植物体内的钙信使系绕

Ca对植物不仅仅是一种大量营养元素,更重要的是作为偶连胞外信号与胞内生理生化反应的第二信使,作为植物代谢和发育的主要调控者。本文介绍了Ca在植物细胞中的分布及其体内平衡机制,以及Ca2+信使系统调控的植物生理生化过程,讨论了外界信号通过Ca2+信使系统的传递和表达过程,Ca2+信使系统对基因表达的可能影响,以及Ca2+信使系统的作用机制,并提出了今后的研究方向。     

基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化、纯化和检测方法

目的:建立并优化基于Avi-tag标签技术的人胚肾细胞增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的定点生物素化标记、纯化和检测方法。方法:分别构建具有Avi-tag标签的eGFP真核表达载体plenti-Avi-eGFP和BirA酶真核过表达载体pQCXIH-BirA,将plenti-Avi-eGFP和pQCXIH-BirA共转染人胚肾293T细胞,12 h后观察Avi-tag标签对eGFP蛋白在细胞内定位的影响;48 h后裂解细胞,用链霉亲和素珠子纯化生物素标记的eGFP,SDS-PAGE观察eGFP纯化和富集情况,并优化基于Western印迹的生物素化eGFP检测方法。结果:Avi-tag标签对eGFP在细胞内的定位无影响,同时BirA酶在293T细胞内可将带Avi-tag标签的eGFP标记上生物素;生物素化的eGFP可特异性地被链霉亲和素珠子纯化和富集,纯度可达95%;Western印迹检测生物素化蛋白的最终条件为5%的BSA作为封闭液和终浓度为100 ng/mL的链霉亲和素-HRP。结论:建立了基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化标记、纯化与检测方法,为该方法的广泛应用奠定了前期技术基础。     

城市公园绿地可达性分析——以沈阳市铁西区为例

公园绿地作为城市重要的自然景观元素,其可达性是体现公园绿地所提供的自然服务能否被市民便捷、公平享用的一个重要指标.对可达性理论进行深入研究,从而更加准确、真实地对公园绿地可达性进行评价是目前亟需解决的问题.本文基于QuickBird卫星影像和GIS平台,以沈阳市铁西区为例,选取步行、非机动车、机动车和公共交通4种方式来定量评价公园绿地的可达性,并对4种交通方式下公园绿地可达区的空间分布、可达面积及可达人口的数量差异进行对比分析.结果表明： 沈阳市铁西区公园绿地数量较少且分布不均衡,表现为西南部及中心区域公园绿地的可达性较好,边缘区域可达性较差,东部和北部边缘可达性最差;各交通方式下公园绿地的可达性存在较大差异,机动车可达性最好,其次为非机动车和公共交通,步行可达性最差：近九成的居民可以采用步行30 min、非机动车和公共交通15 min、机动车10 min的方式到达最近的公园绿地.该研究对城市公园绿地可达性理论的深入、系统研究提供了一种新思路,对基于可达性的绿地空间布局优化具有重要的现实意义.     

菌落PCR在大规模基因组测序中的应用

一种利用菌落直接PCR扩增DNA并用于测序的实验方法.通过对引物的设计和菌液浓度控制,使PCR反应后的内容物对测序干扰减到最小.与传统的测序过程比较,它省去了抽提模板DNA一步,节省了大量时间和实验成本.另外此方法可对BAC亚克隆库构建时由连接转化过程中导致的假阳性起筛选和鉴定作用.采用该法成功测定了籼稻（Oryza sativa indica）广陆矮4号的L3173号BAC DNA全长序列（约100 kb）,GenBank登录号：AL512542.     

作物种质资源表型性状鉴定评价:现状与趋势

表型是作物基因型与环境互作后呈现出来的性状,包括形态学、生育期、产量、品质、抗性等性状。作物种质资源具有丰富的遗传多样性,并经过数千年在世界不同区域驯化利用中的人工选择,形成了表型性状的多样性,构成育种家选育作物新品种的物质基础。认识和发现作物种质资源表型的多样性需要通过系统、科学的鉴定,特别是培育适应全球气候变化下环境的品种,更需在大量种质资源中发掘和利用抗旱、耐热、抗病虫、水肥高效利用等特性的材料。作物种质资源各类表型性状的鉴定需要对环境进行有效的控制,而多年多点的鉴定可以准确观察鉴定性状的变异水平或表达稳定性,是育种家准确选择和利用性状的重要依据。作物种质资源表型性状的鉴定主要采用田间鉴定、设施鉴定、仪器分析、感官鉴定的方式。近年来,作物种质资源表型性状鉴定已从单一环境、低通量、粗放型鉴定转变为多年多环境、重点性状、高通量精准型鉴定。随着组学技术、智能与信息技术的快速发展,作物种质资源的表型性状鉴定已进入一个新阶段,形成作物育种中重要性状准确快速发掘与应用的坚实基础。     

基于miRNA-155结构的人工miRNA表达载体的构建与评价

目的:建立一种适用于人工miRNA(amiRNA)表达研究的克隆载体。方法:基于实验室构建的短发夹RNA(shRNA)表达载体pshOK-basic,将鼠源miRNA-155的侧翼序列插入合适的酶切位点构建得到amiRNA重组表达载体pOK-basic;应用本载体分别构建靶向萤火虫荧光素酶(luc2)和红色荧光蛋白(mCherry)基因的amiRNA并检测其沉默效果。结果:应用此载体能快速高效地构建amiRNA,靶向luc2和mCherry报告基因的amiRNA能较好地抑制靶基因的表达。结论:构建了一种能高效表达amiRNA的克隆载体,为amiRNA的进一步研究及应用奠定了基础。     

