基于CRISPR/Cas9系统构建精准调控Wnt信号通路的表达载体及其效果的验证

目的:构建基于CRISPR/cas9系统调控Wnt信号通路的载体,并在细胞水平验证其调控基因表达的效率。方法:选取Wnt信号中负性调控分子,设计并合成能够表达靶向上述分子gRNA的互补DNA克隆序列,BsmBI限制性内切酶酶切载体后,采用分子克隆的方法将上述序列克隆至目的载体lenti-sgRNA-Ms2-zeo,测序正确的克隆通过Lipofectamine2000与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共同转染入293细胞;转染24h后收集细胞,qRt-PCR检测目的基因的表达。结果:筛选了Wnt信号通路中已知的19个负性调控基因;针对每个基因设计了两对gRNA序列,并构建了能够表达gRNA和MS2融合序列的载体,测序结果显示重组质粒的DNA序列与预期完全相符。随机挑选了4个表达载体与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共转进入细胞,qPCR结果显示构建的目的载体联合lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine载体可以协同促进靶分子表达。结论:本研究成功构建了基于CRISPR/cas9基因编辑系统调控Wnt信号的载体。     

利水通络方中医理论探源

<正>脑水肿是脑出血后的危急重症,其预防与治疗越来越受到关注,其中中医药治疗脑水肿是其中一方面,中医对疾病的治疗以整体观为基本,立方考虑了病因病机,不仅在消水肿方面有较好疗效,也参与了其他疾病异常状态的调节。针对此病的特点组方利水通络方,运用于脑出血后经血肿清除术后脑水肿状态的治疗,取得较好疗效,本文就利水通络方立方理论作一探讨。脑出血是卒中的第二大类型,是指原发性的脑血管破裂而引起的脑实质内的出血,又称自发性脑出血。该病发生后,依次出现     

201例浅部真菌病及其病原菌分析

浅部真菌病(Superficial mycosis)是指皮肤、趾甲和毛发发生的真菌感染,浅部真菌病主要的致病真菌包括皮肤癣菌、马拉色菌和念珠菌。随着免疫抑制剂的广泛应用、生活水平及诊疗水平的不断提高,浅部真菌病的发病率有逐年增加趋势。目前各地区有关浅部真菌病及其病原菌种的报道不     

典型黑土区农田土壤线虫群落的纬度分布格局及其驱动机制

东北黑土区是保障我国粮食安全的重要土壤资源, 了解该区域内农田土壤线虫的群落组成及其对环境驱动因子的响应机制, 对于研究黑土区农田土壤生态系统的生物多样性分布格局具有重要意义。2018年9月, 我们在42°50°‒49°08° N的典型黑土区采集了93个农田土壤样品, 利用形态学鉴定技术分析了土壤线虫群落的组成与结构。共鉴定出47个线虫属(相对丰度 > 1%), 其中食细菌线虫中的拟丽突属(Acrobeloides)是典型黑土区农田土壤中的优势属(相对丰度 > 5%)。土壤线虫总丰富度和总多度均随纬度增加而显著增加, 然而类似的变化趋势只出现在食细菌和杂食/捕食线虫中。土壤有机碳是影响土壤线虫丰富度和多度最为重要的环境因子, 其次是月平均温度。典型黑土区农田土壤线虫群落结构以47° N为分界线分为南部和北部两类, 主要归因于线虫群落中植物寄生和杂食/捕食线虫的相对多度在南、北特征属中存在差异。土壤pH值和容重分别是影响南部与北部黑土区线虫群落最重要的环境因子。本研究明确了典型黑土区农田土壤线虫群落的纬度分布格局及其与环境因素的关系, 可为揭示农业活动干扰下土壤生物对环境因子的响应机制提供基础数据和理论参考。     

一种用于PCR的番茄DNA快速粗提方法

在对植物进行分子生物学研究时需要提取植物基因组DNA并对其进行PCR克隆,目前实验室常用CTAB法提取植物DNA,但其步骤相对繁琐,需要用有机溶剂反复抽提,在样本较多时,耗时较长。NaOH可以提取多种物种DNA,本研究优化了实验室条件下更加快速、经济、安全、高效的提取植物DNA的方式,主要包括以下步骤：利用液氮快速粉碎植物样品;采用碱裂解(0.5 mol/L NaOH)的方式一步提取DNA;提取的DNA利用TE缓冲液进行中和;以中和的粗提DNA作为模板进行PCR反应。本研究利用简单的DNA提取流程并结合PCR检测方式,完成了番茄转化子的快速初步鉴定。同时还证明了该NaOH法可用于番茄不同组织的DNA提取。本研究中整个操作过程步骤简单,耗时短,可在短时间内完成大量植物样品的DNA提取,无需使用氯仿、异丙醇等有毒物质,完成提取时间约为CTAB提取法的1/5,而且提取的不同组织DNA完整性较好,质量可观,满足常规的PCR检测,可用于基因克隆及转化子筛选鉴定,具有一定的利用价值和应用前景。     

桔小实蝇对多杀霉素的抗药性风险评估

桔小实蝇Bactrocera doralis (Hendel)是华南地区果蔬重要害虫,近年来危害严重,对农业造成巨大的经济损失.本研究采用阈性状分析方法,对桔小实蝇敏感品系对多杀霉素抗性进行选育,计算了桔小实蝇对多杀霉素的抗性现实遗传力,评估了抗药性产生的风险.结果表明:经过16代选育,桔小实蝇对多杀霉素抗性增加了7.05倍(LC50从0.60 mg/L增加到4.23 mg/L),现实遗传力为0.1774.结果显示桔小实蝇对多杀霉素抗性发展较慢.     

离体黄瓜子叶不定根发生的研究

离体黄瓜子叶在仅加有双蒸水的培养皿中能高频率发生不定根的现象,并对不定根发生过程中过氧化物酶（ＰＯＤ）活性、可溶性蛋白和核酸含量的变化进行了测定。：６ｄ苗子叶不定根发生率最高,不定根发生高峰是在培养后３ｄ～５ｄ,在不定根发生过程中,过氧化物酶生呈上升趋势,可溶性蛋白和核酸含蜈则降低。     

幼儿师专不同专业学生心理健康状况比较分析

目的:比较分析幼儿师专不同专业学生的心理健康状况.方法:选用SCL-90量表对运城幼儿师范高等专科学校07级和08级学生进行问卷调查.结果:幼儿师专不同专业学生的心理健康状况存在显著差异.结论:幼专不同专业的学生心理健康状况与课程开设有关,科学合理的课程体系是幼专女生心理健康发展的必要条件.     

外源SOD和APX基因在转基因烟草中的表达与遗传

分析转超氧化物歧化酶基因（SOD）或抗坏血酸过氧化物酶基因（APX）烟草及其自交和杂交后代的叶片中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性的结果表明：转基因烟草的SOD和POD活性在终花期最强,不同叶位叶中SOD活性差异不明显,POD活性以下部叶为最高;转基因烟草的SOD或POD活性显著高于近等基因的非转基因品系。杂交后代（F1、F2）的SOD活性能保持稳定,略高于亲本;自交后代（S1～S3）与自交亲本的SOD和POD活性相当。