尼罗罗非鱼生长激素及其受体的cDNA克隆与mRNA表达的雌雄差异

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌雄鱼生长差异明显,为了探讨其原因,本文采用RT-PCR方法克隆了尼罗罗非鱼生长激素(Growthhormone,GH)及其受体(Growth hormone receptor,GHR)的cDNA序列,并应用半定量RT-PCR方法比较了雌、雄尼罗罗非鱼垂体GHmRNA、肝脏GHRmRNA、肌肉GHRmRNA的表达差异。序列分析表明:GH开放阅读框为615bp,共编码204个氨基酸;GHR开放阅读框为1908bp,共编码635个氨基酸。以RT-PCR方法研究了GH、GHR在各组织的分布情况,结果表明:GH仅在垂体中检测到有表达,而GHR在所检测的18种组织中均有表达,其中以肝脏、肌肉、性腺、下丘脑、胸腺表达量较高。以半定量RT-PCR方法进一步比较了雌、雄尼罗罗非鱼垂体GHmRNA、肝脏GHRmRNA、肌肉GHRmRNA的表达量,结果表明:雄鱼垂体GHmRNA和肝脏GHRmRNA的表达量均显著高于雌鱼,肌肉GHRmRNA的表达量则无显著差异,推测垂体GHmRNA和肝脏GHRmRNA表达的雌雄差异是尼罗罗非鱼雌雄生长差异的主要原因之一。     

17β-雌二醇对不同性腺发育时期鲤鱼生长激素分泌的影响

目的　以不同性腺发育阶段的雌性鲤鱼为材料 ,采用脑垂体碎片离体灌流孵育的方法 ,研究 17β 雌二醇对由神经内分泌因子—促性腺激素释放激素和促甲状腺素释放激素诱导的生长激素分泌的调节作用的季节性变化特点。方法与结果　用 10 - 8mol L和 10 - 1 0 mol L 17β 雌二醇对鲤鱼脑垂体碎片进行 10～ 12h的过夜孵育后 ,性腺处于退化期和发育期的的鲤鱼脑垂体对浓度依次为 10 - 9,10 - 8和 10 - 7mol L的促性腺激素释放激素类似物的脉冲刺激的反应性显著大于对照组 ,但在成熟期 17β 雌二醇作用组的反应性与对照组无显著性差异 ;经过同样浓度的 17β 雌二醇预孵育后 ,鲤鱼脑垂体碎片对浓度依次为 10 - 1 0 ,3× 10 - 8和 10 - 7mol L的促甲状腺素释放激素脉冲刺激的反应性也表现出季节性差异 ,反应性的增强作用表现为 :成熟期 >发育期 >退化期。结论　性类固醇激素具有调节脑垂体对刺激生长激素分泌的神经内分泌因子的反应性的作用 ,这种调节作用与鱼体的性腺发育状态有关 ,具有季节性变化的特点     

花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106 cfu/mL,总容量为5.16×107 cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43－3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素（mGnRH和cGnRH-II）cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRH cDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－22位氨基酸）、mGnRH十肽（23－32位氨基酸）、一个三肽裂解位点（33－35位氨基酸）和56个氨基酸的GnRH相关肽（36－91位氨基酸）;花鳗鲡cGnRH-II cDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－24位氨基酸）、cGnRH-II十肽（25－34位氨基酸）、一个三肽裂解位点（34－36位氨基酸）和50个氨基酸的GnRH相关肽（37－87位氨基酸）。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-II cDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%－78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低（63%－67%）。采用RT-PCR 方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明该两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。     

外源生长激素基因在蓝太阳鱼中的整合、表达和遗传

通过基因重组, 将石斑鱼生长激素基因编码序列克隆到鲤鱼βactin基因启动子下游, 构建了“全鱼”生长激素基因表达载体pCAecGHc。采用显微注射法, 研制出转“全鱼”生长激素基因蓝太阳鱼。经过PCR、PCR Southern杂交、RT PCR等技术对转植基因在转基因蓝太阳鱼中的整合和表达情况进行了检测。结果表明:转植基因在两批次P0 转基因蓝太阳鱼中的整合率为5 .60%和12. 26%, 并在转基因鱼中得到了正确表达, 表现为嵌合性表达。对转基因蓝太阳实验鱼进行了对照养殖实验, 初步显示转基因蓝太阳鱼具有较快的生长表型效应, 比对照组生长速度快20%-40%左右。应用近交策略培育出了两个转基因蓝太阳鱼F1 品系, 检测表明, 转植基因在两个品系的整合率分别为22 .03%和40 .8%。结果表明: 转植基因通过性腺传递给了子代, 同时也证实转基因P0 代的生殖腺为转植基因的嵌合体。     

