犬冠状病毒大熊猫株核蛋白基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的高效表达

首次对犬冠状病毒大熊猫株(CCVGP)核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。本实验根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N蛋白基因序列,设计了一对特异性引物,对分离的CCVGP野毒株进行了RT—PCR扩增。将扩增的PCR产物纯化回收后与pGEM—T连接得到重组质粒pTN,进行核苷酸序列测定。结果该基因全长1146bp,编码382个氨基酸;与CCV标准毒株Insavc—1N基因相比,核苷酸的同源性为92．6％,推导的氨基酸的同源性为93．2％。在推导的N蛋白N端156—179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒N蛋白相应区域相同,推测可能是RNA结合区。预测的GP株N蛋白疏水性和抗原表位与Insavc—1株N蛋白存在细微的差异。将pTN双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET8a中构建了重组质粒pETN,转化大肠杆茵BL21,用IFTG进行了诱导表达。结果重组菌菌体裂解物经SDS—PAGE电泳可检测到相对分子量为48KD的重组蛋白,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与CCV多克隆抗体发生特异性反应。经凝胶薄层扫描分析,重组N蛋白表达量可占菌体蛋白的49．3％,表达的蛋白纯化后可用于建立检测大熊猫CCV抗体间接ELISA用的包被抗原。     

H5N1禽流感病毒对C57BL／6小鼠的致病性研究

本试验利用虎源H5N1禽流感病毒对6～8周龄雌性C57BL/6小鼠进行滴鼻感染,观测小鼠临床症状和组织病理变化,于感染后第3d和第5d每组分别处死3只小鼠,测定肺、脑、脾、肾、肝组织中的病毒含量;并测定该病毒对C57BL/6小鼠的MLD50。结果表明感染小鼠出现精神不振、体重下降、支气管炎和间质性肺炎为主的临床症状和病理变化;测得感染后小鼠肺脏中病毒拷贝数和病毒滴度最高,其次是脑、肾、脾、肝等组织;该病毒对C57BL/6小鼠的MLD50为10-6.5/0.05mL。此研究成功进行了H5N1禽流感病毒对C57BL/6小鼠的感染,可以作为感染模型进行H5N1禽流感病毒的发病机制、疫苗评价、药物筛选等研究。     

猫杯状病毒反向遗传学操作系统的建立及其应用的研究进展

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是引起猫呼吸道疾病的一种常见病原,自1995年以来,国内外相继建立了FCV反向遗传学操作系统并且FCV反向遗传学在病毒基因组结构与功能、表达外源蛋白、与宿主相互作用、致病机理等研究方面的应用已经取得了一些进展,本文通过收集FCV反向遗传学相关的研究文献,对FCV反向遗传学操作系统的建立及其应用研究进展进行综述,以期为相关领域的研究提供有益的参考与借鉴。     

虎源猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定

利用细胞培养方法从中国某虎园送检的腹泻虎肠内容物中分离出1 株细小病毒(TPV/ HT - 69),经系统的形态学、理化学、血清学试验、人工感染试验、PCR 扩增和VP2 基因序列分析,符合猫泛白细胞减少症病毒特征,证明该毒株为猫泛白细胞减少症病毒强毒。     

宠物犬和猫流感病毒感染

近十年来犬和猫流感病毒感染报道迅速增多,不仅威胁到犬和猫的健康,也对公共卫生造成了影响。自2004年首次发生H3N8亚型流感病毒感染赛犬事件以来,犬流感一直在美国的赛犬和宠物犬中流行。在韩国和我国南方的犬群中出现了因H3N2亚型禽流感感染引起的肺炎病例。亚洲和欧洲均报道了猫H5N1亚型高致病性禽流感致死性感染病例,还通过实验研究发现H5N1亚型流感病毒可在猫与猫之间水平传播。这些现象预示着流感病毒进一步获得了感染哺乳动物的能力,其公共卫生意义需引起关注。为此,本文对犬和猫流感病毒感染的流行病学、临床症状、发病机制、诊断和防控措施进行了综述。     

