植物外源基因组成分鉴定方法的研究进展

具外源基因组成分(外源染色体/染色体片段/基因)植株是目前进行基因组学研究以及作物改良的重要材料。迄今为止,已建立了基于性状观测、染色体分析、特异蛋白、DNA序列4种鉴定外源基因组成分的策略。其中,基于DNA序列的分子标记技术是当前鉴定外源基因组成分的主要手段,文中归纳了用于小麦、甘蓝等重要作物外源基因组成分的分子标记,且对简单重复序列(Simple sequence repeat, SSR)、插入缺失(Insertion-deletion,InDel)、单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)等9种标记进行了系统的比较。相比单一的鉴定方法,组合法更全面精准,文中对各组合法的应用情况进行统计和分析,提供了小麦族、芸薹族等作物的最佳鉴定组合。新一代分子标记InDel、SNP易实现高通量检测,对于外源渗入基因的精细定位展现了一定的优越性。此外,可以考虑一些新鉴定方法的加入,如微阵列比较基因组杂交(Microarray-based comparative genomic hybridization,array-CGH)、抑制差减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)。     

鲤鱼乳酸脱氢酶活性的QTL检测

利用SSR分子标记结合“拟测交”策略, 以荷包红鲤抗寒品系和柏氏鲤远缘杂交所产生F1代为亲本及其F2代为作图群体, 应用Windows Map Manager 2.0软件的标记回归法进行乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)活性数量性状基因座单标记定位分析。在乳酸脱氢酶性状的标记回归研究中, 共发现12个标记与LDH性状关联, 对性状的贡献率为4.00%~10.00%, 其中HLJE222达到极显著水平(P<0.01)。为了进一步验证, 利用已有的生物信息学工具, 将与性状连锁的EST序列与公共数据库中的核酸序列进行同源搜索分析, 发现标记HLJE222的EST序列与斑马鱼DAZ associated protein 1的mRNA序列相匹配(相似性为94%), 与公共数据库中的已知蛋白序列进行相似性比较, 同样发现HLJE222的EST与斑马鱼DAZ associated protein 1相匹配(相似性为97%)。结果表明HLJE222位点与影响乳酸脱氢酶活性相关的基因连锁。     

HGV广东株和香港株NS5区部分基因的克隆及序列分析

采用HGV NS5特异的2对引物,对两个香港株和一个广东株HGV-RNA进行逆转录套式PCR扩增,PCR产物克隆入pUC19,重组质粒转化DH5α和JM109菌株.PCR和酶切法鉴定阳性克隆,双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列并进行同源性分析.结果发现核苷酸变异呈散在分布,三株间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3%～94%及97%～99.2%,与已报道的中国株(CN)相比,则同源性分别为90%～91.2%和94%～96.3%,与美国株(PNF2161及R10291)相比,为87.1%～89.5%和95.2%～97%,而与西非株(GBV-C)相比,则达91.4%～93.8%和97%～97.9%.提示HGV NS5区核苷酸和氨基酸序列相对保守,不同HGV株存在一定的地区差异.     

微卫星DNA标记分析德国镜鲤的遗传潜力

结合体重、体长、体高等数量性状, 用30个微卫星分子标记, 评估了3个德国镜鲤群体的遗传潜力, 共检测到287个等位基因, 559种基因型, 片段长度109~400 bp, 有效等位基因数1.1014~6.4665, 观察杂合度0.0968~0.9892, 期望杂合度0.0926~0.8554, 位点多态信息含量0.08787~0.8559, 其中中度多态(0.25≤PIC≤0.5)13个, 高度多态(PIC≥0.5)13个。统计结果显示: 3个群体的遗传潜力处于中度水平, 双来养殖群体的遗传潜力比换新和松浦繁殖群体低。同时, 用30个基因座的不同等位基因和基因型与双来群体的体重、体长、体高进行了连锁分析, 得到2个与镜鲤体长相关的微卫星分子标记(HLJ319, HLJ693)和1个与体高相关的位点(HLJ677), 与体长相关的1个位点(HLJ693)还与体重连锁。将此遗传标记在鲤鱼重组自交系中验证, 结果显示: 主要经济性状相连锁的3个遗传标记中HLJ319与鲤鱼体长性状的QTL定位结果基本一致。     

