非编码RNA和RNA沉默

生物体内存在大量的非编码RNA ,它们形态各异 ,功能也千差万别 ,在生物的生长、发育、分化进程中扮演着不同的角色 ,尤其是siRNA ,它是RNA沉默的诱因。RNA沉默是真核生物特有的现象 ,它需要一系列因子的参与 ,其中RNA依赖性的RNA聚合酶是沉默起始的关键 ,Dicer酶是形成siRNA的基础 ,而RNA沉默诱导复合体 (RSIC)等是发生RNA沉默“链式反应”的关键因子     

微丝相关新基因hHBrk1的克隆及功能鉴定

微丝相关新基因hHBrk1被克隆 .hHBrk1基因位于 3p2 5 3 2 4 1区 ,由 3个外显子和 2个内含子组成 .Northern印迹杂交结果表明hHBrk1基因有 2个转录本 ,在人体 12种组织中均有表达 ,尤以心肌和骨骼肌为著 .hHBRK1蛋白含 75个氨基酸 ,分子量约 9kD ,与动植物界相关蛋白的同源性达 98%～ 35 % .hHBRK1蛋白定位于细胞浆 ,在细胞运动的最前沿富集 ;在有丝分裂期 ,hHBRK1蛋白定位于细胞膜皮质区和缢缩环 .实验结果提示 ,hHBRK1蛋白可能通过调控F 肌动蛋白的聚合而参与调控细胞运动、分化等基础生命活动 .     

原发性胆汁性肝硬化家系成员的发病及机制初探

目的:研究原发性胆汁性肝硬化(PBC)家系患者发病时的临床表现、生化指标及人类白细胞抗原(HLA)基因分型的特征,分析该疾病的发病机制,以提高对该病的认识。方法:分别用临床生化分析试剂盒、间接免疫荧光法、免疫印迹法和微阵列聚合酶链式反应(PCR)等技术对收集的31个家系129例一级亲属进行生化指标、自身抗体和HLAⅡ基因分型的相关检测。结果:5个家系出现免疫异常,表现在抗核抗体(ANA)阳性,但仅有一个家系的一个成员出现抗线粒体抗体(AMA)M2型阳性,可诊断为PBC。其中,发现免疫异常的5个家系中2例一级亲属出现肝功能异常,两个家系发现HLAⅡ-DRB1(*08)基因型,另外两个家系共同存在HLAⅡ-DRB1(*07)基因型。结论:PBC具有一定的家族聚集性,其发病可能与HLAⅡ-DRB1(*08)密切相关。     

小鼠的非手术法采精

用徒手法、假阴道抽吸法和电刺激法进行小鼠非手术法采精探索 ,结果表明 :假阴道抽吸法和电刺激法可采出精子 ,两者采精成功率、平均精子量和精子活率均差异不显著 ;小鼠不同射精阶段的精子含量不同 ,其中精子主要集中在射精的第二阶段和第三阶段 ;假阴道抽吸法和电刺激法对小鼠首次采精后 ,用同样的方法对相应的小鼠重复采精 ,成功率、平均精子量和精子活率与首次采精相比差异均不显著     

约氏疟原虫配子体形成的形态学特征

应用六氰酸铁钾和锇酸双染色法的透射电镜技术,对红内期疟原虫配子体形成过程中的形态生物学特征进行识别。结果表明,配子体是一渐进发育的单核、惰性(团块样、虫体不活跃)虫体,其核旁有一个由扁平囊和泡状小体极性排列组成的细胞器——高尔基体(Golgi complex),虫体被膜下有嗜锇小体。其雌性配子体的结构特点是核质较致密、内质网丰富和被膜下嗜锇小体多;而雄性配子体却是核质较疏松、线粒体发达、内织网和嗜锇小体少。结论是红内期疟原虫配子体形成与裂体增殖过程中形态结构的明显差别,雌雄配子体在结构与发育上明显的差异,都具有特定的生物学与生态学意义。     

