阿片肽基因表达在转录水平的药物调节

本文综述了阿片肽药理研究中应用重组DNA 技术所取得的一些成果。现已发现多巴胺能药物、糖皮质激素、应激和吗啡等对阿片肽基因的表达具有调节作用,而且都发生在转录水平上。这种药物的调节作用究竟是促进阿片肽mRNA的生物合成还是抑制其降解,尚不明了;但却有助于对阿片肽转换率(turnover)变化的理解。     

青霉素酰化酶调节基因的定位和反式作用

青霉索酰化酶基因(pac)的定位研究表明它的调节基因和结构基因位于3．5kb的HindI—EcoR I片段。本文报道构建一系列质粒pPA 6的缺失衍生物,并测定这些缺失对pac表达的影响。结果表明调节基因位于pac结构基因内的spb I—Pvu I片段。SphⅠI—PvuⅡ片段克隆到质粒pTzl8u,所得质粒pPA57转化到青霉素酰化酶产生菌E．ColiD816,观察sphⅠ—PvuⅡ片段对染色体pac基因表达的影响。结果表明在sph Ⅰ—PvuⅡ片段内的调节基因反式调节pac基因表达。计算机分析表明在sph Ⅰ—PvuⅡ片段内有两个ORF是编码调节蛋白的可能候选者。Pac调节基因的精确定位正在进行中。     

Tat 蛋白的PTD区段促进GFP蛋白进入骨髓瘤细胞SP2/0

随着生物工程技术的迅速发展 ,多肽与蛋白质类药物的增长速度相当可观 ,可是这些药物常因受到各种因素的影响而疗效偏低 ,其中生物膜的屏障作用是主要因素之一。近年来发现一种来源于人类免疫缺陷病毒ＨＩＶ 1Ｔａｔ(Ｔｒａｎｓ ａｃｔｉｖａ ｔｏｒ)蛋白的蛋白功能区 ,称之为ＰＴＤ区段 (Ｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ ,ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ)的〔1 ,2〕,能够有效引导肽段或者蛋白质进入细胞 ,具有蛋白传送的功能〔3〕。 1988年Ｍａｕｒｉｃｅ和Ｐａｕｌ发现Ｔａｔ蛋白能够穿过细胞膜〔4〕 ;1994年Ｓｔｅｐｈｅｎ…     

利用ORF438启动子在链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白

利用ＯＲＦ４３８启动子在链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白崔风文杨胜利（中国科学院上海生物工程研究中心上海２００２３３）１９８８年,由原核的透明颤菌（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌａｓｐｐ．）克隆到血红蛋白基因（ｖｇｂ）［１］,其后Ｍａｇｎｏｌｏ等在天蓝链霉菌及变青...     

人B淋巴细胞刺激因子C端肽的免疫增强作用

用套式PCR从人胎脑cDNA文库中克隆了B淋巴细胞刺激因子C端肽 (C terminalpeptideofBlymphocytestimulator,C BLyS)的cDNA。在大肠杆菌BL2 1CodonPlus (DE3)RIL中以包含体形式表达了C BLyS。对包含体的复性条件进行了摸索 ,建立了C BLyS的透析复性与纯化方法。经复性和纯化的C BLyS可结合其受体B细胞成熟抗原 (Bcellmaturationantigen ,BCMA) 人IgG1Fc融合蛋白 ,刺激体外培养的小鼠脾脏细胞增殖 ,并且可明显增强小鼠对溶菌酶的免疫应答水平。     

蜗牛酶中一种人参皂苷Rb1水解酶的分离纯化

通过DEAE-Sepharose离子交换分段层析,DEAE-Sepharose离子交换梯度层析和SephadexG-100凝胶过滤层析三种方法的联用从中华白玉蜗牛消化酶中分离出一种人参皂苷Rb1水解酶。分离后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质务带。应用SDS-PAGE和凝胶过滤层析对分子量的测定,提示该酶是由4个分子量为110～115kD的相同亚基组成的同源四聚体。Rb1为底物的动力学参数Km和Vmax分别为0．790mmol／L和10．192μmol／min／mg。该酶对人参皂苷Rb1糖键进行有选择的水解,可水解人参皂苷Rb1C50位的一个糖苷键生成人参皂苷Rd。     

蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析

选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血清进行 Western blotting.结果显示 ,大多数神经毒素类似物之间没有免疫交叉反应 ,表明这些神经毒素类似物的抗原性差别较大 ,可能存在不同的分类和进化     

细胞生长速率对青霉素酰化酶基因表达的影响

本文报道在细胞生长的不同时期,加苯乙酸诱导pac基因表达,发现在细胞生长早期(0—24h),苯乙酸诱导pac基因表达的效应非常明显,诱导效率很高;随着时间的推延,苯乙酸诱导pac基因表达的作用逐渐减弱,在细胞生长中期(24～48h),诱导效率明显减弱;在细胞生长后期即静止期(48－72h),苯乙酸几乎诱导不出pac基因的表达。RNA—DNA点杂交检测各期细胞内青霉素酰化酶mRNA的量,也发现在生长早期诱导的细胞转录产生的Fac—mRNA量很高,在生长中、后期诱导的细胞转录产生的pac—mRNA量明显减少,mRNA水平和蛋白质水平变化趋势一致。上述结果表明,苯乙酸诱导青霉素酰化酶基因表达依赖于细胞生长速率,处于生长周期不同时期的细胞,诱导产生青霉索酰化酶的能力不同,细胞生长速率对Pac基因表达的影响发生在转录水平,pac基因表达与细胞生长相偶联,提示存在一个或多个与细胞生长相偶联的因子调节着pac基因的表达。     

利用 ORF438 启动子在链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白

链霉菌中表达了透明颤菌血红蛋白（VHb）,表明VHb对放线紫素的产生和菌体的生长有促进作用^[2].pIJ702质粒上带有与次生代谢有关的酪氨酸酶基因（mel）^[3],mel由ORF438启动子（P_ORF438）带动转录^[4].本文尝试利用P_ORF4328表达vgb.     

par区域的克隆及其对质粒pUC9稳定性的影响

将pSC1o1上的par区域克隆到载体pUC9上,得重组质粒pEC302。将puC9和Hpkc302分别转入E．Coli HB 101,在无机培养基M₉中试验两者的稳定性,结果发现E．Coli IBIoi(：puc9>传代培养40代后质粒几乎全部丢失,而E．Coli HBIOI(pEC302)的质粒全部存在。并且发现质粒的稳定性与宿主菌的recA基因有关。