新型生长抑素原核表达质粒的构建及表达鉴定

将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中, 转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500, 经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆, 命名为pYA-SS。应用SDS-PAGE和Western blotting 技术分离并检测融合蛋白在宿主菌中的表达活性。结果表明, 本试验构建的非抗性筛选生长抑素原核表达质粒可以在宿主菌C500中稳定、正确表达。此研究为开发新型、高效、安全的促生长疫苗提供了可靠的研究材料。     

vWF-ΔPro改善基于蛋白质剪接的双载体BDD-FVIII基因转移

多聚体von Willebrand因子(vWF)的功能之一是保护凝血Ⅷ因子(FⅧ)免受蛋白水解引起的快速清除．前肽缺失突变体vWF (vWF-ΔPro)不能形成多聚体,但可以结合FⅧ蛋白．为探讨vWF-ΔPro对基于蛋白质反式剪接作用介导的双载体转FⅧ基因后连接的FⅧ蛋白的分泌和活性的影响,将vWF-ΔPro基因和融合Ssp DnaB内含肽的B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)断裂基因共转染293细胞进行转基因的瞬时表达,用Western印迹检测了单独转染vWF-ΔPro基因细胞的vWF-ΔPro表达量和蛋白形式,并检测了其对FⅧ的结合力;用ELISA法观察分泌至培养上清中的剪接的BDD-FⅧ,并用Coatest法检测由其产生的生物活性．结果显示,vWF-ΔPro转基因细胞呈现二聚体蛋白表达形式,其结合FⅧ的能力与转野生型vWF基因细胞相近;vWF-ΔPro共转染细胞上清中剪接BDD-FⅧ蛋白浓度为198±21 ng/mL,活性为1.78±0.18 IU/mL,明显高于未转染vWF-ΔPro基因的细胞对照(91±12 ng/mL和1.05±0.13 IU/mL),与共转染野生型vWF基因细胞对照相近(221±19 ng/mL和1.95±0.22 IU/mL),表明vWF-ΔPro可显著改善内含肽剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性．为vWF-ΔPro转基因的基于蛋白质剪接技术双AAV载体转BDD-FⅧ基因动物体内实验提供了依据．     

磁性复合微球固定化酶制备过程及其研究进展

磁性复合微球作为一种优良的载体,广泛应用于生物医学和技术上,如蛋白纯化、药物绑定、酶固定化等.磁性复合微球制备过程包括纳米磁性粒子合成、磁性复合微球制备,将酶与经表面戎基、氛基、环氧基等功能基团修饰或直接与磁性微球共价结合,或者与表面经金属离子鳌合的磁性微球吸附从而实现酶固定化.本文介绍了磁性复合微球的制备过程及其在固定化酶方面的研究进展.     

氧化HDL_2在大鼠肝窦状隙细胞内代谢

大鼠肝窦状隙细胞培养结果显示：氧化高密度脂蛋白２（ｏｘ－ＨＤＬ２）对异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）荧光标记ｏｘ－ＨＤＬ２的细胞结合有竞争抑制作用,而ＨＤＬ２则无。细胞内吞ＦＩＴＣ－ｏｘ－ＨＤＬ２的荧光强度（ＦＳ）和［３Ｈ］ＣＥ－ｏｘ－ＨＤＬ２（ｒ－ｏｘ－ＨＤＬ２）的放射强度分别是内吞ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２的４５．５％和ｒＨＤＬ２的６１．４％。内吞ＦＳ主要存在于三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀部分,而放射强度主要存在于ＴＣＡ上清液部分。细胞释放的ＦＳ和放射活性分别是内吞量的６７．７％和１０．９％,且主要存在于ＴＣＡ可沉淀部分。结果提示：（１）大鼠肝窦状隙细胞可能存在着ｏｘ－ＨＤＬ受体,该受体不同于ＨＤＬ受体。（２）ｏｘ－ＨＤＬ２在细胞内代谢方式与ＨＤＬ２相似,均没有经历溶酶体分解途径。在细胞内载脂蛋白与胆固醇酯（ＣＥ）组分经历一个解离过程。细胞截留大部分ＣＥ后,将载脂蛋白（Ａｐｏ）与剩余ＣＥ重组成脂蛋白并以逆向胞饮方式释放到胞外。（３）氧化修饰减弱ＨＤＬ２逆向转运胆固醇能力     