建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)微卫星DNA亲权鉴定

利用16个微卫星座位对建鲤10个全同胞家系647个子代进行亲权鉴定。Cervus3.0分析表明,16个微卫星位点的平均多态信息含量为0.7025,平均等位基因数为6.63,期望杂合度平均为0.7405。当双亲未知时,累积排除概率为0.999225,已知单亲时的累积排除概率为0.999996,置信度为95%。进一步模拟分析表明,要达到亲权鉴定的要求在双亲未知时通常需要8～12个微卫星位点,已知单亲时需要5～8个微卫星位点。在双亲均未知的情况下进行亲权鉴定,94.6%的后裔找到了其父母本,真实鉴定率低于模拟分析预测值,分析可能是与候选亲本间存在亲缘关系、无效等位基因的存在以及分型错误等因素有关。9个建鲤全同胞家系的鉴定,为今后的遗传图谱构建、QTL定位及分子标记辅助育种研究奠定了基础。     

Harpin的表达及其诱导抗烟草花叶病毒感染的活性

采用人工分段合成梨火疫病细菌(Erwinia amylovora)Harpin基因A、B、C、D片段,然后连接构建全长harpin基因,克隆到pET-23( )表达载体中,在E．coli BL21中表达Harpin蛋白。通过His Bind Resin Ni^ 层析柱纯化,获得Harpin蛋白。经SDS-PAGE和Western blot分析,该蛋白分子量为45kDa。采用叶片穿刺法,5μL 30μg/mL Harpin能诱发烟草叶片的过敏反应。采用叶脉注射法,5μL 30μg/mL Harpin能诱发辣椒叶片的过敏反应。将烟草和辣椒用3μg／mL Harpin喷雾处理5d后,接种烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),观察植株病症,并采用ELISA检测TMV含量。结果表明经Harpin处理的烟草和辣椒对TMV侵染有一定的抑制作用。     

猴头菌液体静置发酵液的化学成分与细胞毒活性

以马铃薯葡萄糖为培养基进行猴头菌液体静置发酵。利用萃取、中压液相色谱(RP-18 gel)、凝胶柱层析(Sephadex LH-20)和硅胶柱层析(Silica gel)从其发酵液中分离并结构鉴定了6个化合物。经核磁共振波谱解析与质谱鉴定,确定化合物的结构为Erinacine P(1)、Orsellinaldehyde(2)、Herierin IV(3)、Erinapyrone A(4)、Erinapyrone B(5)和Erinapyrone C(6)。Erinacine P(1)为首次从猴头菌发酵液中分离获得的二萜糖苷化合物,MTT实验表明其具有较强的细胞毒活性。Orsellinaldehyde(2)为首次从猴头菌中分离到的苯甲醛衍生物。Herierin IV(3)、Erinapyrone A(4)、Erinapyrone B(5)和Erinapyrone C(6)为4个吡喃酮衍生物。     

具有ACC脱氨酶活性的杜仲内生细菌的分离鉴定及其抗菌活性

采用富集筛选法从杜仲根中分离到5株具有ACC脱氨酶活性的内生细菌, 利用纸片法测定它们的抑菌活性, 通过形态特征、生理生化试验和16S rRNA序列分析对分离菌株进行鉴定。结果显示, 5株杜仲内生细菌均具有较高的ACC脱氨酶活性, 其中4株菌对大肠杆菌CGMCC1.1103和枯草芽孢杆菌CGMCC1.769均有较好的抑菌活性, 通过生理生化试验和16S rRNA序列分析, 将菌株JDM-2、JDM-8、JDM-11、JDM-14和JDM-19分别鉴定为Pseudomonas koreensis、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii)、变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)和阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)。     

食品检测仪器设备的应用及展望分析

本文以食品检测仪器设备为研究对象,从典型食品检测仪器设备在食品检测领域中的应用分析以及食品检测仪器设备的发展展望分析这两个方面入手,围绕食品检测仪器设备的应用及展望这一中心问题展开了较为详细的分析与阐述,并据此论证了食品检测仪器设备在食品检测工作开展过程中所发挥的基础与核心地位,希望引起关注。     

颅脑外伤硬膜下血肿术后合并急性脑梗死患者的护理

2004年8月7日我院收治1例脑外伤合并硬膜下血肿的急诊患者，经开颅手术清除血肿，病情逐渐好转。18天后在高压氧治疗过程中，突然发生脑梗死，再次昏迷。经全力抢救，精心护理，患者转危为安。现报告如下。