人骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及表达产物的生物活性分析(英文)

为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白 .SDS PAGE及Western印迹分析表明 ,有分子量约 6 6kD的目的蛋白表达 .纯化后的表达产物加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中 ,当浓度为 10 0ng ml时 ,象牙片上骨吸收陷窝的数量及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量均减少 (P <0 0 5 ) .而同时加入人OPG的多克隆抗体后 ,这一抑制作用可被拮抗 ,在浓度为 5 0ng ml时则无此作用 .人OPG蛋白在酵母系统的成功表达 ,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据 .     

热对成骨和破骨细胞影响及热休克蛋白和因子参与调节的研究进展

热物理因素在骨疾病的治疗、骨再生修复过程中的应用及对成骨细胞影响重要性的认识不断被深化,一定温度热处理可促进成骨细胞分化,热休克蛋白及热休克因子参与细胞保护与分化.但目前尚未阐明热对成骨细胞与破骨细胞偶联关系的影响及热休克蛋白70(HSP70)和热休克因子2(HSF2)对成骨细胞RANKL的调节机制.探明该影响及调节机制可能成为揭示热物理干预影响骨转化的关键所在之一.     

热作用下成骨细胞HSP70 mRNA的表达变化及其对破骨细胞增殖的影响

目的:研究不同温度热作用对小鼠成骨细胞系中HSP70 mRNA表达水平的影响及其培养液对小鼠破骨细胞增殖的影响.方法:取小鼠成骨细胞系MC3T3,不同温度(37℃-39℃-41℃-42.5℃)作用其一周,RT PCR方法观察其HSP70表达水平变化,同时取其培养液上清与小鼠破骨前体细胞RAW264.7共培养,MTT法观察其增殖情况.结果:经不同温度热(37℃-39℃-41℃-42.5℃)处理后,MC3T3细胞系中HSP70表达水平明显增加,并且呈现与温度梯度依赖性,其处理后的上清液分别与小鼠破故前体细胞系RAW264.7共培养,MTT法测定其增值水平,结果其增殖受到抑制,且抑制水平与温度呈梯度依赖关系.结论:热刺激可以促进成骨细胞中HSP70的表达,促使成骨细胞抑制破骨细胞增殖,HSP70可能是参与调控成骨细胞与破骨细胞平衡的重要因子.