基于 DArT 标记的三疣梭子蟹地理种群遗传多样性分析

三疣梭子蟹是中国重要的水产养殖动物。目前,其养殖业的蟹苗主要还是依靠野生资源,但种质（生长速度、肌肉品质和抗病性）退化现象严重,因此迫切需要了解个体、种群和物种遗传多样性。报道了一种检测三疣梭子蟹多样性芯片技术（diversityarraystechnology,DART）。DArT技术采用芯片可同时检测数百个基因座,即使没有基因组DNA序列信息也可以分析遗传多态性。采用了风tL／TaqI复杂性降低方法,多态性效率为12．5％。利用多样性芯片杂交获得313个DArT标记。这些DArT标记用于点制多态性富集芯片,DArT标记具有较高的多态性信息含量（polymorphisminformationcontent,PIC）。最后根据0／1矩阵获得UPGMA系统进化树,结果表明样品间的遗传多样性与文献报道一致。芯片质量检测中包括赋值重复性为99．1％,同一样品不同个体间的差异不显著,其差异介于0．7％～1．6％。研究表明,DArT技术具有高通量和低成本的显著特点,该技术可为三疣梭子蟹资源保护和良种选育提供支持。     

基于医院管理者视角的医学新技术转化应用模式分析

目的 对医院管理者视角下,新技术的引进,引进后的使用与管理及使用后的综合评估与反馈进行综合分析。方法 通过对53名医院管理人员1~1.5小时的半结构式访谈收取定性资料,并进行属性归类分析。结果 研究发现新技术在引入过程中主要考虑的因素涉及新技术的特性及循证依据的情况、新技术引入可能对医生的影响、新技术引入可能为医院带来的影响、新技术引入过程中涉及的相关政策、新技术引入可能对医患关系的影响;明晰了新技术引入的程序、新技术的使用管理及使用后的评估。结论 二三级医院基本已经形成一整套新技术的引进及管理反馈机制,在医院层面新技术的引进及使用过程中,政策因素起到非常重要的作用。     

蛋白激酶B对活性氧调节7721人肝癌细胞生长的影响

以有义和反义人猛型超氧化物歧化酶（MnSOD）、蛋白激酶B（PKB）cDNA分别转染入7721肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧水平及PKB的活性,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转导途径的关系。结果表明,低浓度外源性活性氧过氧化氢（1～10umol/L）应激及MnSOD低表达细胞中内源性活性氧水平升高,都可促进肝癌细胞增殖,而抗氧化剂丹参素(40mg/L）干预及MnSOD高表达使细胞内源性活性氧水平相对下降,都可一定程度抑制细胞的生长。采用^32P参入法检测细胞PKB酶活性,发现细胞内、外源性活性氧均能激活PKB,而采用抗氧化干预,能明显抑制PKB的酶活性。采用PT-PCR法检测AP-1转录因子组成成员c-fos和c-jun基因的mRNA表达,发现与PKB活性呈正比。说明活性氧在特定细胞内氧化/还原环境下可通过激活PKB途径传递信号、调控转录因子AP-1表达、促进肝癌细胞生长。     

HSV—2阴道感染并诱导小鼠阴道粘膜上皮细胞凋亡

最近的报道指出,某些病毒有诱导体外细胞凋亡的作用,借以限制病毒的扩散。为探讨ＨＳＶ－２在体内诱导细胞凋亡的效果及其形态学特点,用 ＨＳＶ－２ ３３３株感染小鼠阴道,于感染后不同天数处死动物,取其阴道,固定于１０％中性福尔马林,ＴＵＮＥＬ末端标记染色显示凋亡的细胞,光镜下进行原位观察。结果显示：感染后的第１天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞,第２天至１１天凋亡细胞的数量及在上皮内的分布范围达最高水平。早期的凋亡细胞见于感染后所有标本,其核染色质形态及分布似正常细胞,但它被ＴＵＮＥＬ标记染成棕黄色;晚期的凋亡细胞亦见于所有标本,其胞核缩小,染色质浓缩并在核周边集聚,核中心空化。载有凋亡细胞的上皮在阴道粘膜上分布很广,最广的可占全阴道上皮的２／３。同时可见ＨＳＶ．２引起的上皮细胞坏死及疱疹形成,二者均由凋亡细胞包围。凋亡细胞不断地由上皮表面脱落至阴道,未见凋亡小体及吞噬现象。结果提示,ＨＳＶ－２ ３３３株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡,细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展起重要作用。     

