中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建

将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1 cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因（STS）、醛脱氢酸基因（ALDH）,与pGEM-T Easy克隆载体连接,获得重组质粒pGEM-T Easy-STS和pGEM-TEasy-ALDH;双酶切重组质粒及表达载体pWR306,将STS、ALDH基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了葡萄芪合成酶基因及醛脱氢酶基因的植物表达载体pWR-STS、pWR-ALDH,并用改进冻融法导入农杆菌GV3101。     

苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因外显子7及其两侧内含子的突变研究

为探讨中国苯丙酮尿症（PKU）人群中苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因外显子7的突变特征,对147例PKU患儿的294个PAH基因外显子7以及两侧部分内含子序列,应用PCR－单链构象多态性（SSCP）分析及基因序列分析的方法进行了筛查和确定。共发现13种突变基因：G239D、R241C、R241fs、R243Q、G247S、G247V、R252Q、L255S、R261Q、M276K、E280G、P281L、Ivs7+2T>A,其中7 种突变基因在中国PKU人群首次发现：G239D 、R241fs 、G247S 、E280G、L255S、R261Q、P281L,前4种在国际上尚未见到报道,并已提交到国际PAH突变数据库（www.pahdb.mcgill.ca）。突变基因的总频率为30.61%（90 /294）。突变涉及了错义、缺失、移码和剪接位点4种突变类型。结果明确了PAH基因外显子7的突变种类和分布等特征,表明外显子7是中国人PAH基因突变的热点区域。 Abstract: To study mutation in exon 7 of the gene for the phenylalanine hydroxylase（PAH）, the mutations in exon 7 and flanking sequence of PAH gene were detected by means of SSCP analysis and DNA sequencing, in 147 unrelated Chinese children with phynelketonuria and their parents. Thirteen different mutations, including 11 missense, 1 deletion and 1 splice mutation, were revealed in 90/294 mutant alleles (30.61%). The prevalent mutations were R243Q (22.8%) and Ivs7nt2t->a (2.38%). Seven novel mutations were identified: G239D, R241fsdelG, G247S, E280G, L255S, R261Q, P281L. These new mutations have not been described in Chinese PKU population and the first 4 mutants have not been reported and thus been submitted to www.pahdb,mcgill.ca. The missense was the most common type. The deletion and frameshift mutations were detected for the first time in Chinese PKU population. This study showed the mutation characteristics and their distribution in exon 7 of PAH gene and proved that the exon 7 was the hot region of PAH gene mutation in Chinese PKU population .     

中国貉线粒体DNA多态性及其与亚种分化的关系

本文以８种限制性内切酶对来自７个地区的１４只中国貉进行了ｍｔＤＮＡ的ＲＦＬＰ分析,并构建了貉ｍｔＤＮＡ的限制酶物理图谱。根据各群体间的遗传距离构建ＵＰＧ分子系统树,结合形态、地理分布资料对中国貉的亚种分化进行了探讨。结果表明,中国貉的指名亚种已发生明显的遗传分化;对于分类地位没有确定的华北和陕西群体,建议将它们各自单独定为一个亚种;中国貉最先发生南北分歧,然后发生东西分歧。     

大肠杆菌UvrB基因的克隆、表达与功能研究

[目的]在大肠杆菌表达系统表达UvrB蛋白,优化其表达和纯化的条件,并初步研究其对抗紫外线伤害的功能。[方法]克隆大肠杆菌MG1655菌株UvrB编码序列,采用酶切连接的方法构建表达载体p Waldo-GFP-UvrB,并转入BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白质表达,采用Ni-NTA亲和层析以及分子筛层析的方法纯化蛋白质,采用紫外光刺激的方法研究其细胞内功能。[结果]成功构建UvrB表达载体,获得UvrB在BL21(DE3)中重组菌株,其表达条件为22℃,0. 2 mmol/L IPTG诱导20 h,UvrB以可溶蛋白的形式存在。SDS-PAGE结果显示UvrB蛋白质分子量约76 k Da与预期相符;经纯化后UvrB蛋白质得率约为0. 6 mg/L培养基,纯度> 85%,为其进一步研究奠定了基础。[结论]研究克隆并构建了大肠杆菌UvrB蛋白的原核表达体系,优化了其纯化方案,得到纯度> 85%的可溶UvrB蛋白质,为进一步研究UvrB蛋白质功能奠定了基础。     

