从兰州急性腹泻儿童中检出人博卡病毒4型

为了解兰州地区病毒性腹泻患儿中人博卡病毒4(HBoV4)的流行情况,收集兰州大学第一医院2012年7月至2013年6月5岁以下腹泻患儿的粪便标本331份,采用巢式PCR方法检测HBoV。将HBoV阳性序列与GenBank中相关序列进行比较分析,发现1例罕见HBoV4。该株与泰国株(GenBank登录号:JQ267789)核苷酸和氨基酸的同源性为98.9%、98.7%,与美国株(GenBank登录号:GQ506568)核苷酸和氨基酸的同源性为97.6%、97.4%,为典型的HBoV4,是我国首次在腹泻患儿粪便中发现。由进化树及同源性推测HBoV4可能存在两种不同的亚型。上述结果表明,我国首次在腹泻患儿粪便中检出HBoV4,且属于HBoV4两种可能亚型中的一种亚型。     

人α型干扰素家族定向进化文库的构建及细胞筛选

Mixtures of twelve human interferon alpha genes were digested randomly with DNase I. DNA fragments of 30～50 bps were reassembled into a full length interferon gene with sexual PCR without primer (DNA Shuffling). This primerless PCR product was further amplified with additional PCR with primers containing restriction enzyme sites. Then these PCR products were cloned into the phagemid expression vector PcantAb5E to form an expression library displaying interferon molecules. Regarding WISH cells as a standard strain rich in IFN receptor complex, we developed a new and feasible panning method with WISH cells and performed a competitive washing selection strategy. Using this method in combination with antiviral activity assay, we got two clones showing higher antiviral activity compared with phage IFN α2b. Sequencing results showed that they are hybrids containing two and four interferon alpha genes. Now we are cloning them into prokaryotic expression vector and want to get purified sample to determine their biological activity and biochemistry characters.     

肠道病毒71型分子流行病学研究进展

肠道病毒71型(Enterovirus type71,EV71),自1974年首次报道以来,在世界范围内引起多次爆发与流行[1].EV71感染主要引起患者手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD),在临床上与柯萨奇病毒A16(Coxsakie A16,CA16)感染所引起的手足口病难以区别,但EV71还能够引起多种与神经系统相关的疾病[2].近年来,EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势[3～5],其中最令人关注的是在该地区的EV71感染引起越来越严重的中枢神经系统症状.     

人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性

以INFα-m基因为模版,采用overlapping PCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒pBV220/Enk-/Met-INFα-m,转化大肠杆菌DH5α表达,产物以包涵体形式存在.包涵体经分离、变性、复性,然后经CM-Sepharose-FF、DEAE-Sepharose-FF离子交换层析和Sephacryal-HR100分子筛纯化,获得较纯的Enk-IFNα-m融合蛋白.生物活性检测表明,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性,而且具有脑啡肽的脑内镇痛作用.     

丹红注射液中5种主要活性成分促血管新生作用研究

目的:研究丹红注射液(DHI)入血后5个主要成分的促血管新生活性。方法:采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)正常培养体系和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型评价。细胞和鸡胚分别随机分为正常对照组,DHI组、羟基红花黄色素A组、丹酚酸B组、丹参素组,原儿茶醛组和迷迭香酸组。MTT法检测HUVEC增殖情况,免疫印迹法测定HUVEC促血管新生相关因子的表达,显微镜下计数鸡胚CAM给药区域新生血管数。结果:与正常对照组比较,10%(V/V)DHI及相应浓度的各单体均能显著增加HUVEC的增殖(P0.01),并促进HUVEC中促血管新生因子VEGF-A,b FGF,HGF的表达(P0.05,P0.01);而50%(V/V)DHI及相应浓度的各单体均能不同程度地增加鸡胚CAM给药区域新生血管数;两个筛选模型中,羟基红花黄色素A和丹参素均呈现一定的作用优势。结论:DHI入血后的5个主要活性成分都有促血管新生作用,其中羟基红花黄色素A和丹参素活性更佳。     

几株光合细菌的分离鉴定

光合细菌是在厌氧条件下利用光能生长发育的菌群,广泛分布在湖沼、污水、活性污泥及水稻、水葫芦、芦苇、小麦等的根际土中。光合细菌具有净化高浓度有机废水的能力。据小林达治报道,光合细菌菌体含有大量的蛋     

猪血发酵生产BF-饲料精的研究

畜类血液是一种富于营养的蛋白资源,蛋白质含量约16%。据不完全统计,我国年屠宰商品猪1亿头以上。一般说,每头猪可出血4—5斤。但是,现在我国对这种丰富的资源利用率很低。一些国家利用动物血作为食品配料,制作各种红血肠、布丁、血汤面包或薄脆饼     

T7启动子控制下的多功能大肠杆菌表达系统

构建了Ｔ７启动子控制下的多功能大肠杆菌表达载体系统,这些表达载含有强的Ｔ７启动子,翻译起始及终止元件,多克隆位点,线状噬菌体复制起始区等元件,使得该载体就仅可以有效地表达外源基因、还可能利用ｈｅｌｐｅｒ ｐｈａｇｅ诱导包装单链噬菌体,从而不需亚克隆就可以进行突变及ＤＮＡ序列测定。     

猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其抗体检测ELISA方法

[目的]以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN抗体的间接ELISA方法.[方法和结果]利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN基因在大肠杆菌中进行融合表达.SDS-PAGE和Western blot检测证实该基因获得高效表达,产物易于纯化且具有良好的免疫学活性.通过凝血酶酶切GST-PRN并回收,获得不含GST载体蛋白的PRN蛋白片段.以PRN蛋白片段为抗原建立检测天然PRN抗体的间接ELISA方法.该方法对猪巴氏杆菌病等7种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,其敏感性比乳胶凝集试验提高4～128倍,能检测到人工感染14 d后的仔猪血清抗体IgG,对临床送检的1,229份猪血清的检测阳性率为32.7%.ELISA方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌.[结论]该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于猪群PRN抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查.     

三峡水库涪陵-奉节段消落带优势草本植物生态位与种间联结性研究

参照相邻格子法对三峡水库中段(重庆市涪陵—奉节段消落带)地上植被进行调查,并运用生态位宽度、生态位重叠度、χ~2检验等手段对优势草本植物生态位与种间联结性进行分析,能在一定程度上揭示三峡水库消落带优势草本植物的生态学特性、进而推测植被群落的演替趋势,以期为三峡水库消落带植被生态修复提供理论基础或参考建议。结果表明：(1)本次调查发现共有优势植物57种、隶属22科44属,其中狗牙根的生态位宽度最大、占绝对竞争优势。(2)在105个种对中,生态位相似比(C_ih)≥0.50的种对有4个,生态位重叠值(L_ih)≥0.50的种对有7个,种间相似性较小、竞争关系较弱。(3)χ~2检验结果显示,优势植物种间正负联结比为1.33,正联结优势不明显;而Pearson与Spearman秩相关检验结果显示,种间正负联结比分别为0.54、0.75,负联结占优势。三种检验方式均表明,优势植物种间联结性较弱、稳定性相对较差、独立性相对较强。(4)种间联结系数(AC)≥0.60的种对数为7种,共同出现百分率(PC)≥0.7的种对数仅为1种。种间总体正联结性不强,物种趋于独...