转化生长因子β1质粒对新鲜同种异体骨移植的免疫影响

目的：研究局部含注射转化生长因子β1（TGF-β1）基因的质粒时大鼠同种异体骨移植的免疫排斥反应的影响。方法：将64只Wister大鼠完全随机分成4组,每组16只,切取SD大鼠的胫骨移植到Wister大鼠人工建模后形成的胫骨缺损区。TGF-β1组于移植骨局部一次性注射含有TGF-β1基因的质粒（40μg／只）;空质粒组于移植局部注射空质粒;免疫抑制剂组术前3天开始腹腔内注射环孢素A（10mg／kg）直至处死;异体移植组仅行异体骨移植,不予特殊处理。术后3、6、12周行光镜和电镜检查。结果：异体移植组和空质粒组骨基质排列紊乱,骨细胞消失,基质区内见块状低电子密度区。TGF-β1组和免疫抑制剂组可见骨细胞和完整的成骨细胞,骨小管状态良好。混合淋巴细胞培养（MLC）结果显示TGF-β1组（0-331±0．017）与免疫抑制剂组（0．501±0．004）差异无统计学意义（P〉0．05）,TGF-β1组与空质粒组（1．104±0．023）和异体移植组（1．206±0．019）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：新鲜骨移植过程中局部注射TGF-β1质粒可发挥免疫抑制作用,降低宿主的免疫排斥反应：     

骨髓问充质干细胞移植对VCD所致卵巢损伤的修复研究

目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对去氧乙烯基环己烯（VCD）所致卵巢早衰治疗的可行性。方法：采用VCD（160mgkg^-l,day^-1）连续腹腔注射来诱导小鼠卵巢早衰。每侧卵巢注射转染了绿色荧光基因小鼠骨髓来源的MSCs,于移植后14、28天及45天,取各组血液标本及卵巢组织,同时观察小鼠动情周期的变化;酶联免疫法检测血清FSH、LH水平,显微镜下观察MSC在卵巢的分布。结果：MSCs移植后各组均可见绿色荧光,并且主要分布于卵巢间质区,卵巢泡膜细胞区也可见绿色荧光细胞。MSCs组动情周期较实验对照组缩短,FSH与LH水平较实验对照组低,差异具有显著性。结论：骨髓间充质干细胞可改善卵巢早衰小鼠的卵巢内分泌功能,并且长时间存在于卵巢组织。骨髓间充质干细胞可能成为卵巢早衰治疗的新方法。     

重离子诱变微生物育种的研究进展

近年来,重离子束作为一种新的辐射诱变源在微生物育种领域已多有应用.与传统的辐照源相比,重离子束具有更高的传能线密度,可以产生更强的辐射损伤生物效应,因此诱变效率高.本文综述了近年来重离子诱变在微生物育种中取得的进展、诱变后突变体菌株的筛选策略、重离子束引起微生物遗传物质改变的直接和间接机制以及突变后的修复机理,并对其在...     

微生物产色素机制及其生物活性

近年来,随着人工合成色素的大量使用引起一系列环境和健康问题,增加了人们对安全、无毒天然色素的需求.天然色素主要来源于植物和微生物,由于植物生长周期较长使植物源色素在大规模应用中受限.与植物源天然色素相比,微生物源色素易于大规模快速培养,具有更广阔的应用前景.本文系统总结了不同微生物源色素产生机制,及其在抗菌、抗氧化及抗...     

稳定同位素探针技术在有机污染物生物降解中的应用

稳定同位素探针技术(Stable isotope probing,SIP)是稳定同位素标记技术和各种分子生物学手段相结合的一系列技术总称。将其应用于探查污染物降解的功能微生物,实现了不经过分离培养直接把微生物的代谢功能、微生物间相互作用与微生物种群结合起来,从而克服了传统分离培养的缺陷,扩大了微生物资源的利用空间,具有广阔的发展前景。本文介绍了稳定同位素探针技术的基本原理和技术路线,对常规PLFA-SIP、DNA-SIP、RNA-SIP的特点进行了阐述和对比;综述了SIP在有机污染物——苯系物、多环芳烃、多氯联苯生物降解方面的研究进展,提出SIP应用于根际研究是今后该技术在生物降解研究中的一个发展方向。     

