毕赤酵母胞嘧啶碱基编辑器的设计与功能评价

【目的】在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）中建立一套分子靶向突变系统,为毕赤酵母的基因工程改造提供高效的编辑工具。【方法】基于规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9）技术,设计并构建nCas9与胞苷脱氨酶融合表达的胞嘧啶碱基编辑器（cytosine base editor,CBE）,并选择酵母基因组中富含碱基C的一段序列作为靶标以评价CBE的碱基编辑功能。电转化酵母后,利用高通量测序技术分析CBE的编辑效率及编辑模式,并进一步探究连接肽长度、融合蛋白相对位置和gRNA靶向序列（即spacer）长度等因素对CBE功能的影响。【结果】nCas9与PmCDA1融合组成的CBE能够实现毕赤酵母基因组碱基C的高效编辑。当连接肽长度为（GGGGS）₁₀时,CBE的编辑效率最高,编辑窗口位于前间隔序列邻近基序（protospacer adjacent motif,PAM）远端的C20–C14之间,其中C18的编辑效率可达85.1%。nCas9与PmCDA1相对位置的改变对CBE的编辑效率和编辑模式的影响不大。而gRNA靶向序列长度影响着CBE的编辑效率,且gRNA靶向序列长度不能低于17 nt,但19–23 nt之间均可引导CBE对基因组的高效编辑。【结论】本研究在巴斯德毕赤酵母中构建了一套具有高效碱基编辑活性的胞嘧啶碱基编辑器,为基于毕赤酵母的基础和应用研究提供了工具支持。     

甘肃三种杜鹃属植物挥发油含量及其抑菌活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取甘肃三种杜鹃属植物的挥发油并称重,K-B纸片琼脂扩散法测定其抑菌活性,二倍稀释法测定最低抑菌浓度,结果显示烈香杜鹃、千里香杜鹃、头花杜鹃挥发油含量差异较大,其对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性,对大肠艾希氏菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌没有抑制作用,并且三种植物挥发油对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为0.007 8 mL/mL,0.031 3 mL/mL,0.003 9 mL/mL。     

A型塞内卡病毒2C蛋白通过STING调控IFNβ、TNF-α和IL-6的表达

【背景】A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是新发猪塞内卡病毒病的病原,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的单股正链RNA病毒。可引起新生仔猪死亡和成年猪口、蹄部出现水泡。先天免疫是宿主抵御病毒入侵的第一道防线,但SVA与宿主抗病毒先天免疫的相互作用机制尚不清楚。【目的】探究SVA非结构蛋白2C在先天免疫应答中的作用机制。【方法】利用SVA感染和通过在猪PK-15细胞中过表达SVA2C蛋白,利用RT-qPCR和Western blotting分析2C蛋白对细胞因子表达及其关键信号通路的影响。【结果】RT-qPCR检测发现,SVA感染PK-15细胞导致IFNβ、TNF-α和IL-6表达的显著升高;同时,SVA感染导致TBK1和NF-κB的磷酸化。进一步的研究发现,SVA的2C蛋白能够激活TBK1和NF-κB磷酸化,并诱导IFNβ、TNF-α和IL-6的表达;2C蛋白能够激活抗DNA病毒感染关键蛋白干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)磷酸化,敲除STING抑...     

水能覆城,亦能载城?

历史上,千顷洼多次作为河流故道,黄河、漳河、滹沱河都曾经流经此地,因此水灾频繁。明永乐十三年（公元1417年）的大水还导致了衡水县城的搬迁。这是1963年水灾,衡水县城被淹的情景。[编者按]     

南洞庭湖杨树清理迹地恢复初期土壤种子库特征及其与土壤因子的关系

本文研究了杨树清理1、2年后迹地的土壤种子库结构、多样性及其与地上植被和土壤因子的关系,并以未清理杨树洲滩为对照,探讨洞庭湖杨树清理迹地土壤种子库在植被自然恢复中的潜力。结果表明: 研究样地土壤种子库萌发出的植物种子分属23科59属65种,各样地土壤种子库密度和物种数大小为:1年迹地(11810粒·m^-2,49种)＞2年迹地(9686粒·m^-2,44种)＞对照(6735粒·m^-2,29种)。与未清理洲滩相比,清理迹地土壤种子库与地上植被多年生中生和湿生植物物种多样性和相似性系数增加,土壤含水率和养分含量升高,pH值降低。土壤含水率和有机质与水蓼等湿生植物分布的关系密切,全钾和全磷对虉草等多年生植物分布的影响较大。在杨树清理迹地自然恢复过程中,随着土壤理化性质的变化,土壤种子库的物种数目和密度显著增加,以致地上植被物种多样性升高,因此,土壤种子库成为迹地湿地植被恢复的重要繁殖体来源。     

