油茶SRAP-PCR反应体系的建立和优化

为了建立油茶SRAP-PCR扩增体系,本研究使用单因素试验设计,对反应体系的Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物浓度5个主要影响因子各设10个不同的水平梯度,筛选出适宜的因子范围;在此基础上,进一步采用L16(45)正交设计,对影响油茶SRAP-PCR反应体系的5个因素在4水平上进行优化,建立了油茶SRAP-PCR最佳反应体系,即25μL体积中包含模板DNA30ng,Mg2+2.8mmol/L,引物0.44μmol/L,dNTP0.2mmol/L和Taq酶1.0U。该SRAP-PCR体系的建立为油茶种质资源遗传多样性分析、品种鉴定及指纹图谱构建等研究提供了一个标准化的程序。     

人胰岛素基因的合成Ⅷ.表达型质粒的构建和在大肠杆菌内生产含胰岛素原的融合蛋白

我们已构建两组质粒,适合于在大肠杆菌内克隆基因和直接大量咸融合蛋白。这些质粒含有E.coli的lac启动基因和部分编码β-半乳糖苷酶的序列,编厔的蛋白长度约590或450个氨基酸殖基(原基因编码1023个氨基酸殖基)。被缩短的β-半乳糖苷酶基因的末端跟随一个多种限制性酶的接头序列;这个序列可被八种限制性酶中的任一种切断,然后插入任何蛋白基因。每组质粒有三种,可以满足所有三种不同的翻译读框。我们克隆了人工合成的入胰岛素原基因到这些质粒上去,在大肠杜菌内可以生产大量β-半乳糖苷酶残基—人胰岛素原融合蛋白。     

黄翅菜叶蜂的初步研究

黄翅菜叶蜂为油菜、白菜、萝卜等十字花科植物主要害虫之一。在四川凉山地区一年可发生五个重迭世代,以老熟幼虫在土壤中作蛹茧越冬,越冬成虫四月上旬出现,第一代成虫发生于5月上旬-6月中旬,第二代6月上旬-7月中旬,第三代7月上旬-8月下旬,第四代8月中旬-10月中旬,10月间开始越冬。成虫量与油菜生育期有极密切的关系,子叶期成虫量为80.1-93.0%。成虫有较强的伪死性,雨天、阴天伪死性较强,晴天较弱,成虫雨天不活动产卵。雌虫一般多于雄虫,雌虫为68.4-70.9%。雌虫最多产卵量为318粒,最少为35粒。雌成虫寿命5-12天,雌虫3-9天。卵期4-41天,卵孵化率一般为93.3-100%。幼虫有5龄,幼虫期10-36天,1-3龄幼虫多躲在叶背,不易发觉,老熟幼虫潜入1-11厘米土层内化蛹,前蛹期5-21天,蛹期7-25天。成虫初羽化时在土面爬行数分钟才能飞翔,晴天飞翔力强。耕翻土壤对蛹有一定机械损伤,暴露于土面的蛹在自然阳光下照晒其死亡率很高。 666、DDT对黄翅菜叶蜂幼虫具有极强的毒杀效果。敌百虫较差。     

亚硒酸钠对巨噬细胞内游离Ca2+和Mg2+的影响

用单细胞阳离子测定系统研究了SeO^2-₃对巨噬细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的影响.实验结果表明:SeO^2-₃高于10^-4mol/L时,有显著的细胞毒性.SeO^2-₃对细胞的毒性作用使细胞内游离Ca²⁺和Mg²⁺的浓度升高但Ca²⁺浓度的升高速率比Mg²⁺快.还有,高于10^-4mol/L的SeO^2-₃对红细胞膜上的Ca²⁺-ATP酶活性有明显抑制作用.     

海藻糖对医用诊断工具酶活性保护研究

研究了干燥条件下海藻糖对胆固醇氧化酶,胆固醇脂酶和过氧化物酶的活性保护作用,并对影响酶活性保存的其它因素进行了试验。加海藻糖干燥的以上三种诊断酶分别在70,55和37℃温度下放置40d,150d和210d后再次测定酶活,结果表明这三种酶的活性均保持在90％以上,而未加海藻糖保护的对照,活性降至20％以下。除海藻糖浓度外,缓冲系统中的介质、离于强度、pH是影响酶活的关键因素。     

HIV的DNA诊断

<正>以DNA诊断为题论述不同病原性因子的文章很难写,原因在于方法及其原理基本相同。但人免疫缺陷病毒(HIV,或艾滋病病毒)与其它病原体却稍有区别,即:①HIV属于逆转录病毒科;②HIV具有生物界的最高突变率;③病毒在体内的存在部位并非单一。 本稿在主要考虑上述数点的同时,也以最近我们研究室所进行的多聚酶链反应(PCR)为重点加以叙述。PCR虽然非常敏感,但必须在设适当对照后进行详细检查,否则会出现假阳性和假阴性事例。特别是在抗HIV抗体阳性,PCR阴性时,应考虑以下几种可能性:     

结核分支杆菌耐链霉素分子机制的研究进展

链霉素（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ,ＳＭ）是一线抗结核药物,本文概要地介绍了结核分支杆菌耐链霉素的分子机制。最近的研究认为大多数结核分支杆菌分离株耐ＳＭ是由于核糖体蛋白Ｓ１２编码基因（ｒｐｓＬ）和（或）１６ＳｒＲＮＡ编码基因（ｒｒｓ）突变所致,少数菌株的耐药机制尚需进一步研究     

霍乱菌苗的分子设计

引言 一个多世纪以前,由水传播的霍乱弧菌(V.cholerae)01群菌被疑为是人类霍乱的病原菌,接着Robert Koch证明了二者之间的关系并为菌苗的研制开通了道路。不过,迄今仍无广泛应用的完全满意的菌苗,对于此病的致病机理也远未认识完全。     

HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

HCVRNA反转录PCR技术的建立及对血液样品的检测

实验建立了ＨＣＶ　ＲＮＡ的反转录和套式ＰＣＲ技术,扩增出２３２ｂｐ的核酸片段,经酶切电泳图谱和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,来自ＨＣＶ基因５,端非编码区。实验从抗ＨＣＶ阳性的１８例血浆样品和１９例血清样品中分别检出７例和１３例ＨＣＶＲＮＡ阳性。