非天然氨基酸突变的小鼠RANKL蛋白原核表达及抗血清制备

目的:研究非天然氨基酸突变的小鼠RANKL(m RANKL)蛋白的原核表达,并以表达的蛋白制备抗m RANKL蛋白的抗血清。方法:从小鼠的骨髓中提取总RNA,经PCR扩增m RANKL的胞外段,逆转录合成目的 DNA片段。将目的基因中编码第234位酪氨酸的密码子(TAT)突变成可编码非天然氨基酸p-硝基苯丙氨酸(p NO2Phe)的琥珀密码子(TAG),构建p ET28a-p NO2Phe234m RANKL重组表达载体,与p EVOL质粒共转化至表达菌E.coli BL-21(DE3),诱导表达并纯化。以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗m RANKL抗血清。采用ELISA测定抗血清效价,用Western Blot测定其特异性。结果:RT-PCR扩增出750bp的RANKL基因,并成功构建了p ET28a-p NO2Phe234m RANKL重组表达载体;p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL蛋白获得成功表达和纯化;以纯化的蛋白免疫小鼠,获得抗m RANKL抗血清,ELISA检测效价为1:6400,Western Blot结果显示该抗血清既可与p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL结合,也可与野生型m RANKL结合。结论:原核表达并纯化了p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL,制备了小鼠抗m RANKL的抗血清,为进一步研究阻断RANKL-RANK通路的新方法奠定了基础。     

“许家窑人”埋藏地层与时代探讨

“许家窑人”化石发现于河北省阳原县泥河湾盆地西端的侯家窑遗址。该遗址20世纪70年代历经数次发掘,发现古人类化石20件、石制品数万件以及大量的哺乳动物化石。虽然已有大量关于遗址的研究成果发表,但人类化石和考古遗物的出土地层仍有些模糊,文化层时代也存在较大争议;年代数据在20 kaBP到500 kaBP的大范围间变化,影响学者们对“许家窑人”及其文化遗存演化位置的认识。鉴于此,河北省文物研究所（现河北省文物考古研究院）在2007~2012年对该遗址开展了持续的考古调查及发掘,重要目的之一在于廓清遗址埋藏的地貌部位和文化层的分布状况等基本信息。侯家窑遗址的地层包含上、下两个文化层;下文化层以下2~3 m（距地表约14.5 m）处确认了不整合接触面,其下为泥河湾层堆积,之上为河流阶地堆积。综合对20世纪70年代发掘的地层描述、新发掘地层以及人类化石保存状态的认识,“许家窑人”化石应出自遗址地层沉积序列的上文化层中,而非湖相的泥河湾层中。通过对目前遗址已有测年数据的重新梳理,我们认为,上文化层即“许家窑人”化石的时代为200~160 kaBP,主要对应深海氧同位素6阶段早期;下文化层的准确年代仍需验证,目前光释光年龄为198±15 kaBP, ²⁶Al/ ¹⁰Be埋藏年代为240±50 kaBP。     

毛翼管鼻蝠在广西和江西分布新纪录及其性二型现象

于2013年分别在广西北流大容山和江西井冈山用蝙蝠竖琴网分别采集到1只和9只蝙蝠标本,主要特征为:体型中型,鼻部前端呈短管状,背部毛基黄褐色,毛尖褐栗色,头骨和牙齿均粗壮。在室内使用Pettersson D500X超声波接收仪录制其静止和飞行状态下的回声定位信号,其超声波为FM型,飞行状态下主频率51.3~59.0 k Hz。根据形态特征鉴定该蝙蝠为毛翼管鼻蝠Harpiocephalus harpia,是广西和江西两省翼手目分布新纪录。对该种蝙蝠雌雄标本进行对比发现,6项外部形态和头骨指标上的差异有统计学意义,支持该种具有性二型现象。标本现保存于广州大学。     

广东发现泰坦尼亚彩蝠及其回声定位声波特征

于2014年4月在广东封开黑石顶省级自然保护区,使用竖琴网采集到4只体形较小的雌性蝙蝠样本,其形态特征为无鼻叶结构,具漏斗状耳廓和披针形耳屏,前臂长32.30~34.11 mm,胫骨长16.47~17.72 mm;头骨较扁平,颅全长13.99~14.59 mm,脑颅高4.66~5.17 mm;齿式为2.1.3.3/3.1.3.3=38。经鉴定为泰坦尼亚彩蝠(Kerivoula titania),是广东省翼手目分布新纪录。首次报道了该种蝙蝠的回声定位声波特征,声波类型属于调频(FM)型,峰频(114.3±3.9)k Hz,带宽(117.8±12.3)k Hz,脉冲持续时间(1.7±0.3)ms,脉冲间隔时间(12.9±1.3)ms。标本现保存于广州大学生命科学学院。     

