碱性成纤维生长因子对大鼠成肌细胞氧化应激损伤的作用及其机制

目的：探讨碱性成纤维生长因子（bFGF）下调氧自由基水平在大鼠成肌细胞氧化应激中的保护作用。方法：采用对数生长期大鼠成肌细胞,随机分为四组（n=6）：正常对照组（control）,单纯bFGF组（bFGF）,氧化应激组（H₂O₂）,干预组（bFGF+H₂O₂）。氧化应激组采用含100μmol/L H₂O₂的培养基继续孵育4 h。免疫组化检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）阳性沉积颗粒;免疫荧光观察活性氧自由基（ROS）水平、Bcl-2、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）及细胞色素C（Cyt.C）表达;Western blot检测Cyt.C、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）蛋白表达情况。结果：与正常组比较,氧化应激组成肌细胞Bcl-2表达降低,ROS、Cyt.C表达显著增加（P < 0.05）。与氧化应激组比较,bFGF干预后的成肌细胞Bcl-2表达增加,ROS及Cyt.C表达减少（P < 0.05）。结论：bFGF对成肌细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与bFGF下调氧自由基水平、Bcl-2蛋白增加、Cyt.C表达减少有关。     

一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略

同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于"双荧光"的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,"双荧光"策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的"双荧光"可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景。     

GABA/progesterone-induced polyphosphoinositide (PPI) breakdown and its role in the acrosome reaction of guinea pig spermatozoa in vitro

To investigate whether GABA/progesterone (P4) stimulates PPI breakdown and its role in the acrosome reaction (AR), spermatozoa of guinea pig were preincubated in MCM-LCa2+ for 5.5 h and then labeled with [32P]pi for 1 h. Samples were washed through a three-step gradient Percoll, adjusted to 5×107 cells/mL and exposed to 2 mmol/L Ca2+, 5 μmol/L GABA, 10 μmol/L P4 and other agents. Lipids were separated by t.l.c. and radioactivity in spots determined by scintillation counting. The AR was assessed by phase-contrast microscopy. The results showed that (i) when spermatozoa were treated with GABA, 32P-label diminished rapidly in phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate (PIP2), phosphatidylinositol 4-phosphate (PIP), and increased in phosphatidic acid (PA). The loss of label from PPI was almost completed by 10 min. The time-course of the AR was much slower than PPI when spermatozoa reached a maximal response by 15 min; (ii) the pattern of PPI hydrolysis and stimulation of AR was similar for the three agonists     

毛白杨PtLFY基因启动子的克隆及其瞬时表达分析

为了研究毛白杨LEAFY同源基因PtLFY的表达调控规律,利用PCR技术从毛白杨基因组DNA中克隆出PtLFY基因上游一段1575 bp的序列。经PLACE、PlantCARE在线软件分析表明,该序列含有TATA-BOX、CAAT-BOX等启动子基本元件,另外,还包含干旱诱导的MYB结合位点、脱落酸(ABA)响应元件、光响应元件等其他一些调控序列。因此,PtLFY的表达可能受干旱、ABA、光照等因子的调控。利用FootPrinter在线软件对毛白杨等6个物种的LFY同源基因启动子进行比对,发现不同物种的启动子相对保守,但也存在差异,说明LFY基因在功能上具有相似性,但存在一定差异。在序列分析的基础上,构建由PtLFY启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体,命名为PtLFYp1304。通过农杆菌介导的方法转化烟草,对该启动子进行瞬时表达研究,结果表明PtLFY启动子可以驱动GUS基因在烟草根、茎、叶和花器官中表达,但在根、茎、叶中仅微弱表达,表达强度明显低于CaMV35S启动子,而在花萼和雄蕊中表达强烈。     

花色苷对高等植物器官颜色的决定及其影响因素

综述了花色苷对高等植物器官颜色的决定作用及其影响因素的研究进展。花色苷本身的呈色属性、液泡定位及其在植物器官中的非均一性分布决定了花色苷能赋予植物器官颜色。花色苷单体和聚合体分子结构及其变化的多样性,以及花色苷合成与植物生长发育阶段的相关性决定了植物器官颜色的多样性。温度、光、水和矿质通过影响花色苷在液泡中的积累量而制约植物器官色度,液泡pH、氧化剂和还原剂通过影响花色苷的分子结构变化而制约植物器官色相。同时,细胞形状也通过影响花色苷的光学属性而制约器官颜色的变化。最后,还对植物器官颜色的机理和人工改良研究进行了展望。     