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒囊膜蛋白odv—e66基因及其邻近区域的序列分析

杆状病毒ODV－E66蛋白是包涵体来源病毒（occlusion-derived virus,ODV）囊膜的结构蛋白,ODV囊膜对ODV的稳定性和感染性具有重要作用。本文报道了HaSNPV odv-e66基因及其邻近区域共4237bp的核苷酸序列及其分析结果。HaSNPV的odv-e66基因编码区全长2019bp,推测编码一个由672个氨基酸残基组成的,分子量为74.5kD的蛋白质。在起始密码子ATG上游具有杆状病毒晚期转录起始信号ATAAG。与其他杆状病毒ODV－E66的氨基酸序列比较分显示HaSNPV ODV-E66蛋白具有多个保守区域,包括N末端的强疏水功能区、序列中部的一个可能的核定位信号RKIW,两个Leu-xipper以及5个跨膜区。odv-e66基因上游的两个ORF分别与AcMNPV的orf108和orf109具有同源性,下游的ORF与LsNPV的p13基因具有同源性。     

热休克蛋白（HSPs）在胚胎发育中作用的研究进展

在胚胎发育,特别是早期胚胎发育时期,基因转录活跃、蛋白质大量合成,细胞的增殖和分化非常剧烈,细胞的环境在不断变化,细胞对外界刺激十分敏感。这个时期的HSPs变化和作用表现得非常突出。本文简要总结了近十年有关热休克蛋白在胚胎发育中作用的研究成果。根据胚胎发育地HSPs的依赖性、HSPs基因表达的发育阶段特异性和组织特异性、干扰胚胎发育中HSPs表达程序以后导致胚胎异常发育等现象推测：（1）热休克基因与和／功调控体形形成、肌肉及神经分化,而在胚胎发育中具有看家基因的功能;（2）热休克蛋白作为伴侣分子,通过介导新合成的和／或可逆变性的蛋白质正确折叠、装配、转动及促进不需要的和／或不可逆变性的蛋白质降解,参与胚胎的正常发育和保护胚胎不受不良刺激的影响。这方面的深入研究,必将有助于阐明胚胎发育、细胞增殖、细胞分化和去分化、细胞转化、生物适应性等的分子机理。     

超高分辨率毛细管等电聚焦—电喷雾质谱联用方法观察蛋白质亚型

在线的毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用 ,作为一种二维的分离系统 ,对毛细管等电聚焦过程中形成的蛋白质亚型进行了分析。这种分析系统通过使用中性的涂层毛细管 (80cm长 )、动态的毛细管位置调整方法和鞘流液接口得以建立。蛋白质首先在毛细管等电聚焦过程中根据它们等电点的差异得到分离 ,然后被电喷雾质谱鉴定。已聚焦好的蛋白质区带通过结合阴极移动和重力移动的方法从毛细管中流出而进入质谱仪。由于在此特定情况下这种方法具有极高的分辨率 ,有三种血红蛋白A和镰刀型血红蛋白的亚型 (具有几乎相同的电荷分布和分子质量 ,但它们的等电点差异在 0 .0 4到 0 .0 8之间 )和两种乳球蛋白A的亚型 (等电点差异为 0 .6 )被检测到。这些蛋白质亚型的等电点、相对含量和分子质量都通过毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用方法同时得到了确定。     

反义RNA抑制存活素基因的表达对HeLa细胞的影响

为研究存活素（survivin)基因在肿瘤细胞中的应用,通过RT-PCR从HeLa细胞中克隆得到存活素cDNA的编码区,将其反向克隆到可诱导型表达载体pHC中,得到存活素反义RNA表达的载体pHSC,通过脂质体的介导,将pHSC导入HeLa细胞中,经C418（800nmol/L)筛选获得可以诱导表达存活素反义RNA的稳定细胞株HeLa-pHSC。获得的细胞株在2mmol/LZn^2 的诱导下,可以表达存活素反义RNA,从而抑制存活素基因的表达,此时HeLa细胞的增殖受到抑制,对化疗药物的敏感性增加,在G2/M期可以减缓细胞周期的进行性,这表明存活素对维持肿瘤细胞的增殖以及细胞周期的进行具有非常重要的作用。     

Visualization of Golgia apparatus as an intracellular calcium store by laser scanning confocal microscope

Using laser scanning confocal microscopy,we have found that the in cells loaded with fluo-3/AM,highest intracellular Ca^2 in the perinuclear region is associated with the Golgi apparatus.The spatiotemporal subcellular distribution of Ca^2 in living human fibroblasts exposing to calcium-free medium in response to agonists has been investigated.PDGF,which releases Ca^2 from intracellular stores by inositol(1,4,5)-trisphosphate pathway ,produced a biphasic transient rise in intracellular calcium.The initial rise was resulted from a direct release of calcium from the golgi apparatus.Calcium could be also released from and reaccumulated into the Golgi apparatus by the stimulation of thapsigargin,an inhibitor of the Ca^2 transport ATPase of intracellular calcium store,Permeablizing the plasma membrane by 10μM digitonin resulted in the calcium release from the Golgi apparatus and depletion of the internal calcium store.These results suggest that the Golgi apparatus plays a role in Ca^2 regulation in signal transduction.