抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.     

采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析

为了研究膜蛋白的跨膜结构,进行拓扑学分析是十分重要的.有许多分析膜蛋白拓扑结构的方法,本文采用烟草蚀斑病毒（TEV）酶特异性切割测试蛋白中跨膜片段的前段或后端所插入的tev识别序列EXXYXQ(S/G),如果TEV酶能够切割,表明该序列位于目标蛋白的细胞 质外.将Tev识别序列ENLYFQG 分别插入到拟南芥整合膜蛋白的的跨膜区域,然后转化进入酿酒酵母中. 消解酶(zymolyase)酶破除酵母的细胞壁后,TEV酶消化球状体,最后通过Western免疫印迹法来分析结果.有关该方法的注意事项在结果中进行了讨论.     

激活类法尼醇X核内受体（FXR）可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体（farnesoid X receptor, FXR）和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用．为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid, CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M, ApoM)表达的影响．本研究应用逆转录 聚合酶链反应（RT PCR）法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平．实验结果显示：FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子（mRNA和蛋白水平）的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加．本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用．     

Proton NMR investigation of heme and surrounding proton in low-spin cyanide-ligated bacterial hemoglobin fromVitreoscilla

1H NMR spectra of low-spin cyanide-ligated bacterial hemoglobin from Vitreoscilla (VtHb-CN) are reported. The assignments of the 1H NMR spectra of VtHb-CN have been made through MCOSY, NOESY, 1D TOE and SUPERWEFT experiments. Almost all resonance peaks of heme and ligated His85 are identified. The spin-lattice relaxation time T1's and the variation relationships of chemical shifts of these peaks with temperature have been acquired, from which the distances between the measured protons and Fe3 , and the diamagnetic chemical shifts have been acquired, respectively. The ionization constants of pKa's of ligated His85 are determined through pH titration of chemical shift, which is 4.95 for ligated His85 C2H proton. The lower pKa is attributed to the influence of the Fe3 of carrying positive charge and the coordination of His85 and Fe3 of heme.     

赤链华游蛇的染色体组型与银带带型研究

该文研究赤链华游蛇的染色体组型与NOR     

褐家鼠精母细胞中联会复合体的研究Ⅳ.常染色体联会复合体的发育和偶线期节的研究

采用表面铺展－SDS处理、硝酸银和磷钨酸(Phosphotungstic acid,PTA)染色电镜技术,研究了褐家鼠精母细胞中常染色体联会复合体（Synaptonemal complex, SC）的发育及偶线期节（Zygotene nodule, ZN）。在褐家鼠精母细胞的细线期,常染色体轴心（Axial cores, ACs ）已形成,同源轴心在空间上靠近,偶线期SCs 开始形成,到粗线期SCs 完全形成,于双线期SCs 开始解体。在双线期除了个别SCs 侧生组分分开外,大多数SCs 发生碎片化（fragmentation）。在偶线期未配对的ACs 和SCs 侧生组分及中央组分上均发现电子密度高的球形或椭圆形的节状结构――偶线期节,ZNs 在同源染色体配对过程中起很重要的作用。 Abstract　Zygotene nodules(ZNs) and development of the brown ratRattus norvegicus caracohave been studied, by surface spresding with SDS treatment, silver and phosphotungatic acid(PTA) staining techniques. The results as follows: Chromosomal axial cores(ACs) formed during leptotene nuclei in spermatocytes of the brown rat, some homologous axial cores were close to each other. The fomation of SCs starts at zygotene, completed at pachytene and disintegrates at diplotene. In diplotene, lateral elements of a few SCs separate and the presence of fragmented SCs takes place. During zygotene on unpaired ACs and lateral elements and central elements of SCs, there are dense spherical or elliptical nodules-zygotene nodules(ZNs). They play an important part in the process of homologue pairing.     

水稻染色体的长度顺序和编号问题

水稻染色体形体较小, 很难从形态上区分各别染色体。尽管有许多学者报道了水稻核型的研究结果, 但不同学者之间的分歧依然存在。本文对不同学者所作核型进行了分析, 从而对现行的水稻染色体编号系统提出了新的看法。 Abstract　As rice chromosome is very small, it is difficult to identify morphologically the individual chromosome from rice chromosome complement. Although many studies have been conducted on the karyotype of rice, controversies still exist among different researchers. The present paper summerized the data of rice karyotype given by different researchers, and some suggestions were also proposed on rice chromosome numbering system.     

丙型肝炎病毒北京株NS3基因的克隆及测序

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从北京株丙型肝炎病毒中扩增出ＮＳ３区基因片段,该片段经ｐＧＥＸ－Ｔ载体克隆到大肠杆菌ＤＨ５α菌株中．经自动序列分析仪测出ＮＳ３基因的７２８ｂｐ长的核酸序列．发现在该片段中第３１位核苷酸发生Ａ→Ｔ突变,产生一个终止突变．这表明,丙型肝炎病毒北京株存在一定的变异,产生缺陷型病毒,这类缺陷型病毒的出现可能是丙型肝炎病毒持续性感染的原因之一．     

《农业与环境生物技术文摘》

《农业与环境生物技术文摘》创刊于 1993年 ,是世界著名的剑桥科学文摘 (ＣＳＡ)近 40个系列检索刊物之一。该刊内容广泛 ,涉及微生物、植物、动物有关的生物技术研究 ,其中农业应用包括动植物病害的诊断与控制 ,生物技术在动植物育种、害虫防治、土壤微生物、废弃物处理、环境污染、能源、矿物和发酵及工艺工程中的应用。该刊把农业与环境生物技术分为 12个一级类目、34个二级类目、4个三级类目 :一般热点与评述专利遗传工程　微生物、植物、动物、克隆载体生物信息学与计算机应用方法　固定、色谱、细胞培养、深低温保藏、新细胞系、免疫…