微生物源脂肽的生物合成和分子调控

微生物源脂肽具有抑制真菌和细菌的生长、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性,在农业生物防治、临床医疗、环境治理等多种领域具有巨大的应用潜力。然而,低产量一直是影响其推广应用的瓶颈。深入了解脂肽合成的关键因素和调控策略对于提高其产量和纯度至关重要。本文概括了3大家族脂肽surfactin、fengycin和iturin的结构、功能及应用前景,介绍了NRPS和NRPS-PKS两种合成系统的结构域和功能,阐释了脂肽生物合成过程中侧链脂肪酸的合成、脂肪酸的活化及与氨基酸的连接、肽链的延伸和环化三个阶段的模块组装和酶催化活动,以及三大家族脂肽合成操纵子开放阅读框的组成;总结了导入或缺失关键基因、定点突变、模块替换、强启动子替换、修饰前体路径等多种遗传操作对脂肽产量的影响,以及群体感应肽信息素、sigma因子等全局调控因子对脂肽合成基因表达的调节。指出利用多组学联用深入探讨脂肽合成的全局分子调控机制和加强结构域蛋白互作和分子动力学研究是提高脂肽产量和纯度以及创造新脂肽的理论基础,提出了利用基因组装和编辑等合成生物学方法及代谢工程技术提高脂肽产量和挖掘新型脂肽靶向性的可能途径,为推进脂肽的生产和应用进程提供科学参考。     

自发性高血压大鼠原癌基因表达和限制性内切酶片段长度多态性分析

观察自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）的生长曲线、ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达和ｃ－ｆｏｓ基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠（ＷＫＹ）进行对比．结果显示,在小牛血清作用下ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ生长速率和ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达明显大于ＷＫＹ;ｃ－ｆｏｓ原癌基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析表明,经ＢａｍＨⅠ或ＥｃｏＲⅠ酶切后的ＳＨＲ和ＷＫＹ的酶切图谱一致,同时也未发现ＳＨＲ的ｆｏｓ基因扩增现象．提示,ＶＳＭＣｓ的异常增殖和ｃ－ｆｏｓ原癌基因的表达异常与高血压的形成有关,而ｃ－ｆｏｓ原癌基因的过度表达可能是由于某些与基因转录调控有关的因素异常所致．     

G蛋白－肌醇磷脂途径及其与高血压的关系

作为第二信使的三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌ－１,４,５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＩｎｓＰ３）主要经２种途径形成：Ｇ蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体。两类受体激活各自相应的磷脂酶Ｃ（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ,ＰＬＣ）而水解磷脂酰肌醇－４,５－二磷酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－４,５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＰｔｄＩｎｓ４．５Ｐ２）形成ＩｎｓＰ３和二酯酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ,ＤＧ）。ＩｎｓＰ３形成后动员储存钙和促进外源性钙内流。近年来的研究证实,Ｇｑ是调节ＰＬＣ－β１活性的特导性Ｇ蛋白,Ｇｑ系列α亚单位包括Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１４、Ｇα１５和Ｇα１６。高血压的重要病理基础是动脉血管壁的痉挛和增殖,许多血管活性物质可以促使血管平滑肌细胞的收缩和增生,同时伴有细胞内ＩｎｓＰ３产生增加．但高血压并不能造成Ｇｑ量的持续改变。     

血清HCG, AFP联合超声检查对前置胎盘植入类型的相关性分析

目的:探讨超声对植入胎盘诊断的敏感性及特异性及血清AFP、HCG和不同胎盘植入类型的相关性。方法:选取孕晚期前置胎盘产妇208例,按孕周1:1匹配,选取入无前置胎盘无胎盘植入的产妇208例为对照组。产前对所有研究对象进行胎盘超声学检查,根据术后病理将胎盘植入类型分为粘连性胎盘、植入性胎盘和穿透性胎盘组。同时测定产前、产后3 d、产后4 w血清AFP和HCG水平。结果:208例前置胎盘最终病理确诊胎盘植入67例,占32.21%(其中粘连性胎盘组31例、植入性胎盘组19例、穿透性胎盘组17例),产前超声诊断62例。超声对胎盘植入诊断总的敏感性86.56%,特异性97.16%。对照组、前置胎盘并胎盘植入组、单纯胎盘前置组胎盘厚度平均(2.34±0.63)cm、(3.27±0.78)cm、(2.42±0.61)cm,差异有统计学意义(P0.05)。粘连性胎盘植入组、植入性胎盘组、穿透性胎盘组产前、产后3 d、产后4 w各时间点血清AFP、β-HCG均明显高于对照组和前置胎盘组,差异有统计学意义(P0.05)。穿透性胎盘组产前、产后3 d、产后4 w各时间点血清AFP、β-HCG高于粘连性胎盘组和植入性胎盘组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:超声对穿透性胎盘植入诊断具有较高的特异性和敏感性,但对粘连性胎盘植入诊断的敏感性和特异性不高,血清AFP和HCG水平和胎盘植入类型有一定关系,联合检测有助于胎盘植入类型的诊断。