新型α-半乳糖苷酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的：制备高效价、高特异性的新型α-半乳糖苷酶的兔多抗,并鉴定该抗体的特异性。方法：用脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶（纯度大于90％）免疫新西兰大白兔,获得α-半乳糖苷酶的兔抗血清,并经HiTrap rProteinA柱纯化获得高纯度的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,Western印迹评价抗体的特异性。结果：通过免疫法得到了α-半乳糖苷酶的兔多克隆抗体血清,抗体效价达1：1×10^6,经rProteinA柱纯化后获得了高效价、高纯度的抗体,Western印迹显示该抗体特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合。结论：获得了新型α-半乳糖苷酶的高效价、高特异性的兔多克隆抗体,可用于血型转变过程中残留α-半乳糖苷酶含量的特异性检测。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物免疫原性的鉴定

目的：克隆表达恶性疟原虫（Hasmodium falciparum,p．f）海南株（FCC1／HN）乳酸脱氢酶（LDH）,并对其免疫原性进行鉴定．为制备抗LDH抗体用于胶体金法快速检测疟原虫奠定基础。方法：应用PCR技术对恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHpf）基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a（＋）,重组表达载体经鉴定后诱导表达;重组LDHpf（rLDHpf）经纯化后,免疫家兔制备兔抗rLDHpf免疫血清,间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达产物的免疫原性。结果：构建了pET-32a／LDHpf重组表达载体,测序后同源性分析显示p．f不同株间LDH氨基酸序列同源性大于98％,不同种间同源性也在90％以上;间接免疫荧光和Western印迹分析显示rLDHpf具有较好的免疫原性。结论：LDHpf基因高度保守;rLDHpf得到高效表达并具有良好的免疫原性。     

95例SARS患者的Th2细胞因子反应及其临床意义

本研究共收集95例罹患严重急性呼吸综合征（SARS）的医护人员的急性期和恢复期血清,用ELISA方法测定血清中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）、干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）以及转化生长因子β（TGF-β）水平,用流式细胞仪测定急性期患者外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞比例。结果显示,SARS患者病程初、中期血清IFN-γ无明显改变;IL-2在起病2月内无显著变化,但在病程3～5个月时降低;IL-4在健康对照和患者均未能测出;TNF-β在SARS感染的1周内和病程第2个月内下降。与上述细胞因子形成对比,患者IL-10以及TGF-β均在发病起即持续升高直至整个病程。这些细胞因子的变化均与激素的使用无关（P〉0．05）。SARS患者急性期CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞急剧减少。可见,SARS相关冠状病毒感染可引起Th2细胞因子反应,可能损害患者的细胞免疫功能而促进体液免疫,IL-10和TGF-β可能在SARS的发病中起作用。     

水稻纹枯病菌的微气候生态位

运用生态位原理与方法,研究水稻纹枯病菌的微气候生态位.结果表明:照度、温度和湿度三者综合作用效应高于各单因子的独立效应,三因子中照度和温度的联合效应高于其他因子间两两组合效应;在分蘖盛期、孕穗期、抽穗期和蜡熟期,水稻纹枯病菌的微气候生态位宽度指数分别为0.3112、0.4012、0.4326和0.7365,即随着水稻的生长而逐渐增大,但病菌占有的生态位仍以低光照、低温度、高湿度的微气候类型为主.     

髓鞘碱性蛋白片段69-85诱导建立大鼠自身免疫性脑脊髓炎模型

目的探索以大鼠髓鞘碱性蛋白片段69-85（MBP69-85）为单一抗原,建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型,并观察其病理改变。方法MBP69-85以生理盐水溶解,与完全福氏佐剂（CFA）充分混匀制备免疫乳剂;雌性Wistar大鼠70只,留取10只作为正常对照组,余者根据免疫乳剂组分的不同随机分为A、B、C组（n=20）。A组：MBP69-85每只50μg＋CFA（含卡介苗6 mg）;B组：MBP69-85每只25μg＋CFA（含卡介苗6 mg）;C组：MBP69-85每只25μg＋CFA（含卡介苗12 mg）。脑和脊髓组织切片进行HE染色,MBP及神经微丝（neurofilament,NF）免疫组化检测,观察神经组织的病理改变。结果A组内部分大鼠在免疫后第12-16天发病,表现为尾部及四肢无力或麻痹、斜颈等,平均临床症状评分为2.38±1.89;B、C组均未见发病;HE染色可见神经组织内炎细胞浸润,血管＂袖套＂样病灶形成;MBP及NF免疫组化染色显示病变组织内白质脱髓鞘及轴突损伤明显。结论EAE模型建立与免疫抗原的剂量有一定的依赖关系;佐剂中的卡介苗含量不是诱导大鼠发病的主要原因;本模型具有多发性硬化的典型临床表现及病理改变,是研究多发性硬化发病机制及治疗的可靠的动物模型。     