2015—2017年郑州市疑似预防接种异常反应监测分析

目的分析郑州市2015—2017年疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的流行病学特征,评价AEFI监测系统运转情况,国家免疫规划(national immunization program,NIP)和非NIP疫苗的安全性和预防接种服务质量。方法通过中国免疫规划信息管理系统收集郑州市2015—2017年报告的个案数据,采用描述性流行病学方法进行分析。结果郑州市2015—2017年共报告AEFI个案2 803例,一般反应占91.15%、异常反应占7.53%、偶合症占1.25%、接种事故和心因性反应各占0.04%。2017年各项监测指标均达到年度指标要求,而2015和2016年个别指标均未达到。2 803例AEFI中,金水区报告例数最多,上街区报告最少; 6、8和12月呈现3个高点,占31.47%;男女性别比为1.33∶1; 2岁以下儿童占79.45%。造成AEFI例数发生较多的疫苗分别为:乙脑减毒活疫苗(556例)、麻风疫苗(533例)、无细胞百白破疫苗(318例)。临床诊断以发热/红肿/硬结、过敏反应-荨麻疹和其他为主。AEFI转归99.61%愈后良好。4例死亡病例均分类为偶合症,涉及的疫苗分别为卡介苗、乙肝疫苗(酿酒酵母)、A+C群流脑疫苗(多糖)和狂犬病疫苗(Vero冻干)。结论 AEFI监测系统的灵敏性较高,且监测质量逐年提高;疫苗的安全性和免疫服务的质量良好。     

广西地不容种质资源的ISSR分析

采用简单序列重复区间扩增(ISSR)分子标记技术对广西地不容3个野生居群和1个引种居群共92个个体进行了遗传多样性研究。10个引物共扩增出61条带,其中60条具多态性,多态性位点百分率为98.36%。4个居群多态性百分率在73.77%～86.89%。Nei’s基因多样性指数(H)为0.3379,Shannon信息多样性指数(Ⅰ)为0.5055。3个野生居群Nei’s遗传分化系数(Gst)表明:83.87%遗传变异分布在居群内,16.13%的遗传变异分布在居群间。引种居群与3个野生居群间的遗传一致度达0.8846。引种居群有效地保护了广西地不容的遗传多样性。     

不同剂量当归口服对硫化钠致小鼠斑秃模型的影响

目的:探讨当归口服对硫化钠致小鼠斑秃模型的影响及其可能机制。方法:将50只雄性KM小鼠随机均分为空白对照组、模型组和当归高、中、低剂量组,每组10只。模型组和当归高、中、低剂量组均以8%硫化钠酒精溶液局部外涂建立斑秃模型,当归高、中、低剂量组予以不同剂量当归煎剂灌胃,空白对照组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续7 d。采用酶联免疫吸附(ELISA)和苏木-伊红素(HE)染色法分别检测小鼠血清白细胞介素-10(IL-10)水平和单位视野毛囊数,同时对小鼠背部脱毛区毛发生长情况进行评分。结果:模型组毛发生长评分、单位视野毛囊数及血清IL-10水平均显著低于空白对照组(P0.05)。与模型组比较,高、中、低剂量组毛发生长评分、单位视野毛囊数及血清IL-10水平均显著高于模型组(P0.05)。中剂量组组毛发生长评分明显高于高、低剂量组(P0.05),低剂量组评分与高剂量组毛发生长评分、单位视野毛囊数及血清IL-10水平比较无明显差异(P0.05)。结论:口服当归对硫化钠致斑秃小鼠模型有生发作用,且以中剂量效果最佳,其生发作用可能与提高血清IL-10水平有关。     

曼地亚红豆杉春梢生长过程生理生化变化研究

测定自然生长状态下曼地亚红豆杉春梢的生理生化指标(过氧化物酶、蛋白质、硝态氮),以了解和研究它们的变化趋势。结果表明,过氧化物酶活性、蛋白质含量和硝态氮含量的变化都呈现出先升后降的过程;在春梢生长的第4～8天都为积累上升过程,到第8天达到了最大值;8～12 d过氧化物酶活性和蛋白质含量急剧下降,硝态氮含量也在8～28 d间下降幅度较大;1 2 d或28 d之后过氧化物酶活性、蛋白质含量和硝态氮含量都维持较低的水平,但变化幅度不大。因此,在自然状态下,应及时给予土壤更多的肥料,才能为植物供给营养并为其生长提供充足的条件。     

应用RNA干扰技术体外抑制兔成纤维细胞HGPRT的表达及其核移植研究

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶( hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase,HGPRT )的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关．制作HGPRT基因表达降低的模式动物,将有利于人们对这种疾病的发病机理和治疗做进一步的研究．构建了针对HGPRT基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染兔成纤维细胞,获得携带该干扰片段的转基因细胞系,经PCR鉴定转基因成纤维细胞克隆阳性率为83.3%．RT-PCR及Western blot检测结果表明转基因干扰成纤维细胞系HGPRT mRNA和蛋白质表达量明显降低．最后,以转基因成纤维细胞进行核移植,囊胚率为27.8%,与正常来源的成纤维细胞囊胚率相比较差异不显著．说明,通过RNAi可稳定干扰兔成纤维细胞HGPRT基因的表达,为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件．     

LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究

间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视．为寻找与鼻咽癌( nasopharyngeal carcinoma,NPC )发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术( laser capture microdissection,LCM )纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双向凝胶电泳( fluorescent two-dimensional difference gel electrophoresis 2-D,DIGE )结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋白．Western blot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋白(CapG、L-plastin和S100A9),证实了2D-DIGE结果的可靠性．建立了LCM 纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,共得到34个有统计学意义的蛋白质点,质谱鉴定得到20个差异蛋白．研究结果提示：这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻咽癌细胞和周围间质的关系．对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生中的作用机制,并为从间质途径寻找肿瘤治疗靶标提供新思路．