水稻条纹叶枯病毒分子生物学的研究——Ⅲ.外壳蛋白基因的序列分析

以含有水稻条纹叶枯病毒(RSV)外壳蛋白(CP)基因的重组克隆为材料,将RSV-cDNA酶解后,亚克隆人M13mp18、19,采用双脱氧链终止法测序得到RSV-CP基因的全长序列(共含966bp),同日本已发表的RSV-CP基因序列相比同源率达97％。     

利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1

为了提取小球藻病毒基因组ＤＮＡ,探索利用３％￣１０％的ＰＥＧ８０００加３％￣７％的ＮａＣｌ沉淀病毒。其中以７％的ＰＥＧ和４％的ＮａＣｌ沉淀效果最好,但其沉淀效率较低。     

马铃薯X病毒和烟花叶病毒对于马铃薯Y病毒侵染酸浆的干扰作用的研究

把台有烟花叶病毒(TMV)或马铃薯X病毒(PXV)的烟汁,或把含有提纯的TMV或PXV的缓冲液与舍有马铃薯Y病毒(PYV)的烟汁混合接种酸浆上,PYV所引起的局部病斑比单独接种的较少。PXV对于PYV侵染酸浆的干扰作用仅发生于两病毒同时接种于同一叶表面的情况下o TMV的干扰作用剐也能发生于先接种或在接种PYV之后24小时内接种TMV或两病毒分删在叶面和叶背接种的情况下。PXV的浓度与干扰作用成比例。经世紫外线照射或热处理而钝化了的PXV淡有干扰作用。预先系统感染PXV趋于消除混合接种时PXV对PYV的干扰。无论所用的x病毒毒株是强的或弱的都存在这种关系。     

真菌传杆状病毒组（Furovirus）内四种病毒的细胞病理学比较研究

本文研究丁真菌传杆状病毒组（Ｆｕｒｏｖｉｒｕｓ）四个病毒成员,即甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）、甜菜土传病毒（ＢＳＢＶ）、花生丛生病毒印度株系（ＰＣＡ－Ｉ）以及非洲株系（ＰＣＡ－Ａ）和小麦土传花叶病毒（ＳＢＷＭＶ）所引起的细胞病理变化。这四种病毒在病毒粒子聚集的结构,是否引起细胞膜聚集及聚集的结构,过氧化物酶体泡状物的形成与否及结构均有差异。另外,同一种病毒的不同株系或分离物所引起的细胞病理变化也不相同。     

急性冷应激对牦牛乳腺上皮细胞 HSP70 mRNA 表达的影响

本文主要研究了急性冷应激对牦牛乳腺上皮细胞热休克蛋白７０ （Heat stress protein,ＨＳＰ７０） 表达量的影响。采用实时荧光定量ＰＣＲ 技术,以急性冷刺激１０℃ 为典型研究环境,分析了ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 表达的变化规律。结果显示,乳腺上皮细胞在１０℃分别冷处理２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,其ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量变化均不显著（Ｐ ＞０. ０５）;分别在１０℃冷处理２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,再复温培养４ ｈ,ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量均极显著增加（Ｐ ＜０. ０１）,于６ ｈ 达到峰值;在１０℃先冷处理４ ｈ,然后分别复温２ ｈ、４ ｈ、６ ｈ 和８ ｈ,ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ 的表达量亦均显著增加（Ｐ ＜０. ０１）,并于４ ｈ 达到峰值。结论：急性冷应激诱导牦牛乳腺上皮细胞ＨＳＰ７０ 表达量的增加不是发生在冷处理过程中,而是发生在复温过程中,并且在一定范围内随冷处理时间的增长表达量增高。     

类病毒的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳检测技术

类病毒为已知的最小的致病因子,只含核酸,不含外壳蛋白。类病毒能在若干高等植物上引起重要病害,在一些经济作物上造成损失。防治类病毒侵染,主要靠早期诊断。可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,生物学方法,以及分子杂交等方法检测类病毒。用生物学方法检测,即接种一定的鉴别寄主,周期长,费时费力;用分子杂交方法须用放射性同位素,探针的制备也较困难,在一般的实验室不大容易进行;以往     

人热休克蛋白gp96基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化

热休克蛋白gp96是热休克蛋白90家族成员,能够引起非特异性和特异性免疫反应。得到大量高纯度的蛋白质是研究开发gp96的关键。然而重组的gp96容易在E．coli中降解,并在一定条件下形成多聚体。实验先将人gp96基因克隆到pET-30a载体上并在E．coli Blstar中表达,再经过亲和层析、阴离子交换、分子筛分别纯化gp96。最终去掉了大部分的降解片段和多聚体,得到一定量的可溶性gp96,为进一步研究其结构和功能打下一定的基础。     

SARS—CoV N蛋白与病毒mRNA相互作用的初步研究

SARS冠状病毒(SARS-CoV)是一种新型的冠状病毒,其基因组大小约为30,000 nt,为单股正链RNA。病毒基因中的1-72个核甘酸为前导序列。核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白,它在病毒基因转录,翻译以及病毒颗粒包装中起重要作用。在本研究中,我们通过PCR的方法从SARS-CoV cDNA中克隆N基因,将基因克隆到大肠杆菌表达载体中,经表达纯化获得大量重组蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析获得高纯度的N蛋白。同时构建前导RNA的转录模板,经体外转录得到地高辛标记的RNA。使用Northwestern分析技术,我们证实纯化的N蛋白在体外可以与RNA发生特异性的结合。N蛋白与病毒RNA的结合特性及其在病毒生活周期中的所起作用的初步研究,为下一步设计出有效的阻断病毒周期从而达到抗病毒目的的药物或疫苗奠定了基础。     

Production and characterization of a human single-chain Fv to collagenase IV

Ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｒｅｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒ.ＴｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＩＶｉｎｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｓｈａｖｅｂｅｅｎｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｉｎｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ[1].ＩｔｈａｓｂｅｅｎｔｈｏｕｇｈｔｔｈａｔｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＩ…     

分子内二硫键对HERV囊膜蛋白融合核心结构的影响

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通过PCR对融合核心部位七肽重复区HR1和HR2之间linker中自然存在的一对保守的分子内二硫键进行定点突变,表达纯化该突变蛋白,并进行了相应的结构及稳定性探讨,通过与未突变蛋白的性质比较确证该分子内二硫键在蛋白结构的正确形成及稳定性上起着一定的作用。