新城疫病毒F蛋白中两段七肽重复序列的克隆和表达

从新城疫病毒 (NDV)中国强毒株F4 8E9和弱毒株长春株F蛋白的cDNA中亚克隆出两段七肽重复序列(HeptadRepeatRegion ,HR1,HR2 ) ,将HR1和HR2分别插入表达载体pGEX 6p 1,在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,将与载体中的GST(GlutathioneS Trasferase)融合表达的可溶性融合蛋白用GST亲和层析柱纯化。纯化的融合蛋白用蛋白酶酶切后 ,先用GST亲和层析柱除去GST ,再加热进一步纯化。纯化的HR1和HR2质谱分析其分子量 ,结果表明 ,强株的HR1和HR2的分子量分别为 7 10 3kD和 6 3 0 1kD ,弱株的HR1和HR2的分子量分别为 7 10 7kD和6 3 0 9kD ,强弱株HR1和HR2的分子量都基本一致。本工作为研究HR1、HR2的结构以及它们在NDV与宿主细胞融合中的作用奠定了基础。     

中国南瓜曲叶病毒ＤＮＡ Ａ的克隆及其全序列

对引起我国南瓜曲叶病的病毒分离物ＤＮＡ的克隆和序列分析表明,中国南瓜曲叶病毒ＤＮＡ Ａ由２７４１个核苷酸组成,共编码６个开放阅读框（ＯＲＦ）,其中病毒链有２个ＯＲＦ：ＡＶ１（２５６aa)和ＡＶ２（１４０aa),ＡＶ１为外壳蛋白基因;病毒链的互补链有４个ＯＲＦ,ＡＣ１（２４３aa)编码复制酶基因,ＡＣ２（134aa)编码反式激活蛋白,ＡＣ３（１３６aa)和ＡＣ４（１７２aa),该病毒属于旧世界Ｂegomoviruses,是一个粉虱传播的联体病毒。     

藻类污染生物防治新策略

1　水体藻类污染生物防治的必要性近些年来由于污染造成的环境恶化逐步加重 ,水体藻类污染的程度也逐年加深。赤潮或水华 (ＲｅｄｔｉｄｅｏｒＢｌｏｏｍ)在全球范围内频繁出现是藻类污染程度加深的直接反映。我国在 1 933年到 1 979年的 46年中仅发生过 1 2次赤潮 ,而 1 990年到 1 994年的 5年中就发生了 1 39次赤潮 ,藻类污染灾害日趋严重。赤潮可以造成海水ｐＨ值升高 ,粘稠度增大 ,改变浮游生物的生态系统群落结构。当赤潮藻类过度密集或死亡腐解时 ,又造成了海域大面积的缺氧 ,甚至无氧。藻细胞代谢及腐解又会产生大量有害气体和毒素 (…     

转基因雄性不育烟草花药绒毡层及花粉发育的特点

转基因雄性不育烟草花药绒毡层及花粉发育的特点罗玉英１李怀军２刘玉乐３李胜国３田波３（１首都师范大学生物系,北京１０００３７）（２北京市蔬菜研究中心,北京１０００８１）（３中国科学院微生物研究所,北京１０００８０）近年来,通过基因工程创建植物雄性...     

人免疫缺陷病毒的受体与辅助受体

人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)是引起艾滋病的病原.由于该病的病死率较高,目前尚没有被广泛接受的有效的医治方法,所以世界各国对艾滋病都十分重视.在感染HIV时,HIV首先与靶细胞上的受体(receptor)结合后,才能进入该细胞并在其内繁殖.所以充分地了解HIV的受体及辅助受体(coreceptor),对控制HIV的感染和传播是至关重要的.     

中国海岸带围垦遥感分析

海岸带围垦是沿海区域缓解人口增长与城镇扩张所带来土地压力的重要途径和方式。建国以来,中国大陆沿海围垦大量滨海湿地以满足社会经济发展所导致的土地需求,对滨海湿地的资源、生态和环境造成影响和胁迫。为掌握近35年来中国大陆沿海地区的围填海状况,以5a为间隔,选取1985—2010年间Landsat系列卫星影像数据,基于遥感与GIS技术,解译6个年份的围垦岸线,计算分析围垦面积,研究并提出围垦强度系数。结果表明,1985—2010年,中国大陆沿海共围垦土地755183 hm~2,年均围垦30207 hm~2,围垦强度达到1.7 hm~2a~(-1)km~(-1),围垦总量趋势表现先减少后增加。环渤海经济圈与长三角经济圈围垦强度最大,其围垦总量占到全国总体的85.7%。围垦的时空分布及其利用形式受沿海区域自然地理条件和地区经济发展水平的制约和影响。     

