耐热对硝基苯磷酸酶的酶学性质

通过分离纯化和酶学性质测定 ,确定耐热对硝基苯磷酸酶 (p nitrophenylphosphatase)是金属酶蛋白 ,活性部位含有镁离子 ;该酶是中度耐热蛋白质 ,金属离子有助于提高其热稳定性 .该酶的Km 为 3 0 31mmol L ,Vmax为 313 5 μmol·min-1·mg-1;二级结构中大约有 74 5 %α螺旋 ,2 5 5 % β转角 .在pH 7 0～ 12 0范围内相当稳定 .该酶在SDS溶液中稳定性较差 ,在TritonX 10 0溶液中较为稳定 ,在Tween 2 0溶液中很稳定 .     

神经肌肉性疾病患者线粒体DNA突变的分析

为了探讨神经肌肉性疾病的发病与线粒体ＤＮＡ突变的关系,采用ＰＣＲ技术检测了２０例患有不同神经肌肉性疾病儿童的外周血和骨骼肌细胞中的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）,发现其中６例患儿有ｍｔＤＮＡ缺失,其中１例至少有２９６８ｂｐ片段的缺失,另５例至少有２０００ｂｐ片段的缺失,此缺失区位于线粒体呼吸链复合物１、４、５、编码区,表明该突变对神经肌肉性疾病的发生有一定作用。     

比较气单胞菌在2种鉴定培养基上的特异性反应

气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｓｐ .)是人、动物的致病菌〔1,2〕。对气单胞菌进行准确、快速鉴定 ,对该菌早期诊断有重要意义。国内外对该菌的初步鉴定都采用肠杆菌科细菌指定的三糖铁琼脂 (ＴＳＩ) ,该培养基对弧菌科中气单胞菌的特异性鉴别作用低 ,影响气单胞菌的检出率 ,我们参考有关文献〔3〕研制出气单胞菌初筛鉴定琼脂 (ＡＰＡ) ,并用气单胞菌与相关菌对 2种培养基作了特异性鉴别作用的比较 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　菌株 :气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｓｐ .) 1 6 0株 ,肠杆菌 (Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｓ…     

弧菌抑制剂“0/129纸片”的制备和应用

0/129是一种弧菌抑制剂,2,4-二氨基-6,7-二异丙基喋啶(2,4-diamino-6,7-diisopropylpteridine)。检查菌株对0/129的敏感性是鉴定弧菌科各菌属成员不可缺少的重要特征之一。我国以往使用国外的纸片,有些单位在     

ONPG圆片的制备和应用

用国产材料及试剂,自制β－半乳糖甙酶试验用ＯＮＰＧ圆片。经过菌种试验和临床实验室应用证明,使用此种圆片与常规试管法和国外的同类圆片进行对比试验,所得结果完全一致。此种圆片使用方便,易于保存,可以长期使用,且节约试剂,达到国外同类制品的质量,有助于保证和提高细菌鉴定工作质量。     

明胶碳料的研制及其在明胶液化试验中的应用

自行研制明胶碳粒用于细菌鉴定中的明胶液化试验。将明胶碳粒加入基质中经３７℃ １６￣２０ｈ培养后,如细菌具有明胶酶,其质即变黑色,反之明胶碳粒在基质中沉淀,基质不变色,经接种标准菌株和临床常见菌２０３株,试验结果表明,该明胶碳粒使用简便,容易判定,特异性强,灵敏度高,质量稳定,可以代替国外同类产品。有助于提高细菌鉴定工作效率和质量,降低检测成本,具有很好的应用价值。     

90株链球菌血清学及生化特征分群鉴定的研究

本文报告90株链球菌血清学和生化特征分群鉴定结果。研究结果表明,90株链球菌用血清学分群,属A群的63株,B群3株,C群12株,D群10株,G群2株。采用生化鉴定,对链球菌属的确认有参考价值。对分群鉴定无鉴别意义。我国过去沿用的非血清学推测性分群法,只适用于B、D群和绝大部分A群菌的鉴定,对C群和G群菌无鉴别意义。因此,在链球菌分群鉴定时,要采用血清学方法,对非血清学推测性分群需进一步完善,以提高其鉴定的准确性。     

与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定

【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDVM蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础。【方法】将MOI=0.1的PEDV DR13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36 h后,收集细胞并进行裂解。利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析。【结果】基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP(Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证实CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用。【结论】鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据。     

冠状病毒感染调控细胞凋亡机制研究进展

冠状病毒是常见的感染人类和动物并造成健康危害的主要病原性微生物之一,冠状病毒感染细胞后,细胞产生免疫应答,病毒为了在细胞内转录翻译和装配下一代,应对细胞免疫应答的同时,还参与到许多细胞活动中,当细胞特定受体与病毒蛋白结合后,细胞即启动凋亡程序。冠状病毒的许多蛋白在细胞凋亡程序中起促进或抑制凋亡的不同作用,如病毒S蛋白与细胞膜死亡受体作用诱导细胞启动外在凋亡途径,病毒感染细胞后产生的M、S蛋白引起细胞内质网应激、Ca2+失衡,诱导细胞启动内在凋亡途径,而E蛋白则抑制细胞凋亡的发生。本文综述了冠状病毒对侵染细胞的促凋亡或抑制凋亡作用及其作用机制,通过了解病毒不同蛋白在各种凋亡途径中的不同作用,希望为人工干预调控细胞研究提供思路,为冠状病毒感染防控提供理论支持。