拟南芥短肽激素PROPEP基因家族在根生长中的作用机理

AtPROPEP是拟南芥(Arabidopsis thaliana)具有7个成员的基因家族, 编码内源短肽激素。AtPROPEP基因家族编码的蛋白质C端23个氨基酸短肽能够被2个同源激酶受体AtPEPR1和AtPEPR2识别并结合, 引起下游反应。然而, 对于该家族成员AtPROPEP2,3−6的表达对茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)的响应以及在根生长中的作用并不清楚。GUS染色和定量RT-PCR分析结果表明, AtPROPEP2–6的表达对于JA和SA的响应不同, 暗示着它们可能通过不同的方式参与植物的先天免疫反应。AtPROPEP3和AtPROPEP4过表达植株的表型分析表明, AtPROPEP3和AtPROPEP4促进拟南芥根的生长。     

CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建猪肌抑素基因敲除细胞系

肌抑素是肌肉增生的负调控因子,为改良家畜产肉性状的重要候选基因。本研究设计了Cas9/sgRNA表达载体与供体DNA,通过电转染方法将其导入猪PK15细胞,经G418抗性筛选和荧光蛋白标记甄别,筛选到带阳性标记的细胞克隆。通过跨界PCR、长距离PCR、Western印迹、Southern印迹及PCR产物测序,证明了猪肌抑素的第3外显子序列特异性同源重组事件的发生。在猪肌抑素的第3外显子区域找到了1个有效的CRISPR/Cas9打靶位点,带阳性标记的细胞克隆经过多次筛选分离,获得了肌抑素单等位基因失活的稳定细胞系,为深入研究肌抑素的功能提供了重要的实验材料。     

三套荧光显微成像系统在光敏剂亚细胞定位研究中的应用比较

目的：对三套荧光显微成像系统在国产新型光敏剂HMME亚细胞定位研究中的应用特点及适用范围进行了比较与评价。方法：分别应用LSCM、CCD、ICCD荧光显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针Rhodamine-123、DIOC6(3)标记细胞内线粒体和内质网。采用细胞器-细胞荧光强度比值法,对HMME进行单细胞内分布的定性与定量研究。结果：LSCM和CCD成像系统能采集到浓度达到160μg／ml时的HMME的荧光图像,获得荧光探针图像信息显示所标记的细胞内线粒体和内质网平均荧光强度比值(J1/J2值)都明显高于细胞内J1/J2值。而ICCD成像系统只需HMME浓度为5μg/ml,荧光图像特点都呈胞浆中荧光强度较高且分布不均,细胞核区荧光较弱的中空现象。ICCD系统对细胞器探针荧光图像在空间分辨上不理想。结论：LSCM与CCD成像系统限于其探测灵敏度,对于弱荧光性光敏剂,适用于其高孵育浓度条件下的亚细胞定位研究。二者获得的结果相一致：孵育24h,HMME在鼠肺内皮细胞线粒体和内质网有分布而几乎不进入细胞核。ICCD成像系统可不受孵育浓度条件的限制,实现光敏剂极微弱荧光的有效探测,但空间分辨率较低。     

东北地区棕背鼠平种群遗传结构及亚种分类

Using partial sequences of mtDNA control region,we sought genetic diversity,population genetic structure and subspecies classification in 5 populations of Myodes rufocanus from Northeast China and Hokkaido,Japan. After sequencing a 616 bp segment of control region,we detected 45 haplotypes based on 57 variable sites among 55 individuals. Our results revealed that high-level haplotype diversity and slightly less nucleotide diversity occurred in these populations. AMOVA analysis showed that high-level genetic differentiation happened between populations due to 64.70% genetic diversity and Fst ranging from 0. 240 to 0. 814. In a phylogenetic analysis,the haplotypes from Northeast China split into two groups:Daxing’anling-Xiaoxing’anling-Wandashan and Hailin-Dahailin. This suggested that we can separate the populations from Northeast China into two subspecies,M . r. irkutensis and M. r. Changbaishanensis respectively corresponding with the former and latter areas.     

家族手纹嵴线的遗传相关性分析

本文通过对28个汉族家族共230人的指纹进行捺印、编号、测量、统计分析, 研究亲子代之间指纹的总嵴线数、各指位嵴线数、a-b嵴线数以及atd角之间的关系, 计算它们之间的相关系数以及回归方程,分析家族指纹的遗传性。