核心薄囊蕨类颈卵器多细胞起源的形态学观察

核心薄囊蕨类是真蕨纲中的主要类群,其颈卵器壁细胞的起源问题尚未见报道。该研究以华北鳞毛蕨为例,在人工培养条件下,用石蜡切片法综合观察了颈卵器的发育过程,分析颈沟细胞、腹沟细胞、卵细胞等的发生与分化,并结合桫椤科等十多个类群性器官的研究成果,探讨核心薄囊蕨类颈卵器的起源。结果表明:(1)颈卵器由配子体1个原始细胞和多个营养细胞共同发育而成。(2)原始细胞经两次不均等分裂由外向内依次形成颈壁细胞、中央细胞、基细胞。(3)中央细胞分裂形成1个卵细胞、1个腹沟细胞和颈沟细胞。(4)基细胞分化为颈卵器腹壁最下方的1~4个壁细胞。(5)颈卵器腹部周围的壁细胞由卵细胞周围的多个营养细胞直接转化而来。该研究首次提出了核心薄囊蕨类颈卵器为多细胞起源,并为探讨颈卵器植物的有性生殖演化规律提供了形态学依据。     

原生质体融合技术选育耐热性β-淀粉酶产生菌

从土壤中分离到两株产β-淀粉酶芽孢杆菌菌株,经紫外线、丫-射线,氯化锂、亚硝基胍等诱变和筛选,得到β-淀粉酶高产菌和耐热性β-淀粉酶产生菌各一株。将两菌进行原生质体融合,获得兼有两亲株遗传特性的融合子wg6。从菌落形态和产酶特性等证实此融合子系两亲株融台所得的杂交子代。W96菌株产酶能力介于两亲株之间,酶的热稳定性较高,60℃处理15min,酶活力仍达93．2％。此菌株还可产生少量茁霉多糖酶(一种支链淀粉酶)．与所产生的β-淀粉酶协同作用,使淀粉水解率达到80．6％,因而有较高的应用价值。     

铝合金轮毂生产废水处理系统的设计和运行

某汽车零部件有限公司年产汽车铝合金轮毂200万只,每天产生酸性废水80m³、碱性废水524m³、含锌含铜废水181m³、含铬废水48m³和含镍废水40m³,生产废水总产生量为873m³·d^-1。废水总镍、总锌、总铬、总铜、pH、氟化物和COD的变化范围分别是5.34~18.72mg·L^-1、50.11~97.63mg·L^-1、2.66~16.21mg·L^-1、1.50~11.36mg·L^-1、5.2~8.4、5.0~17.4mg·L^-1、80.9~161.9mg·L^-1。铝合金轮毂生产废水处理系统设计水量为1052m³·d^-1,每个处理周期的运行时间为20h,系统运行稳定,连续30d出水均能达到广东省地方标准《水污染物排放限值》(DB44/26-2001)第二时段二级标准。     

中华水韭根叶发育的解剖观察

中华水韭(Isoetes sinensis Palmer)为国家一级保护野生植物,被评价为极度濒危级(CR),仅分布在长江中下游,对环境污染敏感。本文以其人工苗为材料,用石蜡切片法,连续观察了根和叶的发育特征:叶原基横切面呈端部渐圆的三角形,由表皮原、皮层原和中柱原三部分组成;维管束中央首先出现的一个原生管胞,与其近轴面两侧后出现的两个后生管胞共同组成倒“V”字型的外始式初生木质部;成熟叶分化出表皮与皮层,表皮细胞间有嵌合,皮层部分细胞裂解成彼此不相通的4个通气道。根横切面呈圆形,成熟区分化出表皮、皮层(外皮层、中皮层、内皮层)和维管束三部分,中皮层部分细胞裂解呈一个完整的筒状通气道并与外皮层无连接,由内皮层包围的维管束横切面呈三角形。讨论了根和叶的形态结构、功能及系统学意义。     

A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留a-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立

目的：建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法：利用a-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的仅一Ⅳ-乙酰半乳糖胺酶。结果：建立了检测微量a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1ng／mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论：本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。