肠道病毒71型分子流行病学研究进展

肠道病毒71型(Enterovirus type71,EV71),自1974年首次报道以来,在世界范围内引起多次爆发与流行[1].EV71感染主要引起患者手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD),在临床上与柯萨奇病毒A16(Coxsakie A16,CA16)感染所引起的手足口病难以区别,但EV71还能够引起多种与神经系统相关的疾病[2].近年来,EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势[3～5],其中最令人关注的是在该地区的EV71感染引起越来越严重的中枢神经系统症状.     

烟叶脉坏死病毒原鉴定及cDNA克隆与序列分析

田间采集辽宁地区烟叶脉坏死病标样所得分离物,在测定的１２个科３５种植物中只侵染茄科的一些烟草品种及洋酸浆（ｐｈｙｓａｌｉｓｆｌｏｒｉｄａｎａ）,可由桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉｃａｅ）传播。病叶汁液稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２）－v１０￣（－３）;失毒温度（ＴＩＰ）为５５一６０℃;体外保毒期（Ｌ）为４８－７２小时。病毒粒体形态呈线条状７２０×１２ｎｍ,病叶脉坏死部细胞质中含风轮状内含体。病毒提取物的紫外最大吸收为２６５ｎｍ,最小吸收为２４５ｎｍ,Ａ＿（２８０）／Ａ＿（２６０）为０．８２。该病毒分离物与ＰＶＹ￣０抗血清呈阳性反应。以病毒ＲＮＡ为模板,按国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列合成引物经逆转录合成ｃＤＮＡ。用ＰＣＲ扩增出约０．８０ｋｂ的ＣＰ基因片段,将这一片段插入载体ｐＧＥＭ７Ｚ－ｆ（＋）中转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ菌株得到了ＣＰ基因的克隆。ｃＤＮＡ序列分析表明,和国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列同源性极高,初步表明引起辽宁地区烟叶脉坏死病的毒原为ＰＶＹ￣Ｎ。     

病毒来源的抗病毒基因的构建和在植物中的表达

寄主植物对病毒感染产生各种类型的抗病性,包括高度抗病的免疫性,抗侵染,抗扩展和抗增殖的抗病性,过敏性抗病性,耐病性以及对传毒介体的抗性。但是至今我们还不能把编码这些抗性的基因分离出来,进行基因转移。所以在植物基因工程中应用植植物来源的抗病毒基因为时尚早。由于病毒分了生物学的发展,已阐明了一些病毒的基因组的结构与功能,为利用病毒来源的抗病毒基因开辟了道路。随着DNA重组和克隆技术的发展,以及双子叶植物基因转化技术的日趋完善,使植物抗病毒的基因工程得以突破。已由病毒外壳蛋白基因、病毒卫星RNA的cDNA和病毒弱株系的全长cDNA转化植物,获得抗病性的表达。探索病毒来源的反意RNA和中和抗体基因作为抗病毒基因的可能性也在进行中。     

细胞内表达的小干扰RNA靶向丙肝病毒5′保守区的研究

将丙型肝炎病毒(HCV)基因组的5′非编码区(5′UTR)插入到报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)和荧光素酶(luciferase)的上游,并构建基于Ⅲ型启动子的表达载体,这种载体能产生针对HCV 5′UTR的小干扰RNA。然后将含有HCV 5′UTR的eGFP/luciferase和能产生小干扰RNA的质粒共转染入Hela细胞,通过测定细胞发出的荧光和化学发光强弱来观测抑制效果。实验结果表明,与HCV 5′UTR特异性小干扰RNA表达质粒共转染的细胞无论从定性还是从定量上所测得的荧光和化学发光强度都明显低于阴性对照,且细胞密度经核染色与对照组无明显区别。这揭示了小干扰RNA确实能引起HCV特异基因如5′UTR的沉默,且转染进去的小干扰RNA表达质粒对细胞没有毒害作用。这一工作是通过载体直接在细胞内表达小干扰RNA(siRNA)而不是化学合成的,可以使小干扰RNA在细胞内得到稳定表达,因此本研究设计的siRNA表达载体不仅可以有效沉默HCV 5′UTR,而且该系统可以灵敏地筛选更有效的针对HCV的siRNA,因而这一结果为研究利用RNA干扰进行基因治疗HCV感染做了初步探索。