遗传病的基因治疗

基因工程或称重组DNA技术是70年代初发展起来的一门技术,由于它有广阔的理论和应用前景,进展极为迅速,现已广泛应用于药品、农业、工业各方面。在医学方面,基因治疗是人们极为关注的领域,因为人类的遗传疾病有2000种以上,但却没有有效的治疗方法。遗传疾病的根本原因是基因有了缺陷。基因治疗就是在机体中,将有缺陷的基因换上正常的基因,并使之适当表达,或者说,将正常基因插入机体中来纠正遗传缺陷。基因治疗可以分为两类,一是体细胞基因     

质粒pBR322在recA基因缺陷的大肠杆菌细胞内的遗传重组

使用琼脂糖凝胶电泳、DNA限制性内切酶水解以及电子显微镜等分析手段,证明在两株recA~-的大肠杆菌质粒pBR322转化子中,pBR 322 DNA的多倍周长环形寡聚物被大量合成。这个事实说明质粒pBR322 DNA在大肠杆菌细胞中的遗传重组似有独立于rec A基因的途径。本文介绍一个改进的大肠杆菌“清亮裂解液”制备法。按照这个方法制备的细菌清亮裂解液可排除染色体DNA的污染。     

血红蛋白Iwata的一例报告

本文报道一例慢速α链不稳定血红蛋白变异体,在体外易被氧化为高铁血红蛋白。经结构分析证明为Hb Iwata [α87(F8) H(?) Arg],本例在我国属第一次报道。 Hb Iwata于1980年首先发现于日本,迄今未见有第二例报道。我们用醋酸纤维薄膜电泳,在内蒙古呼和浩特市的学生中普查时,发现一例慢速α链变异体,经结构分析证明为Hb Iwata [α87(F8)H(?)→Arg]。     

一例Hb Ottawa[αl5(A13)Gly→Arg]的化学结构分析

本文报道在一个8岁汉族女孩血液中发现一种慢速异常血红蛋白。家系调查结果显示,异常基因来自其母。取患者静脉血制备珠蛋白,然后分离异常肽链,进行异常肽链的胰蛋白酶酶解物指纹图谱分析和异常肽段的氨基酸定量分析。结果证明血红蛋白α链第15位甘氨酸被精氨酸所取代,该变异体是Hb Ottawa(α15(A13)G1y→Arg)。本例异常血红蛋白在国内系首次发现。     

新疆蒙古族、锡伯族新生儿HbF中Gγ/Aγ、AγI/AγT比值测定及基因图谱分析

用HPLC法测定新疆蒙古族78例、锡伯族60例新生儿胎儿血红蛋白(HbF)中Gγ/Aγ以及AγI/AγT比值。%Gγ均值为:蒙古族73.99% ,锡伯族74.59%。%AγI均值分别为蒙古族56.04%和锡伯族64.33%。在蒙古族中发现AγT纯合体4例、杂合体12例;锡伯族中发现AγT杂合体6例。蒙古族中AγT基因频率(fAγT)为0.128,锡伯族为0.05。 Abstract: Gγ/Aγ、AγI/Aγ Ratios of fetal hemoglobin(HbF) in 138 cases of newborns of Megnol (n=78)and Sibo(n=60)ethnic groups in Urumuqi,Xinjiang were determined by HPLC.The means of % Gγ of Mongol and sibo ethnic groups were 73.99% and 7459% respectively.12 Aγ/T cases of heterozygotes in Mongol,6 in Sibo and 4 cases of AγT homozygotes in Mongol were found.The frequencies of AγT gene were 0.128 in Mongol and 0.05 in Sibo respectively.The means of AγT of Mongol and Sibo ethnic groups were 56.04% and 64.33% respectively.     

用RNase保护试验检测珠蛋白基因表达

mRNA的定量分析是基因表达调控研究中应用的重要方法.与斑点杂交、RNA印迹法相比,用RNase保护试验测定RNA具有灵敏度高、操作简便等优点.应用RNase保护试验成功地对转基因鼠中人βE-珠蛋白基因及鼠a-珠蛋白基因的表达水平进行了分析.     

