盐胁迫诱导的大麦基因差异性表达

大麦幼苗经 0 .2 0mol·L- 1 的NaCl溶液胁迫后 ,从幼根中提取细胞总RNA ,选择OligodT1 2 CA为锚定引物 ,反转录合成cDNA第一链 ,并以此为模板 ,用随机引物进行PCR扩增 ,琼脂糖电泳分离扩增产物 ,得到 5个在胁迫组中特异性表达而未经盐胁迫组中不表达的片段。结果表明大麦幼苗在盐胁迫时发生特异性基因表达     

蝎β型昆虫毒素的结构及其与钠通道作用机制

蝎毒素是蝎为防卫的需要而产生的一系列活性短肽.其中蝎昆虫特异性毒素可特异性结合并调控昆虫可兴奋细胞膜上的钠离子通道,是研究离子通道结构与功能的首选探针,并在转基因抗虫植物及生物杀虫剂研究方面具有潜在的应用价值.本文对蝎β型昆虫毒素的结构与功能及其对钠离子通道的作用方式和β毒素的电压传感器捕获(voltage sensor-trapping)模型做一综述,为进一步揭示蝎β毒素的结构与功能的关系和在农作物抗虫领域的应用提供依据.     

抗虫转基因马铃薯研究进展

马铃薯在整个生育期都易遭受虫害,从而导致马铃薯绝产或减产,同时,受到害虫危害的马铃薯品质也受到严重影响。当前马铃薯抗虫转基因的研究与应用是解决虫害的有效手段之一。总结了苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、植物凝集素基因及RNAi的抗虫机制在马铃薯中的应用及其转基因植物研究中取得的进展,为马铃薯抗虫转基因研究和品种培育提供方法和对策。     

八肋游仆虫Rab家族新成员Eo-rab-1N基因的克隆与序列分析

Rab蛋白家族属于小分子GTP结合蛋白家族Ras超家族中最大的亚家族,主要在囊泡运输中起作用。本实验运用PCR、RT-PCR等技术,从八肋游仆虫中克隆到一种新的rab基因。序列分析结果表明：在大核中,该基因全长884bp,除去两端的端粒与非编码区,该基因在大核中由723bp组成。从小核中克隆相应的基因片段,此基因片段序列与大核中序列一致,表明该基因在小核中无内部删除序列的存在。通过RT-PCR,从mRNA获得的该基因的开放读框为663bp,表明该基因在转录过程中有内含子的删除。大核基因序列和cDNA序列比较,发现60bp的内含子序列位于大核基因的153~212bp之间,并符合一类内含子GU-AG剪切规则。在遗传密码使用上,该基因内部含有2个TGA,在游仆虫中编码半胱氨酸。同时首次发现,八肋游仆虫基因使用TAG作为终止密码子。NCBI上序列比对表明该基因翻译的蛋白与其它物种Rab1蛋白的同源性达49%~52%,因此我们将它命名为Eo-rab-1N,GenBank登录号为DQ105562。Eo-rab-1N与其他物种的Rab1蛋白构建进化树,发现该蛋白的进化与物种的进化保持一致,表明该基因在细胞中具有重要功能。     

八肋游仆虫微管蛋白基因家族的鉴定及进化分析

为了系统分析八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)微管蛋白基因家族,从八肋游仆虫大核基因组中共鉴定得到20个微管蛋白基因,基于同源比对及系统进化分析,将其归入α、β、γ、δ、ε及η六个微管蛋白亚家族;多序列比对及Western blot结果显示八肋游仆虫η微管蛋白基因在翻译过程中需发生一次+1位编程性核糖体移码,其移码位点为AAA-TAA;所有自由生纤毛虫都含有多个α和β微管蛋白基因亚型,可能用于组成不同的微管结构。研究为后续深入探讨八肋游仆虫微管蛋白的生物学功能及微管多样性奠定了基础。     

八肋游仆虫核糖体蛋白L11的基因克隆与序列分析

以单细胞真核生物八肋游仆虫Euplotes octocarinatus为实验材料,采用PCR、RT-PCR方法克隆了核糖体蛋白L11基因(EoRPL11).将该序列与GenBank中其他物种的RPL11基因序列进行同源性比对,采用DNAStar软件进行聚类分析.结果显示,成功克隆到游仆虫RPL11基因,大核中该基因全长709 bp,开放阅读框(ORF)为531 bp,编码176个氨基酸;cDNA序列与大核中ORF序列一致,表明该基因具有转录活性;所推导的氨基酸序列与嗜热四膜虫Tetrahymena thermophila的RPL11同源性最高,为66%.     