太湖浮游植物优势种长期演化与富营养化进程的关系

利用1991年至2002年每月一次的监测资料,系统分析了浮游植物优势种和生物量的周年变化情况。同时,总氮、总磷和浮游植物叶绿素a含量等相关资料也被用于解释太湖富营养化演化与浮游植物的关系。结果显示,太湖总氮、总磷、叶绿素a和生物量均呈自梅梁湾底至湖心的逐步递减趋势。在20世纪80年代末太湖刚开始富营养化时,浮游植物优势种群从硅藻转变为蓝藻。之后,浮游植物优势种群一直是蓝藻,但各年的浮游植物总生物量有变化。总氮、总磷、叶绿素a和生物量的年均值持续增长至1996年,其后有逐步下降的趋势,究其原因可能和当地政府在太湖流域的控制排污行动有关。微囊藻在太湖的占优是太湖富营养化的标志之一。研究结果说明浮游植物在大型浅水湖泊中可以作为反映富营养化进程的生态指标。     

机器学习在MALDI-TOF MS鉴定微生物中的应用

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是一种新兴的高通量技术,已广泛应用于临床微生物、食品微生物和水产微生物的快速鉴定。如何进一步提高MALDI-TOF MS在微生物鉴定中的分辨率是该技术当前面临的一大挑战。为了高效处理大量高维微生物MALDI-TOF MS数据,各种机器学习算法得到了应用。本文综述了机器学习在微生物MALDI-TOFMS鉴定中的应用。首先,本文在介绍机器学习在微生物MALDI-TOF MS分类中的工作流程后,进一步对MALDI-TOF MS的数据特征、MALDI-TOF MS数据库、数据的预处理和模型的性能评估进行了描述。然后讨论了典型的机器学习分类算法和集成学习算法的应用。简单的机器学习算法很难满足微生物MALDI-TOF MS分类的高分辨率的需求,而组合不同机器学习算法和集成学习算法可以获得更好的微生物分类性能。在MALDI-TOF MS数据的预处理方面,小波算法和遗传算法的应用最广,它们...     

牵牛子(黑丑)挥发油成分研究

目的:研究牵牛子的化学成分.方法:利用有机溶剂-水蒸气蒸馏法提取牵牛子(Semen pharbitidis)挥发油,采用GC -MS进行测定,并应用色谱峰面积归—化法计算各成分的相对百分含量.结果:鉴别出35个化学成分,其化学成分为庚醛( 14.368％);反,反-2.4 -葵二烯醛(6.887％);2-戊基呋喃(5.327％);2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(5.312％);萜品烯-4-醇(3.772％);苯乙醛(3.458％);十六烷酸乙酯(2.063％)等.结论:该文首次采用气相色谱-质谱联用法对牵牛子中的挥发性成分进行.     

鳜消化器官的组织学观察

鳜（Sinlpe）、caoh。。alsiBasilewsky）在我国的各大河流水系和各淡水湖泊均有分布。鳅鱼是淡水鱼类中的珍品,具有个体大,生长快,肉质鲜嫩和少细刺等特点,有很高的经济价值。l材料和方法鳅不同发育阶段的实验材料,由武汉市东湖养殖场的菱角湖提供。在纽的苗种生长期间对其体长和口裂进行定期测量。取体长约60cm的级进行解剖。记录消化道的长度和重量。然后用Bouln氏液固定,24h后洗净,脱水。最后石蜡包埋,消化道各部位作连续切片,厚度为spin,H－－E染色。光镜观察拍摄。2结果和讨论皈的消化道分为口腔,咽,食道,胃,肠和肛门…     

两种水溶性抗菌活性物质的分离提取

对水溶性、不解离的极性物质分离时,一般采用吸附层析和凝胶层析等途径。实验通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及硅胶ＧＦ２５４制备型薄板层析,从发酵液样品中分离出两种有抗菌活性的纯物质。薄层层析的展开剂为二氯甲烷－四氢呋喃－甲醇－水（２５：３０：２）,分离出的组分中Ｒｆ＝０．７和Ｒｆ＝０．８两种物质有抗菌活性。硅胶柱层析洗脱过程为梯度洗脱,先用１５０ｍｌ上述展开剂洗脱,再用二氯甲烷－甲醇（２０：８０）     

抗菌活性海洋真菌HN4-13的鉴定及其发酵优化

[目的]鉴定一株来源于连云港近岸海域沉积物并具有分泌抗菌活性代谢产物的真菌菌株HN4-13,优化其合成抗菌活性物质的发酵条件.[方法]通过形态学观察及ITS序列分析方法对菌株HN4-13进行鉴定;通过基础发酵培养基筛选、碳氮源及无机盐的单因素试验,继而采用正交试验设计优化其合成抗菌活性物质的发酵条件.[结果]菌株HN4-13被鉴定为黄柄曲霉(Aspergillus flavipes),其分泌抗菌活性产物的发酵条件为:4％蔗糖、0.5％蛋白胨、0.1％ KCl、0.06％ NaH2PO4、28℃、1％接种量、160 r/min培养9d.[结论]实验结果为进一步分离纯化菌株HN4-13所产抗菌活性代谢产物提供了基础.