大壁虎不同地理居群的遗传变异与分化

以线粒体细胞色素b(Cytb)基因作为分子标记,对中国广西12个地区,以及越南和老挝大壁虎(Gekko gecko)进行序列测定,获得Cytb基因424bp的序列片段,共有7个单倍型。以白脊壁虎和沙虎为外群,用邻接法和最大简约法构建了大壁虎不同地理种群的系统发育关系,其结果显示中国广西4个不同单倍型黑大壁虎之间的平均遗传距离为0.20%—1.20%,越南红大壁虎与老挝红大壁虎之间的平均遗传距离为0.50%,广西宁明红大壁虎与越南红大壁虎和老挝红大壁虎之间平均遗传距离分别为1.70%和2.20%。广西黑大壁虎种群与红大壁虎种群之间的平均遗传距离为8.60%—9.50%,达到了亚种或种分化的差异。     

CaCl2浸果对新疆枣裂果率及钙钾镁含量的影响

以新疆产不同抗裂性枣品种‘骏枣’、‘哈密大枣’、‘灰枣’、‘金铃圆枣’果实为试验材料,用不同浓度CaCl2(0、2.5、25g/L)分别浸泡12、36、60h,研究CaCl2对枣裂果率及果肉、果皮中Ca、K、Mg含量的影响。结果显示:(1)2.5、25g/L CaCl2均能有效降低枣裂果率,且25g/L CaCl2对各品种枣的防裂效果均优于2.5g/L CaCl2。(2)极抗裂品种枣的果皮、果肉中Ca显著高于极易裂品种,且各品种Ca含量均随CaCl2浓度增加而增加。(3)极抗裂品种枣的果皮、果肉中K含量高于极易裂品种,其Mg含量则表现出相反趋势,但不同浓度CaCl2处理的枣果肉、果皮中Mg、K升降幅度变化不同。(4)枣果肉、果皮中Ca、K含量与裂果率呈负相关关系,Mg含量与裂果率呈正相关关系。研究认为,CaCl2浸果能有效增加枣果肉、果皮中钙含量,影响各品种枣果实的钾镁含量,显著降低枣裂果率,并以25g/L CaCl2效果最好。     

4-松油醇型白千层芳香油树种优良单株的选择

根据植物选育的方法,白千层加工的特点和精油产品应用要求,开展了4-松油醇型白千层优良单株筛选工作。通过初选,扦插繁殖,苗期跟踪,测定不同生长阶段枝叶生物量、含油率及精油质量选出优良单株7株,其一年生的单株含油量为11.30 g~26.59 g,精油中4-松油醇含量为38.04%~40.27%,1,8-桉叶素含量为1.09%~2.21%,在精油年均产量和质量都优于国内选择的优良单株。     

CLCN3/MMTV-PyMT转基因小鼠杂交群体的建立及鉴定

目的建立并鉴定CLCN3/MMTV-Py MT双转基因小鼠杂交群体,构建氯通道Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型。方法将CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠分别进行繁殖,选取阳性子代鼠进行配对,培育杂交后代,然后通过PCR鉴定基因型、通过组织免疫荧光方法、Western blot检测转基因小鼠蛋白表达情况。结果成功繁育CLCN3转基因小鼠和MMTV-Py MT转基因小鼠,经PCR鉴定成功构建CLCN3/MMTV-Py MT双转基因鼠杂交群体,并成功保种和扩群,经组织免疫荧光和Western-blot分析双转基因小鼠的Cl C-3蛋白的表达高于MMTV-Py MT转基因小鼠。结论成功构建Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤转基因小鼠模型,为进一步研究Cl C-3在肿瘤生长和转移中的功能提供了良好的动物模型。     

模拟高原环境下高原肺水肿大鼠模型的建立

目的在人工实验舱模拟高原环境下,探讨建立高原肺水肿大鼠模型的条件。方法 Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为5组:空白对照组、低氧24 h组、低氧48 h组、低氧72 h组、低氧7 d组,测定大鼠肺组织含水量,肺组织中TNF-α、IL-6含量及病理改变。结果与正常对照组相比,低氧24、48、72 h组大鼠肺组织含水量依次为(81.58±0.86)%、(82.13±0.57)%、(82.21±0.88)%,高于正常对照组(78.72±0.52)%,肺组织中IL-6依次为(329.30±133.58)、(323.92±127.42)、(506.29±197.19)pg/mL,TNF-α依次(221.08±20.26)、(208.05±20.33)、(244.63±51.53)pg/mL,高于正常对照组IL-6(187.26±69.49)pg/mL,TNF-α为(91.81±22.24)pg/mL。低氧7d组肺组织含水量(81.47±0.65)%、肺组织中IL-6(241.33±83.60)pg/mL、TNF-α(109.99±31.98)pg/mL,均显著低于低氧72h组,病理学结果显示72h组肺组织有炎性细胞浸润,肺泡壁有明显的充血和水肿。结论模拟海拔5000 m环境,建立大鼠肺水肿模型的较好的时间为72 h。