诱导大鳍鱯和长吻鮠排卵过程中血清GTH水平的变化

繁殖期从嘉陵江收集性成熟的大鳍■ 和长吻 野生亲鱼,用Ｌｉｎｐｅ方法（即ＬＨＲＨ－Ａ加多巴胺Ｄ２受体拮抗剂地欧酮）或传统的ＬＨＲＨ—Ａ加脑垂体的方法进行催产,定时取血样,用放射免疫方法测定催产过程中血清ＧＴＨ水平的变化,进一步证实鲇形目鱼类ＧＴＨ的分泌受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素ＧｎＲＨ和多巴胺的双重调节;排卵和产卵也是以血清ＧＴＨ的急剧升高为先导的,而最终能否排卵还有赖于血清ＧＴＨ峰是否超过“排卵阈值”。尽管催产后的大鳍 和长吻 雄鱼血清ＧＴＨ水平也有一个高峰出现,但血清ＧＴＨ水平升高幅度都大大低于雌鱼,这种现象在硬骨鱼类可能具有普遍性。     

年龄对促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)刺激的和多巴胺能药物抑制的鲤鱼促性腺激素(GtH)分泌的影响

年龄对高等脊椎动物生殖系统功能的影响已有大量研究.       

环境因素和促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)对鲤促性腺激素(GtH)分泌和排卵的影响

环境因素对硬骨鱼类GtH的分泌和生殖活动起着重要的调节作用。本文为进一步探讨环境因素对鱼类生殖活动的调节作用机理的研究结果。       

鳗鲡繁殖生物学研究 Ⅱ.下海雌鳗脑垂体超显微构造的研究

神经垂体主要由神经分泌纤维、脑垂体细胞和微血管组成。神经分泌纤维主要是无髓鞘神经纤维,也有一些是有髓鞘神经纤维。神经垂体中还有一些多层体构造。神经分泌纤维有两个基本类型:A型纤维含有直径为1250—1750Å的神经分泌颗粒;B型纤维含有直径为450—1000Å的颗粒状囊泡。腺垂体的分泌细胞按其超显微构造的特点和所含的分泌颗粒大小不同可以区分为六个类型:催乳激素分泌细胞、促甲状腺激素分泌细胞,促肾上腺皮质激素分泌细胞、促生长激素分泌细胞、促性腺激素分泌细胞和后腺垂体的分泌细胞。       

白鲫鱼种对水绵消化吸收率的研究

白鲫是杂食性鱼类,其鱼种主要食物是有机物碎屑和浮游生物,其中包括一定数量的丝状藻类,如水绵等。应用P32放射性同位素进行示踪试验和鱼体放射自显影,证实白鲫鱼种可以摄食和消化利用水绵。在我们的试验条件下,白鲫取食水绵的摄食率(日摄食量占鱼体重量的百分比)为1.85-4.00%,对水绵的实际消化吸收率为48.49%。       

高效能的促黄体素释放激素类似物对金鱼促性腺激素分泌的作用

金鱼对LRH-A反应有明显的季节性变化,在早春(2月)生殖季节开始前诱导的血清GtH含量最高;在生殖季节过后(5—6月)GtH的释放反应减弱,而在夏季(8月)性腺处于退化状况时,反应很弱或者没有反应。LRH-A注射剂量的高低对血清GtH含量增高的影响并不都很明显,但高剂量(1.0微克/克体重)能诱导较高的血清GtH含量并能维持24小时。经过多次注射高剂量以后,脑垂体GtH含量下降。温度、注射剂量、注射间隔时间都和诱导的血清GtH含量有密切关系。连续9—10天每日注射LRH-A,能刺激性腺退化的金鱼恢复性腺发育,但对性腺已开始发育的金鱼,却抑制或减慢其性腺进一步发育。