重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究

采用化学法全合成了编码人血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ,ＴＰＯ）成熟肽Ｎ端１５３氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶－ＴＰＯ１５３（ＧＳＴ－ＴＰＯ１５３）融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白４０％的高效表达．进一步采用ＰＣＲ方法分别对ＴＰＯ合成基因及ＴＰＯｃＤＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）序列进行定点突变,以降低这一区域的Ｇ－Ｃ含量．将突变序列分别插入到ｐＢＶ２２０表达载体中,重组质粒在转化大肠杆菌ＪＭ１０９后,均获得了表达,其中ＴＩＲ区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的１５％．为研究基因下游结构对表达的影响,在不改变氨基酸组成的基础上,构建了ＴＰＯ合成基因与ＴＰＯｃＤＮＡ的杂合序列表达质粒．研究结果表明翻译起始效率是影响ｒｈ－ＴＰＯ在大肠杆菌中表达的重要因素之一,同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响．     

从织锦芋螺中克隆α芋螺毒素序列

为了从我国南海产织锦芋螺（Ｃｏｎｕｓｔｅｘｔｉｌｅ）中分离新的毒素序列并研究其应用价值,进行了织锦芋螺毒素基因的分离工作．从织锦芋螺毒管中提取ｍＲＮＡ,以Ａ族芋螺毒素的信号肽编码部分和３′端非翻译部分的保守序列为引物,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增和序列分析方法获得新的芋螺毒素序列．结果得到两种不同的α芋螺毒素序列,两者都属于α４／７亚型芋螺毒素,预测其成熟肽序列分别为Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ（Ｃ端Ｇｌｙ可能被酰胺化）和Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ－Ａｒｇ．采用传统的生化分离手段尚未从织锦芋螺中获得过α芋螺毒素序列,这两种α芋螺毒素作用的种属特异性、受体类型特异性和在小细胞肺癌的诊断和治疗中的应用价值有待进一步研究     

CD自杀基因系统对T淋巴细胞作用的实验研究

去除供者骨髓中的T淋巴细胞可有效防止移植物抗宿主病(GVHD)的发生.用含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（EC-CD）基因的高滴度逆转录病毒(1.5×10⁵ CFU/ml)感染小鼠T淋巴细胞,G418筛选,获得稳定表达CD基因的T/ pCD₂细胞.经PCR和RT-PCR方法检测证明CD基因已成功地导入T淋巴细胞中并有效表达.分别用不同浓度的5-FCyt作用于T/ pCD₂及T淋巴细胞,光镜下观察不同时间细胞数目变化及MTT法检测细胞活性.结果表明,5-FCyt浓度大于1 μmol/L时,即对T/ pCD₂细胞有显著的杀伤作用,而对正常T淋巴细胞基本无毒性,且T/ pCD₂细胞在加入药物后生存时间（3～5 d）明显短于未转染的T淋巴细胞（大于14 d）.     

吉林省虫草属一新记录种

记述首次在长白山及净月潭采集到的蚂蚁虫草 (CordycepsmyrmecophilaCes )的形态特征及生态分布     

中国人血小板生成素cDNA的克隆及测序

调控血小板生成的血小板生成素(Thrombopoi-erin,TPO)基因序列最近被阐明,这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口,同时也为临床治疗血小板贫血提供了一种极有潜力的候选蛋白因子。为了研究TPO的结构与功能的关系,探索其体外高效表达的途径,同比较不同人种TPO cDNA序列的多态性,我们参照文献发表的西方人TPO cDNA序列,用聚合酶     

论“网络发票”与“电商征税”

《网络发票管理办法》2013年4月1日起开始实施,该办法的实施是税务机关为了更好地规范税收征纳,保障国家税收收入的重要举措,该办法的实施可以很大程度上降低税收征纳双方的成本,却被很多人误解为该办法的实施是对电子商务征税的信号。也使网络发票开具和网店征税再次成为关注热点。本文将对"网络发票"与"电商征税"相关问题进行分析     

不同环境条件对白灵侧耳菌丝生长的影响

对白灵侧耳(Pleurotus nebrodensis)菌丝生长适宜的温度、培养料含水量、pH值进行了研究。结果表明,白灵侧耳菌丝生长的适宜温度范围为22~28℃,最适温度28℃;培养料适宜绝对含水量65%~75%,最适绝对含水量75%;适宜pH值为5.02~7.24,最适pH值5.79。     

动物细胞培养和细菌发酵的工艺经济学:组织型纤溶酶原激活剂的一例研究的分析

工艺决定产品,拿最近批准进入市场的tPA来说,它的售价是2200美元/剂量,是链激酶的近20倍,因而降低生产成本对这些产品是至关重要的。由于生化工程学家没有现成的生化工艺规律可循,在放大规模之前他们要做细致的小规模试验。这篇文章就通过分析一例研究,来说明决定一种产品的重要工艺、设计和经济学方面的考虑。1 模型工艺和生产系统的选择 我们选择tPA的生产作为模型工艺,因为它被认为是年轻的生物技术产业的先驱产品;同时也是第一个经过基因工程改造的哺乳动物细胞生产的上市药     

红细胞生成素cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

将(?)红细胞生成素(EPO)cDNA构建的重组表达质粒用电穿孔法引入COS-7细胞,ELISA和红系集落测活结果表明,该重组质粒在哺乳动物细胞中能够表达有生物活性的红细胞生成素。进一步将其转染CHO-dhfr~-细胞,经氨甲喋呤(MTX)加压扩增,混合细胞中各克隆表达水平比较一致,细胞的平均表达水平为2-3μg/10~6 Cells/24hr。细胞冻存后复苏其表达水平与冻存前一致,表明外源基因整合稳定。     

降纤酶治疗急性脑梗死临床疗效观察

目的 为了观察降纤酶治疗急性脑梗死临床疗效及其安全性。方法 采用随机双盲对照方法,对４０例（治疗组２１例,对照组１９例）发病２￣２４ｈ的急性发编号随机用药（降纤酶或安慰剂）,首次１０ｕ,第３、５天５ｕ分别加入生理盐水２５０ｍｌ缓慢静滴,同时应用钙拮抗剂 血化瘀等。用药前后分别检测纤维蛋白原（Ｆｇ）,凝血酶原时间（ＰＴ）,凝血的活动度（ＰＡ）,其中１８例（治疗组１０例,对照组８例）还检测了优球蛋白酶