贵州省黔东南野生藤本植物多样性研究

对黔东南16个县(市)野生藤本植物进行了调查,结果表明:野生藤本植物共计40科88属364种(含变种),双子叶植物有37科84属322种,单子叶植物有3科4属42种,裸子植物缺乏.该区地理成分复杂多样,科级地理成分有8个分布型,属级地理成分有12个分布型,以热带成分为主,温带成分也占有较大比例,具有从热带成分向温带渗透和过度的性质.藤本植物的生活型,以木质藤本占优势,为79.95％,草质藤本占20.05％.攀援类型分为4型8亚型,以缠绕类为主,占37.09％.该区藤本植物资源丰富,在垂直绿化与经济开发上具有十分广阔的前景.     

四川裂腹鱼脑型芳香化酶Cyp19b基因组织分布及温度对其表达水平的影响

为研究脑型芳香化酶基因Cyp19b在四川裂腹鱼(Schizothorax kozlovi)早期性别分化中的作用,采用RACE方法从四川裂腹鱼脑中扩增得到该基因c DNA全长序列,并应用荧光定量RT-PCR技术测定该基因m RNA的相对表达量,探讨该基因在不同规格四川裂腹鱼鳃、脑、心、肝、脾、肾、肌肉、精巢、卵巢组织中的表达差异,以及温度对其早期仔鱼阶段该基因表达的影响。四川裂腹鱼Cyp19b基因的c DNA全长序列共3 021 bp,共编码507个氨基酸,属于脑型芳香化酶基因;四川裂腹鱼Cyp19b基因编码的氨基酸序列与其他鱼类脑型芳香化酶基因编码的氨基酸序列同源性可达70%以上,而与性腺型芳香化酶基因编码的氨基酸序列同源性较低,为64%左右;四川裂腹鱼Cyp19b基因仅在脑组织中表达,具有比较高的组织特异性,且随着个体的增长,逐渐呈现显著的雌雄差异;对不同温度处理12日龄仔鱼6 d后,低温(10℃和14℃)能显著促进Cyp19b基因表达量的升高,但高温(26℃)却对其表达量无显著影响。由此推测,脑型芳香化酶基因Cyp19b可能在低温导致四川裂腹鱼雌性化过程中发挥着重要作用。     

基于CRISPR/Cas9系统构建精准调控Wnt信号通路的表达载体及其效果的验证

目的:构建基于CRISPR/cas9系统调控Wnt信号通路的载体,并在细胞水平验证其调控基因表达的效率。方法:选取Wnt信号中负性调控分子,设计并合成能够表达靶向上述分子gRNA的互补DNA克隆序列,BsmBI限制性内切酶酶切载体后,采用分子克隆的方法将上述序列克隆至目的载体lenti-sgRNA-Ms2-zeo,测序正确的克隆通过Lipofectamine2000与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共同转染入293细胞;转染24h后收集细胞,qRt-PCR检测目的基因的表达。结果:筛选了Wnt信号通路中已知的19个负性调控基因;针对每个基因设计了两对gRNA序列,并构建了能够表达gRNA和MS2融合序列的载体,测序结果显示重组质粒的DNA序列与预期完全相符。随机挑选了4个表达载体与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共转进入细胞,qPCR结果显示构建的目的载体联合lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine载体可以协同促进靶分子表达。结论:本研究成功构建了基于CRISPR/cas9基因编辑系统调控Wnt信号的载体。     

植物源β- 葡萄糖苷酶活性检测方法学研究

目的:来源于植物β-葡萄糖苷酶活性检测的方法学研究。方法:以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物,β-葡萄糖苷酶为催化剂催化底物生成对硝基苯酚,用紫外分光光度法测定对硝基苯酚的含量,根据生成的对硝基苯酚含量计算酶活性,并对此进行方法学研究。结果:对硝基苯酚标准曲线的相关系数为0.999;催化反应的线性相关系数为0.999;反应精密度的相对标准偏差为0.05%;方法重复性的相对标准偏差为2.8%;方法耐用性考察中,酶活性均大于1200 U/g,九个不同方法参数的酶活性相对标准偏差为4.6%;中间精密度实验中,十二份样品酶活性的相对标准偏差为6.6%;稳定性实验中,β-葡萄糖苷酶与底物反应后,放置0小时、16小时、22小时后,测定的酶活性均大于1200 U/g,相对标准偏差为1.1%。结论:此方法线性较好,有良好的方法重复性、精密度、中间精密度、耐用性和溶液稳定性,适用于来源于植物的β-葡萄糖苷酶活性检测。     

