IFN-λ1在HEK293T细胞中表达纯化及活性检测

[目的]构建IFN-λ1真核表达质粒,利用人胚胎肾HEK293T细胞表达系统,获得具有良好生物学活性的IFN-λ1重组蛋白。[方法]将IFN-λ1目的基因克隆到pcDNA3.1+载体NheⅠ与XhoⅠ多克隆位点构建pcDNA3.1-IFN-λ1分泌表达质粒,并将其转染到HEK293T细胞中;采用Ni-NTA亲和层析方法分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE和蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测IFN-λ1的表达与纯度;采用qPCR、WB结合显微镜观察检测IFN-λ1的生物学活性。[结果]IFN-λ1真核表达质粒构建正确,而且能够在HEK293T细胞中分泌表达重组蛋白,分离纯化的IFN-λ1能够有效地诱导ISG15、ISG54、ISG56、OAS1、TNFα、MX1和TRAIL等凋亡相关基因的表达,激活p38促凋亡信号通路,抑制水泡性口炎病毒对BHK-21细胞的感染。[结论]成功构建了pcDNA3.1-IFN-λ1真核表达质粒,能够在HEK293T细胞中分泌表达IFN-λ1重组蛋白;分离纯化的IFN-λ1重组蛋白具有潜在的抗肿瘤和抗病毒生物学活性,为进一步研究IFN-λ1的功能和临床应用奠定了基础。     

Box-Behnken优化痹痛宁凝胶膏剂基质处方研究

利用Box-Behnken设计,以初黏力为评价指标,对凝胶膏剂处方进行优选。优选出痹痛宁凝胶膏剂基质的最佳处方为聚丙烯酸钠∶高岭土∶甘氨酸铝∶柠檬酸=1.1∶1.3∶0.09∶0.14,最佳处方的初黏力平均值为3.30cm,与预测值的平均相对误差为2.30%。表明Box-Behnken设计适用于痹痛宁凝胶膏剂基质处方的优化,优化出的最佳处方具有较好的初黏力,为痹痛宁凝胶膏剂的开发奠定了基础。     

牛SNP芯片分型检出率和分型错误率对基因型填充准确率的影响

SNP芯片已被广泛应用于动植物的遗传研究和生产实践,其基因分型的准确性至关重要。但在实际应用中,常有一定数量的基因型因缺失而需要去估计(填充)。此外,由于各种原因,又常常需要在不同芯片的基因型之间相互填充彼此没有的SNP基因型,或从低密度SNP填充到高密度SNP基因型。因此,基因型填充准确率直接影响后续数据分析的准确性和可靠性。为深入了解基因型填充准确率的影响因素,本研究利用20 116头美国荷斯坦牛的50K SNP芯片基因分型数据,在SNP分型检出率与错误率存在相关和没有相关两种情形下,分别评估了上述两个因素对下游基因型填充准确率的影响。当两者不相关时,模拟的SNP分型检出率从100%降低到50%,SNP分型错误率由0%提升到50%。当两者存在相关时,基因分型的检出率和错误率之间的关系是基于一个实际数据中这两个变量之间的线性回归方程来确定,即模拟的SNP分型检出率从100%降低到50%,SNP分型错误率从0%升高到13.35%。最后,采用5折交叉验证的方法评估基因型填充的准确率。结果表明,当原始数据的SNP分型检出率与错误率彼此独立发生时,基因型填充的错误率受原始SNP分型检出率影响不大(P0.05),却随着原始SNP分型错误率的升高而显著提高(P0.01)。当原始数据的SNP分型检出率与错误率存在负相关时,基因型填充的错误率随着原始SNP分型检出率的降低而显著提高(P0.01)。在这两种情形下,建议SNP分型检出率应在90%以上,基因型填充准确率才能不低于98%。该结果可为提升实际的SNP分型和下游数据分析的质控提供参考依据。     

老年上消化道出血发病因素及与HP感染相关性分析

目的:研究老年上消化道出血发病因素及与HP感染的相关性。方法:选取我院以消化性溃疡为诊断而收入院患者300例,进行钡餐及胃镜检查,其中合并出血者125例,未合并出血者175例,对照组选用相同时期出现消化道疾病且经胃镜检查排除消化性溃疡者310例。检测所有患者HP感染的情况和服用非甾体类抗炎(NSAIDs)药物的情况,根据是否服药及服用时间的长短分为ABCD组。测定消化性溃疡组与对照组中暴露人数与非暴露人数的比值比即OR值,并进行统计学分析。结果:1发生消化性溃疡的OR值,HP合并NSAIDs组为20.31,明显高于HP组和NSAIDs组,且大于两者之和,差异有统计学意义(P0.05);2消化性溃疡合并出血与服用NSAIDs药物时间的关系显示,B组的OR值为3.79,C组的OR值为7.88,D组的OR值为10.41,B组C组D组,差异有统计学意义(P0.05);3发生消化性溃疡合并出血的OR值,HP合并NSAIDs组为13.31,明显高于HP组的1.12和NSAIDs组的1.54,且大于两者之和,差异有统计学意义(P0.05)。结论:老年上消化道出血的发病主要与消化性溃疡有关,HP感染与服用NSAIDs药物在发病过程中具有协同作用。     

生物钾肥的研制及田间应用

原苏联农业学博士в г亚历山大罗夫( 1 95 6 )研究发现硅酸盐细菌能分解土壤最主要组成成分硅铝酸盐 ,释放出钾和其它灰份元素 ,将土壤中磷灰土和磷灰石的磷转变为可给态磷 ,而且能固定空气中的氮素[1] 。 80年代以来 ,我国科技工作者对硅酸盐细菌的特性及其制剂也进行了大量研究、田间示范。本室以我省高寒地区土样中分离到 1株代号为ＨＬ89- 0 4的硅酸盐细菌及保藏的胶质芽孢杆菌硅酸盐亚种为研究对象 ,进行了生物钾肥的研制与田间试验。1　材料和方法1 1　菌种 :ＨＬ89- 0 4分离自土壤 ,经鉴定属胶质芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｕｃｉ…     

MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化

MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用.通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-H1N200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化.DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BI21(DE3);由于PYD(88aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量度聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础.     