狂犬病人源二硫键稳定单链抗体融合蛋白的构建及活性检测

【目的】构建、表达人源二硫键稳定单链抗体(scdsFv),检测其生物活性,以获得对狂犬病病毒有特异结合能力及中和活性的scdsFv蛋白。【方法】从GenBank上获得RV单抗SO57重链可变区VH和轻链可变区VL序列,在VH44和VL100位各突变一个氨基酸为半胱氨酸,用linker连接形成scdsFv,人工合成此序列,克隆入表达载体pET22b(+),在大肠杆菌中表达目的蛋白,镍柱亲和层析法纯化,并进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定。ELISA法和鼠脑组织抹片方法检测scdsFv对RV的特异结合活性;硫氰酸盐洗脱法测定scdsFv蛋白对RV的相对亲和力指数;分别用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和小鼠体内中和试验测定scdsFv的体外和体内中和活性。【结果】成功获得RV人源二硫键稳定单链抗体序列,大肠杆菌中表达得到scdsFv蛋白;分子量约为30.0kDa,Western blot表明此蛋白能与抗His单克隆抗体发生特异性反应。scdsFv能与RVVero疫苗特异结合,且结合力随抗原浓度降低而降低;scdsFv能与鼠脑组织中的RV结合。FAVN法测得scdsFv的中和效价为41IU/mL;小鼠体内中和试验表明scdsFv能保护55.6%鼠耐过强毒攻击。【结论】获得的scdsFv,具有良好的RV结合活性和体内外中和活性,有可能被用于暴露后狂犬病的预防。     

军用动物福利保障措施探讨

军用动物是一个特殊的动物群体,是世界各国军事装备的重要组成部分.本文分析和借鉴了《美军军犬计划》等文献中对动物福利保障的措施,依据军用动物在实验、训练、执行演习和作战任务的特殊性,探讨了保障其福利的办法.     

活血祛湿银线草

金粟兰科多年生草本植物银线草 (Chloranthus japonicus)，分布在我国吉林、辽宁、河北、山东、陕西及甘肃等省，多生长在海拔 500— 1300m的山坡及山谷杂木林下阴湿处或沟边草丛中，别名假金粟兰、四块瓦、灯笼花、四大天王。该植物高 20— 50cm，根茎横走，有分歧，生有多数黑褐色细长的须根。茎直立，单生或丛生，不分枝，茎顶生 4片叶，两两对生，呈假轮生，叶倒卵形，边缘有齿牙状锐锯齿，齿尖有一腺体。茎下部各节上对生两个鳞片状叶。白色的穗状花序生于茎顶。核果歪倒卵形，绿色。花期 4— 6月，果期 5— 8月。 　　银线草的全草有…     

犬细小病毒四川流行株分离鉴定及其遗传进化分析

从犬粪便中分离到1株细小病毒,在F81细胞出现明显的CPV病变,电镜观察可见细小病毒样粒子,进一步理化性质鉴定该病毒具有细小病毒的特征,表明所分离病毒为CPV,命名为CPV-04-08-CN-6.根据特异性引物,采用PCR技术扩增出VP2全长基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析.结果,CPV04-08-CN-6 VP2基因全长1755bp,编码584个氨基酸,与CPV参照株的VP2基因核苷酸同源性为99.69%,12个核苷酸发生错义突变,导致4个氨基酸发生变异.VP2基因的系统发生分析表明CPV-04/08/CN-6在细小病毒分类上属于CPV-2a型.     

东北地区常见野菜简介

薇菜 Osmunda cinnamomea var.asiatica　　俗名：牛毛广、分株紫萁、桂皮紫萁。薇科多年生草本,高 1米余,全株被锈褐色茸毛。根状茎短而粗大,斜生或直立。叶二型,营养叶绿色,长圆状披针形,二回羽裂,小裂片全缘,幼叶拳卷;孢子叶略小,密被锈色茸毛,穗状。生于海拔 200— 1000米的天然林下、林缘、灌木丛等肥沃湿润的壤土、腐殖质土中。每 100克食部含胡萝卜素 1. 97毫克、核黄素 0. 25毫克、抗坏血酸 69毫克。采摘拳卷绿色营养叶的幼叶及叶柄,沸水煮烫后清水中浸泡 1昼夜,期间换 2— 3次水,炒食或腌制酱菜。干制品需水浸复…