长臀鮠脑垂体和血清中促性腺激素的生殖周期变化

Changes in the pituitary and serum gonadotropin levels of Cranoglanis bouderius were studied at different stages of ovarian development.Based on African catfish gonadotropin(cfGTH) and its anti-serum(Racf),heterologous radio-immunoassay(RIA) for the gonadotropin(GTH) of Cranoglanis bouderius was developed.The pituitary GTH contents at the late development stage were significantly higher than that at the mature,ovulation or regressed stages,while serum GTH levels at maturation and ovulation were significantly higher than that at late development and regressed stages,Injection of gonadotropin-releasing hormone analogue(GnRH-A) stimulated GTH secretion.Domperidone (DOM) had no effect on the basal serum GTH level.Injection of GnRH-A and DOM significantly enhanced the GTH levels stimulated by GnRH-A alone.These results indicate that GTH release in Cranoglanis bouderius is under the dual regulation of gonadotropin releasing hormone(GnRH) and dopamine(DA) from the hypothalamus,but DA can only inhibit GTH release induced by GnRH and not basal GTH release[Acta Zoologica Sinica 49(3):399-403.2003].     

17β-雌二醇对不同性腺发育时期鲤鱼生长激素分泌的影响

目的　以不同性腺发育阶段的雌性鲤鱼为材料 ,采用脑垂体碎片离体灌流孵育的方法 ,研究 17β 雌二醇对由神经内分泌因子—促性腺激素释放激素和促甲状腺素释放激素诱导的生长激素分泌的调节作用的季节性变化特点。方法与结果　用 10 - 8mol L和 10 - 1 0 mol L 17β 雌二醇对鲤鱼脑垂体碎片进行 10～ 12h的过夜孵育后 ,性腺处于退化期和发育期的的鲤鱼脑垂体对浓度依次为 10 - 9,10 - 8和 10 - 7mol L的促性腺激素释放激素类似物的脉冲刺激的反应性显著大于对照组 ,但在成熟期 17β 雌二醇作用组的反应性与对照组无显著性差异 ;经过同样浓度的 17β 雌二醇预孵育后 ,鲤鱼脑垂体碎片对浓度依次为 10 - 1 0 ,3× 10 - 8和 10 - 7mol L的促甲状腺素释放激素脉冲刺激的反应性也表现出季节性差异 ,反应性的增强作用表现为 :成熟期 >发育期 >退化期。结论　性类固醇激素具有调节脑垂体对刺激生长激素分泌的神经内分泌因子的反应性的作用 ,这种调节作用与鱼体的性腺发育状态有关 ,具有季节性变化的特点     

野生鲇鱼生长激素分泌的季节变化及其神经内分泌调控

采用离体垂体碎片灌流孵育系统 ,将处于性腺退化期野生鲇鱼垂体切成约 1mm3 的碎片 ,用M 199冲洗之后放入灌流柱的两层Cytodex -Ⅲ微载体之间 (温度为 19± 1℃ )。每 5分钟收集一管灌流液 ,- 2 5℃贮存待测GH。采用鲤鱼GH放射免疫测定方法 (cGHRIA)测定鲇鱼垂体碎片灌流液以及血清和垂体中的GH含量。结果表明 :促黄体素释放激素类似物 [desGly10 (D Ala6)LHRHethylamide ,LHRH A]不能显著刺激离体垂体碎片基础GH分泌 ,注射LHRH A后不能显著提高血清基础GH水平 ;注射DA能显著提高鲇鱼血清基础GH水平 ,APO能以剂量依赖方式显著刺激垂体碎片基础GH分泌。雌、雄鲇鱼血清GH水平在 6月达到峰值 ,垂体GH水平在 3月和 7月份各出现一个峰值 ,各个季节雌鱼垂体和血清GH水平均显著高于雄鱼。鲇鱼血清和垂体GH水平与生殖周期有密切联系。     

黑鲷生长激素放射受体分析法的建立及其受体组织的分布

利用黑棘鲷 (Acanthopagrusbutcheri)生长激素 (brGH )作为配体 ,建立了黑鲷 (Sparusmacrocephalus)生长激素受体放射受体分析法 (RadioreceptorAssay ,RRA)并分析其组织分布特征。在 2 5℃下 ,12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合具有如下特点 :(1)时间依赖性　特异性结合达最大结合量一半的时间 (Ta1/ 2 )为 10 4h ,结合达到平衡状态需 2 0h ;激素 受体复合物的解离在 3h之内最快 ,2 4h后仅解离约40 % ,表明激素 -受体复合物的结合仅具部分可逆转性 ;(2 )可饱和性　12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合随着膜蛋白浓度或12 5I brGH加入量的上升而呈逐渐上升并达到饱和状态的趋势 ;(3)可取代性　12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合可被非标记brGH竞争性地取代 ,将特异性结合取代 5 0 % (ED50 )所需非标记brGH约为 3 8ng ,非标记重组金鱼生长激素 (rgfGH)及人生长激素 (hGH)对12 5IbrGH的竞争性取代能力明显较brGH低 ,而重组金鱼催乳素 (rgfPRL)、羊催乳素 (oPRL)在该系统中几乎无交叉反应。Scachard作图分析表明黑鲷肝细胞膜蛋白存在brGH单一的高亲和结合位点 ,Ka为 (3 49± 0 2 4)× 10 10 (mol/L) -1,Bmax为 146 8± 10 6fmol/mgprotein。结果表明 ,brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的     

