缓激肽生物合成及其对心肌细胞缺氧复氧保护作用

[目的]获得有活性的缓激肽药物,探讨缓激肽在心肌细胞缺氧复氧过程中的保护作用。[方法]利用PCR方法构建p Waldo-BK质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,优化诱导剂IPTG浓度和表达温度;利用镍柱亲和层析和分子筛纯化缓激肽融合蛋白质,利用GFP荧光In-gel检测蛋白质的表达情况;构建心肌细胞缺氧复氧模型,检测缓激肽对细胞的保护作用。[结果]成功构建p Waldo-BK表达载体,0. 2 mmol/L IPTG于25℃诱导培养20 h,能够获得高表达的目标蛋白质; In-gel荧光检测证实,融合蛋白GFP能够发出绿色荧光;心肌细胞缺氧复氧模型证实缓激肽能够有效保护心肌细胞。[结论]0. 2 mmol/L IPTG、25℃诱导表达20 h,得到散发绿色荧光的融合蛋白,每1L BL21(DE3)细胞培养基能够获得缓激肽约0. 55 mg,且最终获得的缓激肽能够有效保护心肌细胞对抗缺氧复氧刺激。     

水线草提取物的体外抗结肠癌作用及其机理初探

分别用水、石油醚、正丁醇和乙酸乙酯萃取水线草乙醇提取物得五个组分。MTT检测法、Wright染色法及TUNEL染色法初步研究各萃取部位对人结肠癌细胞株HCT-8、RKO的体外抑制作用。其中石油醚萃取部位及沉淀部位在浓度低至31．3μg／mL时对两种人结肠癌细胞株均有一定程度的杀伤作用。水线草中具有抗结肠癌活性的化学物质的分子结构及作用机理值得进一步深入研究。     

交联酶晶体制备及其稳定性的研究*

酶制剂已经广泛应用在化学工艺、医学、农业、食品工业和化学分析等各个领域中,但酶的明显弱点是稳定性差,特别是应用于有机合成的酶还要耐受有机溶剂的变性作用等,所以酶的稳定化研究越来越引起重视。肪酶由于其在疏水环境的特殊催化作用,被广泛应用于有机合成中。本研究所采用Candida ru-gosa脂肪酶(CRL)是目前应用最为广泛的脂肪酶,它不仅能在水和有机介质催化酯、酸、醇的拆分,而且还能催化转酯、酰化、脱酰化等立体异构化反应和酯的水解。但是目前CRL的商业化产品是含有多种水解酶的混合物。其立体异构的专一性低,而纯化的CRL的立体异构的专一性提高,但是操作稳定性差。本文采用酶结晶技术与化学交联技术相结合的方法,制备出一种新型实用的交联酶晶体催化剂,并对它的温度、pH和在有机溶液中的稳定性进行了研究。     

被孢霉生物合成花生四烯酸的初步研究

花生四烯酸不仅是细胞膜的重要成分,在维持细胞膜的结构与功能上发挥重要作用,而且是人体前列腺素合成的前体物质,对人体生理功能具有重要的调节作用。近年来研究发现,花生四烯酸在保护皮肤、降低胆固醇、抑制血小板聚集、提高免疫能力、促进胎儿发育等方面具有独特的...     

稻粉虱生物学及其寄生性天敌

稻粉虱Aleuruegbotus indicus David et Subramaniam是近年来在福建水稻上发生为害较为严重的一种害虫。国内六十年以来曾有简要记载,但迄无详细报道。国外在印度最早发现,并于1976年被鉴定命名。本通过饲养观察和田间调查。对稻粉虱的生物学特性作了研究。初步探讨了稻粉虱的形态特征和发育变态。同时对稻粉虱的寄生性天敌怍了初步考查;首次报道了稻粉虱的三种重要寄生性天敌。     

中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建

将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1 cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因（STS）、醛脱氢酸基因（ALDH）,与pGEM-T Easy克隆载体连接,获得重组质粒pGEM-T Easy-STS和pGEM-TEasy-ALDH;双酶切重组质粒及表达载体pWR306,将STS、ALDH基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了葡萄芪合成酶基因及醛脱氢酶基因的植物表达载体pWR-STS、pWR-ALDH,并用改进冻融法导入农杆菌GV3101。     

四种营养评价法对肝硬化患者营养不良评价的一致性探讨

目的:探讨主观全面营养评价法(subjective global assessment,SGA)、简易营养评价法(mini-nutritional assessment,MNA)、简易营养评价精法(short form mini-nutrition assessment,MNA-SF)及欧洲NRS2002(Nutritional risk screening)营养风险筛检法四种营养评估法对肝硬化患者营养不良评价的一致性。方法:采用SGA、MNA、MNA-SF、NRS2002四种营养评估法对本院收治的肝硬化患者49例进行营养评估,应用诊断一致性检验评价四种营养评估法之间的一致性。结果:四种方法评估肝硬化营养不良发生率分别为:SGA法为32.7%,MNA法为67.3%,MNA-SF法为51.0%,NRS2002法为40.8%;四种营养评估法吻合程度从强到弱依次为:MNA法与MNA-SF法,k=0.671;SGA法与MNA-SF法,k=0.554;MNA-SF法与NRS2002法,k=0.553;MNA法与NRS2002,k=0.501;SGA法与NRS2002法,k=0.477;SGA法与MNA法,k=0.381...     

制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号

通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列(reverse-phase protein array,RPPA)的磷酸化抗体作为探针,建立LNCa P细胞中Akt、Erk/MAPK通路在4种方式(EGF、LY294、PMA、Na Cl)刺激下信号变化的细胞通路模型,利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号。结果获得4组细胞通路模型的RPPA测定数据及25个RPPA适用性的磷酸化抗体探针。4组模型结果均显示了通路中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹法(Western blot)分析结果一致,证实了分析数据的有效性与可靠性。结果表明,所制备磷酸化抗体探针与RPPA平台结合,极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针范围,使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。     

太湖浮游植物优势种长期演化与富营养化进程的关系

利用1991年至2002年每月一次的监测资料,系统分析了浮游植物优势种和生物量的周年变化情况。同时,总氮、总磷和浮游植物叶绿素a含量等相关资料也被用于解释太湖富营养化演化与浮游植物的关系。结果显示,太湖总氮、总磷、叶绿素a和生物量均呈自梅梁湾底至湖心的逐步递减趋势。在20世纪80年代末太湖刚开始富营养化时,浮游植物优势种群从硅藻转变为蓝藻。之后,浮游植物优势种群一直是蓝藻,但各年的浮游植物总生物量有变化。总氮、总磷、叶绿素a和生物量的年均值持续增长至1996年,其后有逐步下降的趋势,究其原因可能和当地政府在太湖流域的控制排污行动有关。微囊藻在太湖的占优是太湖富营养化的标志之一。研究结果说明浮游植物在大型浅水湖泊中可以作为反映富营养化进程的生态指标。