基于生物质谱的胶原蛋白定量检测方法

本研究旨在建立一种基于特征多肽的胶原定量检测方法,通过序列比对的方法筛选胶原蛋白特征多肽,利用胰蛋白酶将牛Ⅰ型胶原蛋白标准品进行酶解,采用液质联用技术(HPLC-MS)对特征多肽进行检测,建立特征多肽丰度与胶原蛋白浓度对应关系并用于实际样品分析。结果表明,牛Ⅰ型胶原蛋白中检测出6种特征多肽,其中多肽GEAGPSGPAGPTGAR由于其丰度高且二级质谱稳定适合作为定量检测的特征多肽,多肽信号强度与蛋白浓度(0.1-3.0 mg/m L)呈良好线性关系。将所建方法用于实际样品分析,牛跟腱胶原蛋白含量为90.2%,胶原海绵中胶原蛋白含量为93.4%,检测结果与基于氨基酸组成分析的结果一致。该研究表明基于HPLC-MS的特征多肽分析方法进行胶原蛋白定量检测具有可行性,该方法在含胶原蛋白医疗器械等生物制品质量控制方面具有应用前景。     

3株不同表型马尔尼菲青霉外分泌蛋白酶活性比较

目的探讨如何有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌及比较3株不同表型的马尔尼菲青霉菌株之间外分泌蛋白酶活性差异。方法选用临床分离的马尔尼菲青霉B-6323株(P株)及其两个不同表型的突变株M/M株和M/Y株,用以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基(蛋白酶诱导培养琼脂基)诱导其外分泌蛋白酶分泌。将pH值为4.0、5.6及7.2的蛋白酶诱导培养琼脂基平板打孔后分别等量接种上述3株菌,分别置于25℃及37℃培养6 d后,行考马斯亮兰G-250染色,测定各菌株周围的透亮圈(蛋白分解环)直径。结果以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基可有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌;3株马尔尼菲青霉在任意3种pH值培养基中培养,37℃培养下菌周透亮圈直径大于25℃培养下,差异经t检验有统计学意义。经方差分析,37℃,pH4.0、5.6、7.2培养条件下马尔尼菲青霉菌周透亮圈直径之间差异有统计学意义(F值为97.198,P=0.000 1),用SNK法进行两两比较发现pH4.0与pH7.2菌周透亮圈直径及pH5.6与pH7.2菌周透亮圈直径差异均有统计学意义。当温度为37℃或25℃时,在任意一个pH值下,均为M/M株的菌周透亮圈直径均数最大,其次为P株,M/Y株最小。结论马尔尼菲青霉在37℃,酸性培养条件(pH4.0、5.6)下外分泌蛋白酶活性大,且不同表型株之间外分泌蛋白酶活性有差异,M/M株及P株为高外分泌蛋白酶活性株,M/Y株为低外分泌蛋白酶活性株。     

三倍体葡萄‘夏黑’的花粉母细胞减数分裂行为观察及其育性研究

为探究三倍体葡萄‘夏黑’的育性及其细胞学机制,对其花粉母细胞减数分裂进程中的染色体行为及育性水平进行研究。结果表明:(1)三倍体葡萄‘夏黑’花粉母细胞减数分裂进程中存在部分染色体提前分向两极、落后染色体、染色体桥、平行纺锤体、不均等分离、微核等染色体异常行为,其中不均等分离现象出现的频率最高(65.68%)。(2)‘夏黑’葡萄的花粉离体萌发率为1.65%,花粉直径大小范围在18.0~50.0μm之间,且花粉直径分布呈双峰型。(3)‘夏黑’葡萄具有一定的育性,作为亲本与四倍体品种杂交均获得了杂交子代。研究认为,减数分裂的异常是三倍体葡萄‘夏黑’育性低的细胞学原因,但同时也形成了少量可育的未减数配子,可以作为中介材料应用于葡萄育种。     

凋落物分解主场效应及其土壤生物驱动

凋落物分解主场效应是指凋落物具有在其生长的栖息地比在别的生境分解更快的特征,土壤生物的特化作用被认为是主场效应的产生机理.主场效应是除基质质量和物理化学环境外控制凋落物分解的重要因子,可影响模拟精度的8％.凋落物分解主场效应驱动机制的深入研究对促进分解模型中纳入生物因子,提高区域尺度模拟精度具有重要作用.虽然时间和基质质量可导致主场效应强度变化,但不能全面解释主场效应强度差异特别是负效应的产生.通过分析凋落物分解过程中土壤生物的作用机理,指出凋落物分解主场效应的土壤生物驱动可能包括土壤微生物的调节性适应,土壤动物的后期插入以及物理化学环境的间接影响.为深入了解主场效应土壤生物驱动机制,更好地模拟凋落物分解过程,提出延长凋落物分解交互移置实验时间,拓展实验空间,结合室内模拟分析和构建分解模型等方法与途径.     

玉米苗期耐低铁能力的综合评价及其预测

为了筛选和鉴定耐低铁玉米品种应用于生产,本研究以23个玉米品种为材料,测定低铁胁迫和正常供铁(对照)玉米幼苗的株高、茎粗、可见叶、展叶、叶面积、根长、根体积、总干重、活性铁、含铁量、铁积累量和叶绿素含量等15个性状,以各性状的相对值作为衡量指标,利用主成分分析、隶属函数分析和聚类分析对其进行耐低铁能力的综合评价。结果表明不同玉米品种耐低铁能力存在明显的基因型差异;邡玉1号、福康玉909、正大619、正红102、福得2号、正红2号耐低铁能力较强;展叶数、叶面积、根长、根干重、铁积累量可作为玉米耐低铁品种苗期筛选指标;可利用玉米苗期耐低铁能力的回归模型:D=(-384.23+2.71X4+2.50X5+3.22X6+1.70X9+4.86X14)×10-3对玉米苗期耐低铁能力进行预测。