肠溶微囊式重组鲤生长激素促生长剂的研制

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法和酶联免疫吸附受体测定法,研制肠溶微囊式重组鲤生长激素（rcGH)促生长剂,结果表明,肠溶树脂Ⅰ和Ⅱ溶解的pH阈值分别为6.0和6.6,当大于阈值时,肠溶微囊Ⅰ和Ⅱ内rcGH的释放率随pH值升高和时间延长而逐渐升高,直至rcGH完全释放,投喂胡子鲶（Clarias batra-chus)含肠溶微囊Ⅰ（内含rcGH0后,血清rcGH水平15h后开始升高,24h时达最大值,随后呈下降趋势,48h后血清中检测不到rcGH;而投喂含rcGH的药饵（1mgrcGH/g饵料）,6-60h在胡子鲶血清中均未检测到rcGH。说明肠溶微囊Ⅰ对rcGH起一定保护作用,肠溶微囊Ⅰ和Ⅱ具有抗酸肠溶胶囊的特点和作用。     

花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106 cfu/mL,总容量为5.16×107 cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43－3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素（mGnRH和cGnRH-II）cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRH cDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－22位氨基酸）、mGnRH十肽（23－32位氨基酸）、一个三肽裂解位点（33－35位氨基酸）和56个氨基酸的GnRH相关肽（36－91位氨基酸）;花鳗鲡cGnRH-II cDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－24位氨基酸）、cGnRH-II十肽（25－34位氨基酸）、一个三肽裂解位点（34－36位氨基酸）和50个氨基酸的GnRH相关肽（37－87位氨基酸）。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-II cDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%－78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低（63%－67%）。采用RT-PCR 方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明该两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。     

外源生长激素基因在蓝太阳鱼中的整合、表达和遗传

通过基因重组, 将石斑鱼生长激素基因编码序列克隆到鲤鱼βactin基因启动子下游, 构建了“全鱼”生长激素基因表达载体pCAecGHc。采用显微注射法, 研制出转“全鱼”生长激素基因蓝太阳鱼。经过PCR、PCR Southern杂交、RT PCR等技术对转植基因在转基因蓝太阳鱼中的整合和表达情况进行了检测。结果表明:转植基因在两批次P0 转基因蓝太阳鱼中的整合率为5 .60%和12. 26%, 并在转基因鱼中得到了正确表达, 表现为嵌合性表达。对转基因蓝太阳实验鱼进行了对照养殖实验, 初步显示转基因蓝太阳鱼具有较快的生长表型效应, 比对照组生长速度快20%-40%左右。应用近交策略培育出了两个转基因蓝太阳鱼F1 品系, 检测表明, 转植基因在两个品系的整合率分别为22 .03%和40 .8%。结果表明: 转植基因通过性腺传递给了子代, 同时也证实转基因P0 代的生殖腺为转植基因的嵌合体。     

诱导大鳍鱯和长吻鮠排卵过程中血清GTH水平的变化

繁殖期从嘉陵江收集性成熟的大鳍■ 和长吻 野生亲鱼,用Ｌｉｎｐｅ方法（即ＬＨＲＨ－Ａ加多巴胺Ｄ２受体拮抗剂地欧酮）或传统的ＬＨＲＨ—Ａ加脑垂体的方法进行催产,定时取血样,用放射免疫方法测定催产过程中血清ＧＴＨ水平的变化,进一步证实鲇形目鱼类ＧＴＨ的分泌受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素ＧｎＲＨ和多巴胺的双重调节;排卵和产卵也是以血清ＧＴＨ的急剧升高为先导的,而最终能否排卵还有赖于血清ＧＴＨ峰是否超过“排卵阈值”。尽管催产后的大鳍 和长吻 雄鱼血清ＧＴＨ水平也有一个高峰出现,但血清ＧＴＨ水平升高幅度都大大低于雌鱼,这种现象在硬骨鱼类可能具有普遍性。     

饥饿和再投喂对草鱼鱼种生物化学组成的影响

分析了饥饿１５天和再投喂２１天的草鱼鱼种肝脏和肌肉生物化学组成的变化，结果表明：（１）饥饿降低白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，使肝脏蛋白质含量升高，再投喂后，肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和白蛋白质含量均恢复至正常投喂组水平，白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值升高并显著高于正常投喂组水平；（２）饥饿状态下，肝脏和肌肉的脂类含量降低，水含量升高，再投喂后，肝脏和肌肉的脂类含量升高     

年龄对促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)刺激的和多巴胺能药物抑制的鲤鱼促性腺激素(GtH)分泌的影响

年龄对高等脊椎动物生殖系统功能的影响已有大量研究.