多囊卵巢综合征患者血清HSP70、IMA水平的变化及与性激素和氧化应激的相关性研究

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清热休克蛋白70(HSP70)、缺血修饰白蛋白(IMA)水平的变化及与性激素指标和氧化应激指标的相关性。方法:选择2017年6月~2018年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的未经治疗的初诊PCOS患者87例为PCOS组,另随机选择同期在本院进行体检的健康育龄妇女87例为对照组,比较两组血清HSP70、IMA、性激素指标、氧化应激指标,分析血清HSP70、IMA水平与性激素、氧化应激的相关性。结果:PCOS组患者血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、丙二醛(MDA)、HSP70、IMA水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PCOS组患者血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PCOS组血清雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者血清HSP70、IMA水平与血清FSH、LH、T、8-iso PGF2α、MDA水平呈正相关关系,与SOD、GSH-Px水平呈负相关关系(P<0.05),与E2、PRL水平无显著相关性(P>0.05)。结论:血清HSP70、IMA水平在PCOS患者呈现异常升高,其水平改变与性激素及氧化应激水平密切相关,提示HSP70、IMA可能参与了PCOS的病理过程,临床检测HSP70、IMA的水平变化有可能为PCOS诊疗提供有效的预测作用。     

外周血免疫细胞亚群及肿瘤标记物对胃大部切除术后患者预后预测的应用价值

目的:探讨外周血免疫细胞亚群及血清肿瘤标记物对胃大部切除术后患者的预后预测的应用价值。方法:应用电化学发光免疫分析法及流式细胞术分别检测25例胃大部切除术后患者的相关血清肿瘤标记物(AFP、CEA、CA19-9、CA12-5、CA72-4)及外周血免疫细胞亚群CD3、NK、CD4、CD8、CD4/CD8,结合长期随访,采用统计学方法分析不同指标之间的相关性及其对胃大部切除术后患者预后预测的应用价值。结果:胃大部切除术后患者外周血免疫细胞亚群及血清肿瘤指标均存在异常,Mann-Whitney检验分析显示外周血CD4 T细胞亚群和CEA呈显著负相关(r=-0.460,P=0.014)。Kaplan-Meier生存分析显示胃大部切除术后患者CD4(P=0.021)和CA72-4(P=0.012)水平和患者预后明显相关。多因素Logistic分析显示CD4(P=0.008)和CA72-4(P=0.010)是影响胃大部切除术后患者预后的独立危险因素。结论:胃大部切除术后患者免疫细胞亚群及血清肿瘤标记物短期内仍存在异常,高水平CD4和低水平CD72-4与患者预后良好显著相关。     

谈谈蛇的药用价值及临床利用

谈谈蛇的药用价值及临床利用江西杭州市中医院邓冲雨用蛇入药来防治疾病早在西汉《神农本草经》一书中就有记载,书中云“蛇蜕,味咸平,主小儿百二十种惊,癫疾,寒热,肠痔,毒……唐代的张在所著的《朝野佥事》中记有用蛇来治麻风病的事实。明代《本草纲目》更加详细地...     

感觉神经在骨修复中的作用及应用

神经骨学是近年的研究热点。其中,感觉神经在骨中分布广泛,且在骨修复中具有重要作用,感觉神经与骨的相关性研究引起诸多关注。大段骨缺损修复是骨修复中的一大难点。由于骨缺损中心区域无神经支配和血液供应,导致修复骨缺损的组织工程骨中心易坏死,严重限制大段组织工程骨的发展。近年研究发现,使用感觉神经构建的神经化组织工程骨可以有效修复大段骨缺损。该文就感觉神经在骨修复中的研究现状,以及神经化组织工程骨的最新进展进行综述,为神经骨相关研究提供新思路。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立

"超级细菌"耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×109~2×1010CFU/m L 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×109CFU,最适建模浓度为每只1.4×109CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。