大肠杆菌可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.可溶性核糖核酸5’-磷酸单酯末端核苷酸的排列

(1)比较了E.coli DNP-S-RNA和S-RNA的紫外光谱,并研究了DNP-S-RNA的RNase I的降解条件,结果表明两者无显著差别。(2)对DNP-S-RNA的RNase I降解产物的双向电泳层析图谱进行了分析,并与S-RNA图谱进行了比较,两者图谱中光吸收点的分布一致,相应点经洗脱后,由光谱分析与核碱组成测定证明均含有相同的核苷酸组成。(3)在DNP-S-RNA和S-RNA于同一条件下得到的图谱中,前者的某些光吸收点中含有不同量的DNP-。根据DNP-可以标记S-RNA末端5′-磷酸单酯,分析了DNP-结合物,说明在E.coli S-RNA分子中,B末端核苷酸除pGp…以外,尚有pAp…,pCp…以及痕量的pUp…。和末端相邻的核苷酸排列形式,随特异S-RNA而有不同,有pGpUp…,pGpCp…,p(GpGpAp)Up…,p(GpAp)Up…+pGpGpUp…,p(GpAp)Cp…,pApUp…和pApCp…。其他四核苷酸以上多核苷酸未分析。由于电泳和层析后原点部分标记了DNP-,估计末端核苷酸排列有五、六核苷酸以上的多嘌呤核苷酸的排列形式,其中以G为主。     

超声波辐射对大分子核糖核酸的影响

应用固定条件的超声波处理大鼠肝中的大分子RNA,发现其粘度随超声波处理时同的增长而降低。最低可达到正常粘度的50%左右。经超声波处理后的RNA的沉降系数也降低,由正常的26s及23s降低至12.5s。光学性质,RNA与甲醛的反应量等均未发现有明显的变化。根据试验结果说明,大分子RNA经过超声波处理,分子发生降解,估计分子量由原来的1.3×10~6及1.1×10~6下降至0.34×10~6。降解中并未发现有小分子RNA及寡核苷酸出现。另外大分子RNA虽经降解,但分子内部的氢键并没有明显的改变。     

红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。     

应用荧光原位杂交技术检测人βE珠蛋白基因在转基因小鼠染色体上的整合状态

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法,对小鼠腹腔注射秋水仙素后,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体,将传统的FISH方法加以改进,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态.检测结果表明,外源人βE珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上.FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合后进行染色体定位检测。 Abstract:To determine the integration site of human βE globin gene in the chromosomes of transgenic mice, transgenic mice carrying human βE globin gene were injected intraperitoneally with colchicines, then, bone marrow cells wereisolated and metaphase chromosomes were prepared, the traditional FISH method was improved to detect the integration site of humanβE globin gene in transgenic mice when combined with G-banding. Human t3E globin gene can bedetected in different position of different chromosomes in transgenic mice and FISH signals showed that two mice were heterozygous of human 13E globin gene and one was homozygous. Human t3E globin gene was integrated into thechromosomes of transgenic mice in a random pattern and the results demonstrated that FISH can be used to investigate the integration site of foreign genes in transgenic mice.     

改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列

对传统的反向PCR技术作了一些改进：用巢式PCR扩增含量极少的靶序列;PCR反应体系中加入5%的甲酰胺以减少非特异性扩增.结果表明,改进的反向PCR体系是克隆人基因组已知片段旁侧序列的高度灵敏、高度特异的方法.     

核酸碱基组成分析方法的研究 Ⅰ.RNA和DNA中尿嘧啶和胸腺嘧啶的直接分光光度测定法

测定核酸中的碱基组成对核酸的研究工作有重要的意义。文献中报告测定尿嘧啶和胸腺嘧啶的方法很多。其中,借与试剂呈色的比色法,利用放射性标记物的同位素稀释法等均受到一定程度测定条件的限制,实际上较少采用。目前应用最广的是分光光度测定法;即在不同条件下使核酸降解,用纸层析、离子交换柱层离、电泳等方法将降解物分离,再分别测定各分离物在紫外线区域一定波长处的光密度值。Hotchkiss     

人GM－CSF在链霉菌中分泌表达的研究

对链霉菌表达体系pIJ459/S. lividans TK54中表达外源基因hGM-CSF的可行性进行了探索,分析了影响外源基因表达的某些因素如：SD与ATG之间的距离,时间对表达的诱导等．为获得外源基因的高效表达探索了最适条件,然后利用MEL信号肽与目的基因片段融合,在链霉菌中获得了分泌型hGM-CSF表达产物,其中有1／3直接分泌到培养基中,其纯化产物经TF－1细胞培养及集落形成实验均证实其生物学活性达到5MU／L．     

新疆汉、回、维吾尔、哈萨克族新生儿HbF中~Gγ／~Aγ、~Aγ~I／~Aγ~T比值测定及两例异常者的γ基因图谱分析

作者用高效液相层析（ＨＰＬＣ）法测定了汉、回、维吾尔（维）、哈萨克（哈）族新生儿胎儿血红蛋白（ＨｂＦ）中~Ｇγ／~Ａγ、~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ比值,共３７２例,其中汉族和回族各１０２例、维族９９例、哈族６９例。％~Ｇγ（~Ｇγ／~Ａγ）均值：汉、回、维、哈族分别为６６．８３％、６８．３３％、７０．４４％和６９．７０％。低~Ｇγ者（＜５０％）４例：其中回族３例、哈族１例。高~Ｇγ者（＞８０％）２５例：汉和哈族各５例、回族４例,维族１１例。发现~Ａγ~Ｔ杂合子９９例分别为：汉２１例、回２３例、维２６例、哈族２９例。４个民族各发现１例~Ａγ~Ｔ纯合子。％~Ａγ~Ｉ（~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ）均值：汉５６．８３％、回５５．５８％、维５０．９４％、哈５４．６８％。~Ａγ~Ｔ基因频率依次为０．１１３、０．１２３、０．１４１及０．２２５。两例比值异常者（１例维族高~Ｇγ８５．４２％、~Ａγ~Ｔ杂合体。１例回族低~Ｇγ４３．４％,~Ａγ~Ｉ纯合体）经γ基因图谱分析,确定高~Ｇγ值者γ珠蛋白基因型为－~Ｇγ－~（ＡＧ）γ－~Ａγ~Ｔ（~Ａγ~Ｉ）－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ,（~Ａγ~Ｔ）－;低~Ｇγ值者为－~（ＧＡ）γ~Ｉ－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ－。     

大腸杆菌可溶性核糖核酸的提取及其性质的研究

大腸杆菌經酚直接抽提后以硫酸銨处理,可以得到在电泳与超速离心图譜上均一的, 具有单一末端及接受甲硫氨酸活力較高的sRNA。对sRNA制品的蛋白貭,DNA,多糖含量,比旋光度,紫外光吸收光譜,克原子磷消光系数,核碱組成与链长也进行了测定。     

核酸碱基组成分析方法的研究 Ⅲ.脱氧核糖核酸嘌呤和嘧啶衍生物直接分光光度测定法

利用核碱在一定pH条件下产生构并表現出不同的紫外綫吸收的特点,本文提出了一种測定提純DNA核碱組成的直接分光光度的方法,测定方法簡易,测定时間远較其他測定方法为短,A,G,C,T四种核碱的回收率为94—106%。