赛特羊、夏洛来羊、多赛特公羊×小尾寒羊母羊F1代杂种羊）286只绵羊中的遗传多态性。结果表明,这4个微卫星标记在7个绵羊群体中的等位基因数分别为9、11、14和9,其多态信息含量/有效等位基因数/杂合度分别为0.7073/3.7231/0.7314、0.8267/6.4399/0.8447、0.5743/2.5178/0.6028、0.6172/3.0712/0.6744,其中OarHH35的遗传变异最大,OarAE101最小。7个绵羊群体中小尾寒羊的遗传变异最大,湖羊的最小。基于Nei氏DA距离和DS标准遗传距离,采用UPGMA方法构建了系统发生树。该发生树将中国地方品种（小尾寒羊、乌珠穆沁羊、湖羊）和法国的夏洛来羊归为一类,将F1杂种羊、英国品种（萨福克羊和多赛特羊）归为另一类。绵羊微卫星基因分型技术为检查品种（群体）之间的遗传关系提供了一个有用的工具。 Abstract：The genetic polymorphisms of four microsatellite loci BM143,OarHH35,OarAE101,and BMS2508 were analyzed in 286 sheep of seven sheep populations (Small Tail Han sheep, Hu sheep, Ujumqin sheep, Suffolk sheep, Dorset sheep, Charolais sheep, F1 of Dorset♂ × Small Tail Han sheep♀). The numbers of alleles for BM143,OarHH35,OarAE101,and BMS2508 are 9, 11, 14 and 9 in seven sheep populations, respectively. The polymorphism information content/number of effective alleles/ heterozygosity of BM143,OarHH35,OarAE101 and BMS2508 were 0.7073/3.7231/0.7314, 0.8267/6.4399/0.8447,0.5743/2.5178/0.6028,0.6172/3.0712/0.6744 in 286 sheep, respectively. The results revealed the greatest genetic variation at OarHH35 locus and the lowest at OarAE101, the greatest genetic variation in Small Tail Han sheep and the lowest in Hu sheep among seven sheep populations. In the unweighted pair group method with arithmetic mean (UPGMA) dendrograms based on Nei's DA distance and Nei's DS standard genetic distance, the Chinese native breeds (Small Tail Han sheep, Ujumqin sheep, Hu sheep) were grouped together, then with Charolais sheep. The F1 crossbred sheep, and the two British native sheep (Suffolk sheep, Dorset sheep) also clustered together. Microsatellite genotyping in sheep provided a useful tool for examining the genetic relationships among breeds(populations).     

奶牛乳铁蛋白基因5非翻译区PCR­SSCP多态性分析

采用PCR-SSCP技术,对奶牛乳铁蛋白基因5^'非翻译区1122bp序列进行多态性分析。在该区所划分的5个亚片段上,发现 Blf 5^'-1(227bp),Blf 5^'-3(175bp)和Blf 5^'-5（293bp）3个DNA片段存在多态。进一步对这3个片段进行测序分析,在Blf 5^'-1序列中,发现位于转录起始位点上游-926和-915位分别有G→A及T→G点突变;在Blf 5^'-3片段中,-478位存在G的插入;Blf 5^'-5位点上,发生-28位的C颠换为A和+33位的G颠换为C两处突变。利用TFSEARCH （ver.1.3）软件对乳铁蛋白基因5^'非翻译区潜在调控元件及蛋白质结合位点进行了预测,结果显示5^'非翻译区的突变引起了蛋白质结合因子的变化。     

软件预测和MAST技术筛选mRNA反义核酸靶点的比较

基因mRNA的结构靶点筛选是反义核酸药物研发的一个难题 .兔 (Oryctolaguscuniculus) β珠蛋白基因mRNA的结构靶位点通过运用MAST技术筛选获得 ,和计算机软件RNAstructure3 71模拟分析的位点进行了比较 ,也和寡核苷酸微阵列杂交技术筛选获得的靶点结果 (M .Natalie ,1 997)进行了比较 ,显示 :据MAST技术获得的兔 β珠蛋白基因 2个反义核酸结合靶位点 ,和用RNAstructure3 71软件给出的模拟分析的 2个靶位点相同 ,且它们与寡核苷酸微阵列杂交技术的结果完全一致 .运用MAST技术筛选获得绿色荧光蛋白 (GFP)mRNA有 4个结构靶位点 ,体外分析表明这 4个靶位点均有效 ,其中有 3个与RNAstructure3 71软件分析的靶点相同 ,但计算机模拟推荐的结构靶位点较多 ,而且随着基因长度增加确认靶位点的难度增大 ,获得的靶位点还需要实验验证 ,计算机软件模拟分析对实验筛选靶点、设计反义核酸有辅助价值 .MAST方法能筛选各种长度基因mRNA的全部可及位点和准确给定核苷酸的起止位置以供设计反义核酸 ,具有简单快捷的优点 ,将能为反义核酸设计起重要作用 .     

Paternal inheritance of mitochondrial DNA in the sheep (Ovine aries)

Paternal inheritance of mitochondria DNA in sheep was discovered by examination of 152 sheep from 38 hybrid families for mtDNA D-loop polymorphisms using PCR-RFLP, amplification of repeated sequence somain, and PCR-SSCP of the D-loop 5' end region of a 253 bp fragment. Our findings have provided the first evidence of paternal inheritance of mtDNA in sheep and possible mechanisms of paternal inheritance were discussed.     

杉木解酚菌的研究

从杉木林土壤中筛选到5株高效解酚菌(F2、F3、F4、F7、F15),结果表明,F4、F33d,F2、F155d能将600rng     

朊病毒疾病的诊断技术

朊病毒疾病即海绵状脑病,是人的动物中的一类致死性中央神经系统疾病,介绍了朊病毒疾病的诊断技术,病理诊断,基因诊断,免疫诊断和血液检测。