烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因,对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillus fumigatus基因组中含有一个bgl基因(1 752 bp),编码的蛋白约65 kDa,推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体pGEX-bgl,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后,以七叶苷为底物进行了酶学分析,结果表明该酶的最适温度是45℃,最适pH在5.5~6.0之间,对七叶苷的Km值为17.7 mmol/L。该酶在pH 4~7范围内稳定;70℃保温2 h后仍能保持60%的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响,Ca2+对重组酶有轻微的激活作用,而SDS可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高,为进一步的研究与应用奠定了基础。     

Epstein-Barr病毒潜伏性膜蛋白1 CTAR3缺失突变体的构建与功能分析

[目的]探讨Epstein-Barr病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促细胞转化的主要活性部位及其作用机制.[方法]采用PCR方法重组LMP1羧基末端活化域3(aa232-aa351)对应密码子缺失突变体(LMP1△232-351),将突变型LMP1△232-351和野生型LMP1(LMP1WT)分别导入永生化的鼻咽上皮细胞NP69中,比较二者对细胞的转化作用.同时,构建含JAK3启动子序列的荧光素酶表达质粒(pGL-2/JAK3-LUC),将LMP1△232-351与LMP1WT分别与含有JAK3启动子序列或NF-kB结合序列启动子的荧光酶表达质粒共转染293细胞(用pLNSX质粒作对照),比较二者活化JAK3启动子或转录因子NF-KB的功能.[结果](1)LMP1△232-351促NP69细胞转化的能力较LMP1WT显著降低(n=3,p<0.01).(2)LMP1WT能明显呈浓度依赖陛活化JAK3启动子,而LMP1△232-351上调能力几乎丧失.[结论]LMP1羧基末端活化域3(aa232-aa351)是LMP1的重要活性部位之一,其促细胞转化的作用与JAK3蛋白表达调节有关.     

评杨学荣主编的《植物生理学》一书

由杨学荣同志主编、人民教育出版社出版的《植物生理学》一书,出版已一年多了。在目前国内植物生理学参考书较少的情况下,这本书的出版是值得欢迎的。在教科书这个园地上,也不妨百花齐放,多出版一些各具特色的教学用书,供教师和学生参     

小煤炱属新种和国内新记录种Ⅱ.

报道了中国小煤炱属（MeliolaFr.emend.Bornet）1个新种和11个国内新记录种。新种是白榄小煤炱Meliolacanarii-albiB.SongetY.X.Husp.Nov.。全部标本存放在广东省微生研究所（GDIM）。     

术前血清TGF-β1、HMGB1、NLRP3对脊柱骨折合并脊髓损伤患者预后的预测价值

摘要 目的：探讨术前血清转化生长因子-β1（TGF-β1）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）对脊柱骨折合并脊髓损伤（SCI）患者预后的预测价值。方法：选取2021年5月～2022年6月在贵州省骨科医院接受手术治疗的脊柱骨折合并SCI患者134例,根据术后12个月预后情况分为预后良好组（83例）、预后不良组（51例）。采用酶联免疫吸附法检测术前血清TGF-β1、HMGB1、NLRP3水平。多因素Logistic回归分析脊柱骨折合并SCI患者预后不良的因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析术前血清TGF-β1、HMGB1、NLRP3水平对脊柱骨折合并SCI患者预后不良的预测价值。结果：134例脊柱骨折合并SCI患者术后12个月预后不良发生率为38.06%（51/134）。与预后良好组相比,预后不良组HMGB1、NLRP3更高,TGF-β1更低（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示糖尿病、受伤至治疗时间≥8 h、椎管侵占率≥50%、HMGB1升高、NLRP3升高为脊柱骨折合并SCI患者预后不良的独立危险因素,ASIA分级增加、TGF-β1升高为独立保护因素（P＜0.05）。术前血清TGF-β1、HMGB1、NLRP3联合预测脊柱骨折合并SCI患者预后不良的曲线下面积（AUC）为0.924大于各项指标单独预测。结论：术前血清TGF-β1水平降低和HMGB1、NLRP3水平升高与脊柱骨折合并SCI患者预后不良密切相关,术前血清TGF-β1、HMGB1、NLRP3水平联合应用对脊柱骨折合并SCI患者预后不良的预测价值较高。     