豇豆胰蛋白酶抑制基因改良大白菜抗虫性的研究

以8个大白菜亲本材料无菌苗为实验材料,从近生长点处切下无菌苗子叶,在MS＋1 mg/L 2,4-D培养基上预培养48 h,以携带豇豆胰蛋白酶抑制基因（该基因可赋予大白菜抗菜青虫和小菜蛾等昆虫的抗性,Cowpea Trypsin Inhibitor gene,CpTI）的质粒pBinΩSCK为载体,通过OD600值约0.3～0.4的根癌农杆菌LBA4404侵染3min,在MS＋2 mg/L BA＋0.5 mg/L NAA＋5 mg/L硝酸银＋2%蔗糖＋8 g/L琼脂培养基上共培养48 h,将其转到含有卡那霉素和头孢霉素的筛选培养基中,约4周出现大量转化体,经分子杂交检测,证明了豇豆胰蛋白酶抑制剂基因整合到了大白菜基因组中,室内和田间的抗虫试验也表明,豇豆胰蛋白酶抑制剂基因赋予了转基因大白菜较强的抗虫能力.本研究还对影响农杆菌遗传转化效率及植株再生的各种因素进行了优化.     

大白菜原生质体培养再生体系的优化

以栽培大白菜亲本材料河头早A、河头早B、青麻叶C、青麻叶D、石特一号9-3、石特一号11-4、玉青、运农一号等8个品种的无菌苗下胚轴为外植体游离获得原生质体,用液体浅层法将原生质体培养在含1．5mg,NAA、0．5mg／L TDZ、0．6mg／LBA、0．5mg／L 2,4-D的DPD培养基中。培养约48h,细胞发生第一次分裂。培养到第6天发生第二次分裂。约4周,形成大量细胞团和肉眼可见的小愈伤组织。当愈伤组织长到直径4mm左右时,转入分化培养基中诱导分化,在含0．05mg／L IBA的培养基中诱导生根。对影响原生质体培养与分化的多种因素进行了较为系统的研究。     

烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备

将烟草天蛾Manduca sexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达。表达菌株经0.5 mmol/L IPTG诱导6～8 h后,几丁质酶表达并形成包涵体。在Ni²⁺-NTA亲和柱上经变、复性和纯化,得到可溶的几丁质酶。表达产物经Western 印迹鉴定。采用切胶回收的方法切割回收包涵体,并将回收产物免疫新西兰大白兔,ELISA检测抗体效价达1∶20 000。Western 印迹检测证明抗体特异性良好。     

高活性Co2+替代海因酶中Co2+的定量及酶学活性鉴定

利用产D-海因酶(HDT)的重组pE-hdt/E.coli菌株,在LB培养基中添加40μmol/L的Co2+,37℃培养10 h, 表达产物经Q-Sepharose 阴离子交换剂和Phenyl-Sepharose疏水层析,获得电泳纯Co2+D-海因酶(Co2+-HDT).该酶对底物DL-海因的比活性较HDT高约6倍,达21.8 U/mg.可见光光谱分析表明,在498 nm和568 nm处呈现Co2+海因酶络合物的特征性吸收峰.用ICP-AES测定纯酶金属离子含量,HDT每摩尔亚基含0.93摩尔Zn2+和0.04摩尔Co2+,而Co2+-HDT中每摩尔亚基中含0.17摩尔Zn2+ 和089摩尔Co2+.这一结果表明,HDT中的Zn2+ 已被Co2+所替代.此外,在动力学常数,pH和温度稳定性,金属螯合剂EDTA的影响等方面,HDT和Co2+-HDT也略有差异.