一种简便的双链DNA测序法

ASimpleMethodforSequencingDouble-sterandedDNATemplatesYuanHanyingLiWenLiYuyang(StateKeyLaboratoryofGeneticEngineering,InstituteofGenelics,FudanUniversity,Shanghai200433)随着分子生物学和基因工程研究的不断发展,快速而精确地测定DNA的序列是人们了解基因结构与功能的一项重要技术。在DNA测序技术中,口前用得较多的是利用M13、pBS系统重组单链DNA为模板,用双脱氧终止法[3]测序,对于许多不能得到单链DNA的亚组质材载体。通常以正纷双链DNA为模板进行测序,但这样就比单链DNA测序复杂得多了,首先要将双…     

非常规酵母基因工程表达系统

非常规酵母系指除了酿酒酵母与粟裂殖酵母之外的酵母曹。非常规酵母可利用其自主复制序列构建载体,但整合载体是进行外源基因导入的主要方式。非常规酵母的转化有一定的宿主范围,可采用与酿酒酵母相同的方法,最常用的仍为化学法。高效表达元件可利用酿酒酵母的强启动子,也可以根据非常规酵母菌的代谢特点寻找强启动子．本文综述了近年来应用非常规酵母基因表达系统表达外源基因的一些实例。     

酵母与大肠杆菌穿梭定点突变载体系统的构建及应用

利用可以在大肠杆菌中形成单链又可以在大肠杆菌和酵母中穿梭的质粒BFDl9作为寡聚核苷酸介导的定点突变载体,分别在大肠杆菌和酵母中获得了预定的TRP1基因突变体,再利用这个带TRP1突变的质粒BFD25和BFDl9,建立了一个在酵母系统中进行定点突变时可以富集突变体的筛选方法。借助这种方法我们在酵母系统中完成了人表皮生长因子基因表达单元的寡聚核苷酸介导的缺失突变,此突变载体系统在酵母与大肠杆菌中都适用,而且可以直接在酵母细胞中进行突变表型的研究。     

乳酸克鲁维酵母LAC4启动子的克隆及UASⅡ功能的研究

用ＰＣＲ方法取得乳酸克鲁维酵母ＣＢＳ１４１和ＬＡＣ４基因从－６６１到＝２１ｂｐ区段与大肠杆菌ｌａｃＺ基因融合构建成表达载体ＹＦＤ１１４并转化Ｋ．ｌａｃｔｉｓＹ１６７。通过半乳糖,乳糖,山梨醇或ＩＰＴＧ诱导,我们研究了所克隆的ＡＬＣ４启动子的功能。     

质粒DNA转化E. Col I的最适条件的研究

在基因工程技术的研究中，如何改善转化 的有效性是一个非常重要的研究课题，它直接 影响到实验的成败。1970年Mandel等［51发现 经氯化钙处理的E. coli细胞可以吸取I噬菌 体DNA, 1972年Cohen等［3，证明氯化钙处理 过的细胞对于质粒DNA也是一个很有效的受 体。1979年Dagert等〔‘，报道了延长氯化钙处 理时间能提高质粒DNA的转化效率4-6倍。 而目前在E. coli克隆化系统中基本上仍沿用 Cohen转化法。 本文报道我们对Gagert方法作了某些改 进，使转化效率进一步提高20多倍，为提高工 作效率提供了有效的方法。