基于全基因组的温州光唇鱼源大肠杆菌E105的致病性与耐药性解析

为了加深对鱼源大肠杆菌(Escherichia coli)的理解,以全基因组测序为基础,解析了温州光唇鱼(Acrossocheilus wenchowensis)源大肠杆菌E105致病性和耐药性的表型与基因型间的关系,以期丰富大肠杆菌的病原学知识。结果显示,E105全基因组包括染色体基因组(5 022 520 bp)和6个质粒基因组,共预测到4 823个编码基因,4 510个基因被COG聚类到22类,1 140个基因富集到KEGG的22条代谢通路。E105与人(Homo sapiens)源(GenBank ID CP068822.1)和鸭(Anatinae)源(GenBank ID JAGFYD010000001)大肠杆菌基因组共线性程度更高。E105血清型为O108:H9,E105为EAEC/EHEC/EPEC混合致病型。E105中有170个毒力基因。E105对小鼠(Mus musculus)和大口黑鲈(Micropterus salmoides)的半数致死浓度(median lethal dose,LD50)分别为6.67×10⁵ CFU/g和2.61×10<...     

重症急性胰腺炎患者肠道菌群和代谢产物的变化特征及其与病情的相关性

目的 研究重症急性胰腺炎（SAP）患者肠道菌群和代谢产物的变化特征及其与病情的相关性。方法 选择2017年8月至2021年8月期间丽水市中心医院消化科收治的SAP患者作为SAP组,轻症急性胰腺炎（MAP）患者作为MAP组,同期体检的健康志愿者作为对照组。收集全部入选对象粪便标本检测肠道菌群失调情况。收集入选对象血清标本检测二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)、白介素（IL）-6、IL-8的水平。采用急性生理与慢性健康评分（APACHE-Ⅱ评分）、急性胰腺炎严重程度床边指数评分（BISAP评分）、全身炎症反应综合征评分（SIRS评分）评价SAP的病情,采用28 d生存情况评价SAP患者的短期预后。结果 SAP组的肠道菌群失调发生率及血清DAO、D-LA水平均高于对照组和MAP组（均P<0.05）。SAP组中肠道菌群失调患者的血清DAO、D-LA、TNF-α、HMGB-1、IL-6、IL-8水平及APACHE-Ⅱ评分、BISAP评分、SIRS评分、28 d累积病死率均高于肠道菌群正常患者（均P<0.05...     

细菌3-脱氧葡糖松还原酶产生面及产酶条件

从12株细菌菌株中筛选到一株产3-脱氧葡糖松还原酶的高产菌Bacillussp．2,并研究了该菌株的产酶条件。在所试验的细菌中,3-脱氧葡糖松氧化酶活性较低甚至检测不出,而还原酶活性普遍较高。该菌株最佳产酶条件为：培养基组成（％）：牛肉膏0．3,牛肉蛋白陈1．0,氯化钠0．5,0．5mmol／L3-脱氧葡糖松。培养基起始pH6．6,30℃振荡培养48h,产酶量最高,酶活力可达36．4u／g。3-脱氧葡糖松对产酶有诱导作用,而甲基乙二醛对产酶有抑制作用。     

核因子增强雌激素受体与雌激素效应元件的结合

利用体外翻译系统,翻译了能与雌激素效应元件（ＥＲＥ）结合的全长的人雌激素受体（ｈＥＲ）。制备了切除卵巢的雌性大鼠子宫核抽提物,在雌激素存在下,此核抽提物能增强ｈＥＲ与ＥＲＥ的结合。此核抽提物在５０℃保温１５ｍｉｎ后,明显减弱了增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的作用。提示了核抽提物中存在着能增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的雌激素依赖的热敏感性的辅助因子。在大肠杆菌中表达了谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合的雌激素受体的ＤＮ     

云南茯苓皮瓣化学成分研究

从云南产茯苓表皮中分得６个三萜类化合物,经光谱数据鉴定为：茯苓酸（Ⅰ）,３β－羟基羊毛甾烷－７,９（１１）,２４－三烯－２１－酸（Ⅱ）、茯苓酸Ａ（Ⅲ）,茯苓酸Ｂ（Ⅳ）、去氢齿孔酸（Ⅴ）,齐敦果酸（Ⅵ）。