实时荧光定量PCR技术及其应用

实时荧光定量PCR技术是一种多色荧光检测核酸定量技术,该简要介绍实时荧光定量PCR技术的原理及其应用。     

几丁质酶的三级结构和催化机制

几丁质酶广泛存在于各种生物中 ,包括含有其底物 (几丁质 )的真菌、昆虫等生物中 ,也存在于不含几丁质的植物中。因而它在各种生物中有不同的作用。细菌产生几丁质酶可以分解几丁质物质而获得营养 ;真菌中几丁质酶在其细胞分裂和形态建成等方面发挥着作用 ;昆虫等节肢动物中几丁质酶在它们的蜕皮等生长发育中起着重要作用 ;植物以及高等动物的几丁质酶可能主要在于防御病原物的侵染。近来 ,由于几丁质酶在抗真菌中的作用而备受关注。几丁质酶根据其氨基酸序列的同源性被分成 1 8和 1 9两个家族。1 8家族广泛存在于各种生物中 ,而 1 9家族大…     

未知基因P2.18

用根据GRF设计的引物,以猪的下丘脑总RNA和mRNA为模板、进行RT—PCR扩增.将扩增产物纯化并克隆到T载体(pGEM3—Zf),自动测序仪测定其序列.发现所克隆的基因并非GRF基因.应用BLAST软件对其在INTERNET作了分析,未能确定为何种基因.     

中国半夏属植物亲缘关系的SRAP分析

利用序列相关扩增多态性(SRAP)标记对中国半夏属植物5个种的亲缘关系进行了研究.38个引物组合在半夏属植物的5个种中共扩增出752条清晰的谱带,其中628条谱带具有多态性,多态性比率为83.51％,显示出较高的多态性比率;各物种间的遗传相似系数在0.6513～0.7312之间,聚类分析和主坐标分析结果表明,5种半夏属植物被聚为两大类:掌叶半夏单独聚为一类(Ⅱ),而其它4个种聚为一类(Ⅰ).第Ⅰ类可再分为A和B两个亚类:A亚类包括半夏和石蜘蛛;B亚类包括盾叶半夏和滴水珠.滴水珠和盾叶半夏的亲缘关系最近,其次是半夏和石蜘蛛,而掌叶半夏和其它4个种的亲缘关系都较远,这说明掌叶半夏与半夏属其它种呈姐妹群关系.本研究结果对我国半夏属植物资源的开发利用与保护具有重要意义.     

烟曲霉蛋白质分泌载体的构建及酸性磷酸酯酶的细胞定位

[目的]在酵母细胞中蛋白质的糖基磷酸肌醇化(GPI)修饰是将GPI定位于细胞膜或细胞壁的信号.目前已对酵母GPI蛋白的细胞定位信号有一定了解,但对丝状真菌GPI蛋白的定位则了解甚少.AfPhoA是丝状真菌烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的酸性磷酸酯酶,是GPI修饰的蛋白.该蛋白首先分离自细胞膜,随后又发现该蛋白与细胞壁结合.分析其C-端序列也未发现已知的定位信号,因此目前还不能确定其细胞定位.[方法]我们以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告分子,将AfPhoA的C-端序列与GFP的C-端融合后检测融合GFP的细胞定位.[结果]我们用烟曲霉几丁质酶AfChiB1的启动子和N-端信号肽构建了可在烟曲霉中分泌表达GFP的表达载体pchiGFP.在此基础上将AfPhoA的C-端与GFP融合,融合质粒与pCDA14共转化烟曲霉后筛选到一株转化子.该转化子可表达融合GFP,在诱导和非诱导条件下,融合GFP均主要分布在细胞膜上,随培养时间的延长,融合GFP在细胞壁上也有少量分布;在培养上清液中只能检出约30KD的GFP融合蛋白,而没有完整的GFP融合蛋白,推测为从GPI锚上水解释放的.[结论]我们的研究结果表明,AfPhoA蛋白GPI修饰的作用是使该蛋白定位于细胞膜.本研究不仅初步确定了AfPhoA蛋白GPI修饰的细胞膜定位功能,而且为烟曲霉基因与蛋白质功能的研究建立了一个有效表达系统.