γ-生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4生长的抑制作用及机制

目的:研究γ-生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4生长的抑制作用及可能的分子机制。方法:采用CCK-8、细胞周期实验检测细胞增殖、利用激光共聚焦显微镜、Annexin V/PI染色、Caspase活性检测、Western Blot等方法测定细胞凋亡。采用1μmol/L ATO及不同浓度(0、15、30、45μmol/L)的γ-生育三烯酚处理NB4细胞24、48和72小时,通过CCK-8检测细胞的增殖情况,流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测细胞周期和凋亡情况,检测Caspase3,8,9的活性,Western Blot检测细胞中c-caspase-3、Bcl-2和survivin的蛋白表达。结果:γ-生育三烯酚联合亚砷酸显著抑制NB4细胞增殖(P0.01),且随着作用时间延长和γ-生育三烯酚浓度的增加,其增殖抑制作用增强;细胞周期阻滞在S期,S期的比例由38.21%±2.99上升到50.31%±5.03;γ-生育三烯酚联合亚砷酸诱导NB4细胞凋亡,1μmol/L ATO联合15、30μmol/L的γ-生育三烯酚处理48h后,细胞活率分别为82.27%±3.16、66.97%±3.17、12.63%±2.66;1μmol/L ATO联合30μmol/L的γ-生育三烯酚处理后,NB4细胞caspase-3,-8,-9的活性均较ATO单独用药组显著增高,c-caspase-3表达增高而Bcl-2和survivin蛋白的表达无明显变化。结论:生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4的生长具有抑制作用,此作用可能与抑制增殖并诱导凋亡相关,其作用靶点可能与促进Cas-pase诱导的凋亡有关。     

广州地区207株乙型溶血性链球菌血清学分群及对药物敏感性试验

乙型溶血性链球菌能引起急性咽炎、扁桃腺炎、猩红热和化脓性疾病等。也是继发风湿热和肾炎的主要病因。为了给链球菌所致疾病的防治工作提供科学依据,我们对广州地区207株乙型溶血性链球菌进行了血清学分群和药物敏感试验,现将试验结果报道如下:     

林龄对毛白杨功能性状和林下土壤理化性质的影响及其耦合关系

为了揭示毛白杨(Populus tomentosa)人工林对环境的适应策略,并为更好地营林提供科学依据,以鲁西黄泛平原区域内10、20、35年生毛白杨人工林为研究对象,测定枝条及叶片功能性状共10个指标,分析毛白杨功能性状随林龄的变化规律,阐明影响功能性状变化的主要指标,辨析功能性状与环境因子之间的关系。结果表明(：1)在不同林龄下,枝条密度变异系数最小,为10.431,叶氮磷比变异系数为94.243,表明叶氮磷比受林龄的影响较大,枝条密度则较为稳定。3个林龄的叶片氮磷比显著低于14,表明毛白杨生长主要受氮限制。(2)随着林龄的增加,土壤环境得到改善,土壤全氮与土壤速效钾都呈增长趋势,土壤容重呈减小趋势,这些变化都有利于毛白杨更好地生长。(3)在各环境因子中,林分密度、土壤速效钾、土壤容重和土壤含水量是显著影响毛白杨人工林生长的环境因子。研究证明,在不同林龄下,毛白杨的功能性状在兼顾生长与环境的变化中表现出较强的适应性,该区域毛白杨生长主要受氮限制,可以适当施以氮肥以利于其生长。     

miRNA-105在胃癌组织中的表达情况

目的:分析胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中miRNA的差异表达情况。方法:收集胃癌组织和其相应癌旁正常胃黏膜组织共33对,经抽提、纯化RNA后,反转录合成荧光分子Hy3的cDNA探针,将其与miRCURYTMLNA Array(v.16.0)(Exiqon公司)芯片进行杂交,应用Axon GenePix 4000B芯片扫描仪来扫描miRNA芯片的荧光强度,GenePix Pro 6.0软件(Axon)把图像转化为数字信号,以差异大于2倍的为标准来确定胃癌黏膜组织中差异表达的miRNA。再用实时荧光定量PCR方法验证芯片结果中表达异常增高的miR-105在33例胃癌组织中的表达情况。结果:miRNA表达谱芯片结果显示:胃癌组织共中有51种miRNA表达异常,其中miR-105、miR-548n、miR-214*、miR-4309等31种miRNA表达上调,miR-31、miR-1275、miR-26b*、miR-744等20种miRNA表达下调;实时荧光定量PCR证实与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中miR-105表达显著上调(P0.01)。结论:miR-105在胃癌组织的表达明显高于正常胃黏膜组织,可能与胃癌的发生、发展相关。我们的研究为胃癌的发病机制和诊断治疗提供了一个新的研究方向。