核酸碱基组成分析方法的研究——Ⅱ.核糖核酸中嘌呤和嘧啶衍生物的直接分光光度测定法

(一)核酸碱基在—定pH情况下产生(?)构并表現出不同的紫外綫吸收的特性。利用pH1和pH13的溶剂条件,在AGCU四种混合碱基体系中,由不同两处波长的光密度差值,可以求解出其中每种碱基的含量。本方法适用于合有AGCU四种碱基的提純核糖核酸样品,测定步驟簡单,重复性恆定,回收率在94～106%之間。(二)核酸样品經过氯酸降解后,降解液用蒸餾水稀释至相当于2.0N HClO_4的浓度。离心,吸取一定量的上清液,分別加入标准的HCl及NaOH溶液,調整酸碱度至相当于0.10N HCl(pH1)及0.10N NaOH(pH13)。酸液在249mμ,262mμ,274mμ和290mμ处,碱液在256mμ,258mμ,282mμ和290mμ处,分別用分光光度計测定光密度。测定溶液的适宜总浓度为60～160微克/5.0毫升。按下列公式計算混合体系中碱基的含量。U=0.194·△D(290_(13))-290_1·V A=0.108·△D_(262_1-282_(13))·V—0.221U G=0.198·△D_(249_1-258_(13))·V—0.542U C=0.127·△D_(274-256_(13))·V—0.133U AGCU为碱基的微克分子,V为測定溶液的体积毫升数。(三)核酸样品經1.0N HCl降解后,在嘌呤碱基和嘧啶核苷酸的混合体系內,可按以下公式求出胞嘧啶核苷酸或胞嘧啶含量。C=0.149·△D_(290_1-290_(13))·V C为碱基的微克分手数,V为测定溶液体积的毫升数。(四)在四种碱基不同时存在的体系中,本方法可用作为鉴定体系中的主要碱基种类,并可得到所合碱基的近似含量。     

核酸的酸变性研究 Ⅰ.牛肝大分子核糖核酸在加酸变性过程中的某些理化性质分析

(1)本文测定了牛肝大分子RNA在加酸变性过程中的一些物理化学性质的变化。(2)电位滴定显示牛肝大分子RNA在顺滴定至pH4以下时,表现有一定的滞后现象。顺逆滴定的差值此DNA小。滴定至不同终点时表现出不同程度的变性。(3)加酸变性过程中,RNA的还原粘度逐渐降低,到达pH2.6时还原粘度可降至正常RNA的20—30%。这一变化具有可逆性,但不能恢复至原来的还原粘度值。一般可达到未经变性RNA还原粘度的70—90%。(4)应用RNA在加热时还原粘度上升的性质,证明RNA在短时间内加酸变性并不破坏分子链的完整性。(5)RNA在加酸变性过程中紫外吸收光谱的改变,显示有较小的增色性,在260—300mμ之间光谱有明显向长波一方移动的现象。这些变化都具有可逆性。(6)根据上述结果,对RNA在加酸变性过程中分子可能发生的改变进行了讨论。     

核酸化学结构的研究——Ⅰ.1-氟-2,4-二硝基苯与可溶性核糖核酸的反应

(一)本工作报告了FDNB与RNA的作用条件,并研究了不同断裂程度的RNA和FDNB的反应。(二)对DNP-在大肠杆菌S-RNA分子中的结合位置通过紫外线吸收光谱和牛胰RNase以及蛇毒磷酸双酯酶的降解作用做了探讨,由实验结果推断:DNP-似结合在S-RNA末端5′-G核苷酸的磷酸单酯上。(三)本文说明DNP-的结合量可以用来计算S-RNA的链长及分子量;也可以利用DNP-标记pG末端,以便利于该末端核苷酸排列顺序的研究。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅰ.可溶性核糖核酸的结构分析和一种测定核苷酸分布的方法

(一)利用不同工具酶和化学因素对于核酸的特异降解作用,提出一种简便的系统分析S-RNA RNase I降解物的方法。方法共分四个步骤,连续在纸上进行,可以测定末端以及—PypCpNp—,—PypUpNp—,—PypApNp—,—PypGpNp—,—PupApNp—,—PupGpNp—,—PupCpNp—,—PupUpNp—在核酸链中的分布。(二)对大肠杆菌S-RNA的内部结构进行了分析,得到以下结论:(1)在S-RNA链中,嘧啶或嘌呤核苷酸有“成堆”的排列。属于这种排列的核苷酸,嘧啶占总嘧啶量的56.5%;嘌呤占总嘌呤量的56.4%。(2)S-RNA经RNase I降解后多核苷酸片段(Pup)_nPyp中,嘧啶端C>U,C/U比值为1.5;嘌呤端G>A,G/A比值为1.2。(三)大肠杆菌S-RNA根据本方法分析结果计算,由76±1核苷酸残基组成(未包括(?)Up),分子量约为25000±1000,与应用核碱组成分析计算的结果基本符合。(四)根据—PupCpNp—与—PypGpNp—以及—PupUpNp—与—PypApNp—的测定值基本相同一点,讨论了S-RNA双螺旋结构,核碱成G—C、A—U对排列的可能性。并估计在S-RNA链中,少数不成对排列的碱基,可能分布于嘧啶或嘌呤“成堆”的链节中。