猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测

呼吸道疾病是猪场最常见的疾病之一,严重影响猪群的健康,已经给世界养猪业造成了巨大的经济损失[1,2].呼吸道疾病的病原复杂多变,不同的猪场病因可能完全不同,从而给疾病的诊断与防治带来了很大的困难.多年的研究表明,呼吸道疾病的病因可能包括猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪流感病毒、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MH)、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)及猪链球菌或沙门氏菌等[3～8].其中PRRSV与PCV2为近几年新发现的猪重要的传染性病原,且呈不断的蔓延趋势,在呼吸道疾病发生过程中所起的作用日益增强[9,10].     

鸡传染性支气管炎病毒两个地方分离株S1基因的扩增克隆与序列分析

对IBV肾型毒株JS/95/03和呼吸型毒株SD/97/01的S1全基因进行了扩增、克隆和序列测定,将两毒株的S1基因序列与10个参考毒株进行了比较.结果表明,JS/95/03和SD/97/01分别与M41和H120株亲缘关系最近,它们可能是疫苗毒株的变异株.JS/95/03和SD/97/01间的亲缘关系也较近,两者S1蛋白中只有24个氨基酸的差异,其中有15个位于前130个氨基酸中,第116位氨基酸可能与毒株的致病性有关.对两毒株S1蛋白的二级结构进行了预测和比较,结果发现,一个或极少数氨基酸的差异即可导致S1蛋白二级结构和抗原性的改变.     

冠状病毒的基因重组

冠状病毒的基因组约有高达25％的重组频率。已经证明在病毒基因组之间以及缺损性干扰（DI）RNA与病毒RNA之间可以发生重组,这为病毒RNA及DI RNA提供了一种进化的工具,并可用来解释冠状病毒基因组的多样性,冠状病毒能进行重组的特性可能与其mRNA的转录机制有关,其RNA的合成是不连续的,产生了病毒聚合酶的非持续性,重组还被用作病毒基因组RNA突变的一种工具。     

整合猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组鼠白血病病毒特性

通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒完整的GP5基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果与已经登陆GenBank 的EF488048高致病性江西株比对分析表明碱基同源性达98.7%。构建含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5, 通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染人胚肾细胞293T, 48 h后收集假病毒上清, 超离后通过Western-blot证明GP5蛋白在假型病毒颗粒表面存在, 表明GP5蛋白被整合到此假型病毒粒子表面。通过感染293T、Mark-145不同的靶细胞,证实所构建的假型病毒粒子具有感染性。成功构建了具有感染性的MuLV-GP5假病毒体系, 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法。     

传染性法氏囊病病毒VP3结构蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）是危害养鸡业的重要病原之一,属双股双节段ＲＮＡ病毒科成员,由Ａ和Ｂ两个片段的ｄｓＲＮＡ构成,大小分别约３３００－３４００ｂｐ和２８００－２９００ｂｐ。基因片段Ａ首先编码ＶＰ２－ＶＰ４－ＶＰ３聚合蛋白,然后再断裂成ＶＰ３、...     

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原域间接ELISA方法的建立及初步应用

将已获得的含猪细小病毒VP2蛋白主要抗原域编码基因VP2I重组酵母菌株在优化的条件下进行诱导表达,表达产物蛋白含量达227.6μg/mL,在此基础上以重组蛋白作为包被抗原初步建立了检测猪细小病毒抗体水平的间接ELISA方法,并对该方法进行了优化,结果表明抗原最佳包被浓度5.69μg/mL,而血清最佳稀释倍数为1:80。阳性标准初步定为：OD待测样品＞0.5,且OD待测样品/OD阴性血清＞2.0。采用iVP2I-ELISA对猪血清样品进行检测,结果显示iVP2I-ELISA与HI试验的符合率为97.2%,与国外同类试剂盒的符合率达到91.2%。     

猪瘟病毒E2蛋白B/C抗原区基因在毕赤酵母中的表达与鉴定

基于猪瘟病毒主要保护性抗原---E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位---B/C抗原区和A/D抗原区 ,设计引物扩增编码猪瘟病毒E2蛋白B/C抗原区的基因 ,将大小为261bp的PCR产物插入含有强启动子P_AOX1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC中 ,构建成重组质粒pPICZα-BC ,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母菌X₃₃ 中 ,经Zeocin^TM 筛选得到 3株高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达 ,SDS-PAGE和Westernblot及ELISA试验表明 ,酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白。为研究亚单位疫苗或诊断抗原打下坚实基础。     

检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白一乳胶凝集试验的建立

猪繁殖与呼吸综合征(Poreine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)于1987年首先在美国被发现,现在已经成为危害世界养猪业发展的重要传染病之一.我国已在许多地区分离到该病的病原体-猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome viruS,PRRSV),从而证实了该病在我国的流行[1～4].这些年来,本病的临诊表现及流行病学也出现了新的变化,如隐性感染及慢性感染病例显著上升,持续性感染在猪群中较为普遍.由于本病同其它引起猪繁殖障碍的疾病(如猪细小病毒病、伪狂犬病等)表现出极为相似的临床症状,并伴随混合感染和继发感染[5]增加了临床诊断的难度.所以,探索一种简便易行具有推广意义的检测方法成为本研究的方向.     

鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡γ干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组.通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间.把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱性口炎病毒进行攻毒,测出鸡重组γ干扰素的活性单位为1.0×106U/mL,获得了满意结果.