丛生丝孢酵母菌的生物学特性观察

探讨了丛生丝孢酵母菌的生物学鉴定特性。采用真菌培养法观察丛生丝孢酵母菌的培养特性、同化试验;耐受试验测定对放线菌酮的耐受性;体外双相形态转换试验确定霉菌相及酵母相;微量稀释法进行抗真菌药物敏感试验;温度耐受性试验、干燥试验、紫外线照射试验测定其抵抗力;小鼠腹腔接种法观察其侵袭力。本菌为双相型真菌,经分离培养该菌呈现真菌所特有的菌落特征,在沙氏肉汤中呈菌膜和沉淀生长;玉米粉琼脂小培养,在镜下可见到大小不等圆形和卵圆形孢子。对10种糖类同化试验阳性,不分解尿素,还原硝酸盐。对氟康唑等4种抗真菌药均敏感;对温度、干燥、紫外线有一定耐受力;侵袭力较弱,组织内酵母相呈细胞内感染。结论观察丛生丝孢酵母菌的生物学鉴定特性,对丛生丝孢酵母菌的实验室鉴定奠定基础和临床诊断提供依据。     

甲基化特异性PCR检测FMR1 和XIST基因甲基化实验方法的建立

建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因（Fragile X mental retardation, FMR1）和X染色体失活基因（X chromosome inactivation,XIST）甲基化的方法,用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰。以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对：1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因（CGG）n重复序列区、FMR1 和XIST 基因的启动子区。PCR产物进一步克隆、测序。以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板,进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物。测序结果表明,FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基不改变。成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法。     

利用重组系统构建大容量噬菌体抗体库

噬菌体抗体库技术是获得人源抗体的重要方法,此文探讨大容量天然噬菌体抗体库在筛选人源抗体中的实际应用价值。从正常人外周血分离淋巴细胞,通过基因工程方法获得抗体基因并且构建到含有重组位点的载体pDF中获得初级噬菌体抗体库,初级库在重组系统中重组之后获得了容量为9×1010的天然Fab噬菌体抗体库,通过序列测定和重组蛋白筛选来对抗体库的质量进行初步鉴定。对随机挑取的96个克隆测序序列分析表明各种型别比例基本合适;用四种抗原筛选有明显的富集,并且获得了针对其中一种抗原的阳性抗体克隆。     

硒化紫球藻胞外多糖组成与结构的初步分析

通过在ASW培养基中加入适量的亚硒酸制备硒化紫球藻胞外多糖,经分离纯化、纯度鉴定后,利用下列手段对其进行分析:通过紫外可见光谱扫描、红外光谱扫描了解其结构信息;通过高效液相色谱对其单糖组分进行分析;通过硫酸-咔唑法测定其糖醛酸含量;通过硫酸比浊法测定其硫酸根含量,等。Se-PSP和PSP一样,分离后分别得到两种成分,紫外光谱也和PSP相似,不含有蛋白质和核酸;红外光谱显示Se-PSP中Se可能取代了C-H上的H和SO42-中的S;HPLC显示其单糖组分种类相似,含量稍有差别;另外,PSP和Se-PSP所含的糖醛酸含量没有统计学差异,Se-PSP所含SO42-比PSP少。     

采用Red重组系统构建包装菌株DH-gⅢ

选择感染性噬菌体技术是研究蛋白相互作用的良好手段,获得基因Ⅲ缺陷的辅助噬菌体是构成SIP体系的关键.为制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体,利用λRed重组系统将完整的噬菌体基因Ⅲ和氯霉素抗性基因整合到大肠埃希菌DH5α的染色体上组氨酸操纵元位点构建包装菌株,经氯霉素抗性筛选并用PCR及组氨酸表型鉴定,获得包装菌株DH-gⅢ;将缺失功能基因Ⅲ的缺陷型噬菌体基因组转化到包装菌株中培养制备辅助噬菌体,以集落形成试验来检测缺陷型噬菌体的感染能力,结果滴度可达到4.3×108,只具备一次感染力,表明包装菌株构建成功,能用来制备辅助噬菌体,有望用于SIP体系.