苏云金芽孢杆菌的一个新亚种(Btsubsp.sinensis)

198 9年自云南昆明市石林的红棕壤中分离到数株苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ ｓｉｓ,Ｂｔ)菌株[1] ,对其中的一株ＹＫ30 0 4进行了生物学特性、杀虫特性研究及分类鉴定。1　材料与方法1.1　供鉴定的Ｂｔ菌株由云南昆明市石林的红棕壤中分离的苏云金芽孢杆菌ＹＫ30 0 4菌株。1.2　标准Ｂｔ菌株血清型Ｈ1 Ｈ4 1、Ｈ4 4 Ｈ55及Ｈ57 Ｈ69标准Ｂｔ菌株由法国巴斯德研究院ＤｒＬｅｃａｄｅｔ提供 ,其余为本实验室保存。1.3　生物测定用昆虫小菜蛾 (Ｐｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ) 3龄幼虫 ;斜纹夜盗蛾 (Ｐｒ…     

昆虫肠道蛋白酶作用下δ内毒素的毒性肽及毒力特异性的变化*

本文报道杀斜纹夜娥(Prodenia lirura)δ-内毒素和杀鞘翅目昆虫δ-内毒素经昆虫肠液蛋白酶及胰蛋白酶作用后,其毒性肽及毒力特异性的变化。 以Sephadex G75柱层析提纯的130kD原毒素,经斜纹夜蛾幼虫肠液蛋白酶作用后,产生的70kD与75kD抗蛋白酶多肽(PRP)对斜纹夜蛾和家蚕皆有毒;经家蚕幼虫肠液蛋白酶作用后,产生的62kD与65kD的PRP失去对斜纹夜蛾的毒性,仅对家蚕有毒;经胰蛋白酶作用后产生的65kD与68kD的PRP,其毒力特性与经家蚕肠液蛋白酶作用后的相似。斜纹夜蛾肠液蛋白酶作用后产生的PRP,可进一步被家蚕肠液蛋白酶或胰蛋白酶降解为63-65kD的PRP,此种多肽对斜纹夜蛾无毒,对家蚕有毒。杀鞘翅目昆虫的原毒素不能为胰蛋白酶和粘虫肠液所完全降解。证明不同种类昆虫的肠道蛋白酶对占-内毒素蛋白质的作用位点不同,δ-内毒素对宿主昆虫的毒力特异性与其肠道蛋白酶的特性密切相关。     

抗鞘翅目δ－内毒素 及毒素基因文库的构建

研究了对鞘翅目昆虫有毒效的5个苏云金芽孢杆菌新蔚株YM一03、s曲04 04、YKI4－01、SH11—05、sphl6－O1伴孢晶体的蛋白质组成,以柳蓝叶甲为供试虫测定了它们的LC50。值,其中YM—03毒力最高。测定了YM－03晶体蛋白N－末端部分氨基酸序列。用琼脂糖凝胶电泳快速检测了5株菌的质粒组成,证明其质粒图型各不相同。以广谱的cosmtd质粒pLAFRI为载体,通过限制酶EcoRI部分酶解获得“目的”DNA片段,构建了菌株YM－03的总DNA文库,对17个抗性克隆的质粒进行酶切分析表明,其中古有外源片段的克隆占总数的76％,超过要求的理论值。以人工合成的杀鞘翅目基因的18bp保守序列片段为探针,筛选了近1200个抗性克隆,获得了3个阳性克隆,LE392(pBYM2)、LE392(pBYM3)和LE392(pBYM4),毒力测定试验表明LE392(pBYM3)和LE392(pBYM4)有一定表达,表明其携带有δ－内毒素基因。     

几种苏芸金杆菌晶体的毒力及形态结构

研究了苏芸金杆菌(Bacillus thurin&itntis)6个变种的7个菌株的提纯晶体对家蚕(Bombyx mori)和棉铃虫(Heliothis armigera)的毒力及其在电镜下的形态与结构。证明7种晶体对两种昆虫的毒力大小有不同的顺序。方形晶体和具镶嵌形的菱形晶体对两种昆虫皆有较高毒力,细小菱形晶体的毒力皆很低,不规则的颗粒状晶体和六角彤晶体不显示毒性或仅具很低毒件。不同晶体的表面结构亦有差异。并证明方形晶体和两种具镶嵌型构造的菱形晶体易受超声波破坏,小菱形及其它两种非菱形晶体对超声波有较大抗性。认为苏芸金杆菌晶体的形态结构及其对超声波的抗性与它们对鳞翅目昆虫的毒力之间有一定关系。     