汶川大地震对生态系统的影响

汶川大地震的主要影响区位于四川盆地西缘,是四川盆地向青藏高原的过渡地带,地质构造复杂,山高谷深坡陡,是我国生态环境十分脆弱的地区,同时该地区还是具有重要生态服务功能,是长江上游生态安全的重要屏障。汶川大地震不仅造成巨大人员伤亡和财产损失,也对生态系统造成了严重破坏,对区域生态安全带来巨大威胁。研究运用遥感数据和实地调查,评估了地震对生态系统的影响,研究结果表明：（1）汶川大地震造成严重的生态破坏,导致生态系统丧失面积为122136hm^2,并形成了包括汶川县、彭州市、绵竹市等10县市的地震生态破坏重灾区。（2）地震导致65,584hm^2大熊猫生境丧失,损失比例5．92％。（3）94．64％的受损生态系统分布在地震烈度Ⅸ以上区域,53．82％的受损生态系统分布在海拔2000m以下的区域,66．09％的受损生态系统分布在坡度30～50°之间。地震导致的生态破坏将影响区域生态安全,在恢复重建中要加强生态保护和生态系统的恢复重建。     

连作对附子根际土壤微生物群落结构的影响

目的对不同连作年限附子根际土壤微生物群落及其与土壤化学性质的变化规律进行探讨,以期为附子连作障碍的克服提供理论指导。方法对未种植附子(Y0)和种植1年(Y1)、2年附子(Y2)的土壤采样,应用Illumina MiSeq高通量测序技术和常规分析方法,分析土壤微生物群落和土壤化学性质变化规律。结果获得细菌和真菌总有效序列分别为110 218和32 819条,在属分类水平上,相较于Y0,Y2部分菌的相对丰度明显增加,如产酸细菌酸杆菌属(Acidobacteriaceae)增加396%,黄单胞菌属(Xanthomonas)增加250%,镰刀菌属(Fusarium)增加17.63%,木霉菌属(Trichoderma)增加7940%,而有益细菌假诺卡菌属(Pseudonocardia)仅为Y0的3.02%,硫杆菌属(Thiobacillus)消失。随着连作年限的增加,土壤中硝态氮、氨态氮、磷酸盐、S和K含量呈现为Y2Y1Y0,土壤pH值为Y0Y1Y2,Y2的附子产量仅为Y0的64.44%,部分土壤化学性质与附子根际土壤微生物种类显著相关。结论连作会使附子根际土壤微生物群落和土壤化学性质发生改变,根际土壤有益菌减少,致病菌增加可能是导致附子发病率增加,产量减少的原因。     

公平规范与自然资源保护——在卧龙自然保护区的实验

以家庭承包管护模式实施的天然林保护在卧龙自然保护区取得了非常显著的积极效果.这一成功无法用理性的经济行为动机来解释,而公平性社会规范在这一过程中可能扮演着重要角色.为验证这一理论推断,在当地组织了一次性的最后通牒博弈实验,藉此了解公平性社会规范对当地人行为决策的实际影响情况.高度一致而显著偏离理性预期的实验结果表明当地人作为一个文化整体对于社会规范的普遍认同,其中96.9%的出价者在实验中给出了公平或超公平出价,表现出对公平的强烈偏好;而回应者较低的最低接受出价(17%±2.6%)又表明他们不愿对不公平出价者采取激烈的惩罚手段.当地人对家庭间合作的依赖和对公平声誉的看重可以解释这一对看似矛盾的实验结果,也证明基于声望的合作进化在小规模社会是现实可行的,而惩罚并非维持公平规范的必要因素.这一结果揭示了卧龙的天然林保护取得成功的关键因素,同时证明了利用公平性社会规范实现社区对自然资源保护工作的积极合作参与的可行性,从而支持了理论假说.这一实践经验对于经费不足的自然资源保护项目来说具有重要借鉴意义.     

稀有保护植物猬实简介

猬实 Kolkwitzia amabilis Graebn ,是德国植物学家 Richard Kolkwitz1 90 1年发现并命名的 ,为中国特有的忍冬科单种属植物 .染色体数 2 n=2 x=32 .落叶灌木 ,高 2～ 3m;树皮薄片状剥落 .单叶对生 ,卵形至卵状椭圆形 .聚伞花序生于叶腋 ,有时简化为成对生长 ,花冠钟状 ,粉红色 ,花萼五裂 ,在开花后期变为红紫色 ,雄蕊 4枚 ,子房三心皮三室 ,通常一室发育 ,形成 1～ 2枚不完全发育的种子 ,子房外被白色硬毛 ,花期 5月 .果为两个合生 ,有时一个不发育 ,子房的白色硬毛在果期发育为褐色刚毛 ,果实类型为瘦果状核果 ,果期8～ 9月 .分布于山…