化学物质和保存条件对苏云金芽孢杆菌δ-内毒素的影响

研究了几种化学物质及保存温度与时间对几种苏云金杆菌δ-内毒素的毒力和晶体蛋白质的影响。结果表明,在所用浓度范围内,农乳600、二甲苯及氯氰菊酯对δ-内毒素的毒力有不同程度的影响。三种化学物质分别与伴孢晶体的混合物,室温下存放5个月或1年,其毒力有较明显到大幅度的下降。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,室温下存放6个月,各化学物质处理的晶体蛋白质被轻微、明显或完全降解。蒸馏水中的伴孢晶体,室温或-20℃下存放,毒力下降较缓慢,晶体蛋白质的降解程度亦较低。不同变种的δ-内毒素蛋白质的稳定性有差别。讨论了上述     

苏芸金杆菌伴孢晶体和芽孢孢衣的蛋白质组分及其与毒力的关系

研究了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)3个变种6个菌株的提纯伴孢晶体和芽孢对大蜡螟(Galleria mellonella)和大菜粉蝶(Pieris brassicae)的毒力、晶体的蛋白质和多肽成分及芽孢衣中的类晶体蛋白质成分.生物测定表明,晶体毒力高于芽孢,在总数量相同的情况下,晶体和芽孢近1:1的混合物的毒力高于单独的晶体或芽孢.芽孢衣中存在一种类似晶体蛋白质的成分,无晶体突变株及无效野生株的芽孢则无此种蛋白质且对两种昆虫无毒.变种wuhanensis和变种galleriae的晶体含MW138000的主要蛋白质和63000的次要蛋白质,经碱性缓冲液溶解后,上清液含MW138000的蛋白质,沉淀中含MW63000的蛋白质;变种aizawai的晶体中仅含138000的蛋白质.对大蜡螟无毒的HD-11(var.aizawai)晶体的蛋白质成分有别于上述晶体,其胰蛋白酶消化物的SDS凝胶电泳图型显示少2条多肽带,但对大菜粉蝶仍有效.结果表明,苏芸金杆菌的芽孢在昆虫病理中有重要作用,伴孢晶体的蛋白质和多肽成分与它们对昆虫的毒力特性之间有密切关系.     

乳化剂和保存条件对两种苏芸金杆菌杀蚊δ—内毒素的形响

我们已研究过有关化学物质及保存条件对苏芸金杆菌杀鳞翅目δ-内毒素的影响,本研究的目的在于考查乳化剂及保存温度与时间对两种杀蚊δ-内毒素毒力的影响。一、材料与方法 1、供试昆虫致倦库蚊(Culex fatigans)。 2、苏芸金杆菌菌株IPS—82(Bcillus thuringiensis var israelensis)L14(未鉴定)。 3、伴孢晶体的分离提纯以液体双相法结合蔗糖密度梯度法进行,提纯的晶体悬液于-20℃保存备用。     

苏芸金杆菌的质粒检测及载晶体蛋白合成基因的质粒在不同菌株间的传递

分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个变种19个野生菌株及无晶体(sp+cr-)和无芽孢(sp-cr+)突变株的质粒图型,证实了苏芸金杆菌的质粒组成既有变种的特异性,亦有菌株的特异性。载有晶体蛋白质合成基因的质粒,B. thuringiensis var．Kurstaki HD-191 菌株可能为42和50Mdal,B．Thuringiensis var. aizawai HD-282菌株为47Mdal, B．Thuringiensis var．Israelensis IPS-82菌株为57Mdal的质粒,而B．Thuringiensis var. wuhanensis 140 菌株的此种基因则可能不在质粒上而在染色体中。HD-191载晶体蛋白合成基因的质粒以很高频率被传递给其无晶体突变株HD-1并在后者细胞中表达。B. thuringiensis var. israelensisIPS-82菌株和 B．Thuringiensis var. kurstaki 无晶体突变株HD—1之间载晶体蛋白合成基因质粒的传递未能成功,提示可能存在着不相容性的障碍。     

土壤来源的五个苏云金芽孢杆菌新亚种的鉴定

从中国土壤中分离的大量苏云金芽孢杆菌菌株中鉴定出H42、H43、H56、H60及H62等5种新H血清型,并进行了形态、培养特征、生化反应、晶体蛋白质成分及毒力特性等项检测鉴定,鉴定了5个苏云金芽孢杆菌新亚种： Bacillus thuringiensis subsp. jinghongiensis (H42), B.thuringiensis subsp. guiyangiensis (H43),B.thuringiensis subsp. rongseni(H56),B.thuringiensis subsp. pingluonsis(H60)及B.thuringiensis subsp. zhaodongensis(H62) 。毒力生物测定证明5个新亚种的代表菌株对棉铃虫(Heliothis armigera)\,小菜蛾(Plutella xylostella)\,柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)幼虫均无毒力。H42、H43、H56、H60对埃及伊蚊(Aedes aegypti)\,斑须按蚊(Anopheles stephensi)及尖音库蚊(Culex pipiens)亦均无毒;H62对埃及伊蚊无毒,但对尖音库蚊与斑须按蚊有低毒。